紫外可見分光光度計(jì)使用中常見問題解析

在一般分光光度計(jì)的使用說明書上，要求儀器預(yù)熱時(shí)間約20分鐘；若是帶微處理器的分光光度計(jì)，開機(jī)后儀器自動(dòng)進(jìn)入自檢(初始化)狀態(tài)，約需1O分鐘左右。在分光光度計(jì)預(yù)熱這個(gè)環(huán)節(jié)上，很多使用者或多或少存在問題，如開機(jī)只預(yù)熱電路系統(tǒng)(不調(diào)節(jié)波長(zhǎng)、打開吸收池暗箱蓋預(yù)熱等)或認(rèn)為初始化過程就是預(yù)熱等等。對(duì)帶微處理器有自檢功能的分光光度計(jì)，開機(jī)后儀器自檢(初始化)結(jié)束后，在測(cè)定窗口上，設(shè)置所需波長(zhǎng)值，用一個(gè)吸收池裝上純凈水置于光路上，調(diào)“0000A”后，預(yù)熱儀器，當(dāng)儀器顯示讀數(shù)不再變化后即可進(jìn)行測(cè)定。

對(duì)于紫外可見分光光度計(jì)，由于有雙光源(鎢燈與氘燈)，化工紫外可見分光光度計(jì)經(jīng)銷商，為了延長(zhǎng)燈的使用壽命，開機(jī)自檢完成后可以關(guān)掉測(cè)定時(shí)不用的光源燈，化工紫外可見分光光度計(jì)經(jīng)銷商，化工紫外可見分光光度計(jì)經(jīng)銷商。 為了測(cè)量吸光值，分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管（photo-multiplier tubes，PMTs）和光敏二極管?；ぷ贤饪梢姺止夤舛扔?jì)經(jīng)銷商

掌握紫外可見光分光光度計(jì)基本工作原理：一定頻率紫外可見光照射所需要分析的目標(biāo)樣品，引起目標(biāo)樣品中價(jià)電子發(fā)生躍遷，從而變現(xiàn)隨著吸收波長(zhǎng)變化而引起光譜變化，形成可供分析數(shù)據(jù)。

以朗伯-比耳定律(Lambert-beer)為理論基礎(chǔ)，特定波長(zhǎng)吸收中，吸收程度正比于試樣成分濃度，因此，可進(jìn)行光譜的定性分析。且根據(jù)吸收與已知濃度標(biāo)樣比較，能進(jìn)行定量分析。

紫外可見光分光光度計(jì)種類及優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比：傳統(tǒng)機(jī)型：?jiǎn)喂馐鳸V、全程密閉、以光柵進(jìn)行分光，標(biāo)樣和測(cè)試樣品分別測(cè)試，全波段掃描時(shí)間至多2min；比例雙光束UV：?jiǎn)喂馐鳸V，全程密閉、經(jīng)光柵再經(jīng)棱鏡，全程密閉、標(biāo)樣和測(cè)試樣品分別測(cè)試、測(cè)試靈敏度降低，全波段分析時(shí)間長(zhǎng)。 氮?dú)庾贤饪梢姺止夤舛扔?jì)生產(chǎn)廠家目前市場(chǎng)上有兩類主流紫外分光光度計(jì)產(chǎn)品:掃描光柵式分光光度計(jì)和固定光柵式分光光度計(jì)。

自從60年前紫外分光光度計(jì)出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室的工作臺(tái)之后，已經(jīng)形成了一種能解決大部分難題的儀器，從單一波長(zhǎng)的測(cè)量到高性能多光譜的測(cè)量分析。實(shí)驗(yàn)室選擇時(shí)需要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的需要和目的用途來(lái)考慮，光學(xué)構(gòu)造和光源、探測(cè)方法、樣品類型和數(shù)據(jù)處理等都是要考慮的因素。

光學(xué)構(gòu)造（OPTICALCONFIGURATION）

一般來(lái)說，紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類。顧名思義，單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測(cè)量。一束給定波長(zhǎng)的光通過對(duì)照物，然后再通過實(shí)際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。

雙光束型則是通過一個(gè)斬光輪（mirroredchopperwheel）將一束光分成兩束，分別測(cè)量對(duì)照樣品和實(shí)際樣品?？梢訫IN光漂移（lampdrift）和減少測(cè)量時(shí)間。一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來(lái)代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測(cè)量對(duì)照樣品和目的樣品。因?yàn)樵黾恿藴y(cè)量的速度，所以雙光束分光光度計(jì)在測(cè)量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。

光源和檢測(cè)方法（LIGHTSOURCESANDDETECTION）分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。實(shí)驗(yàn)室研究人員希望省錢購(gòu)入專門儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波長(zhǎng)下測(cè)量樣品。果果需要更大的靈活性，研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器，可以程序性地進(jìn)行ELISAs分析和比色分析。

紫外分光光度計(jì)一般覆蓋190nm和380nm波長(zhǎng)，通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。VarianofPaloAlto公司的CaryDeepUV和HitachiHighTechnologiesofTokyo的U-7000AutomatedVacuumUVSystem就是這樣的儀器。

一些儀器具有多種光源供選擇：紫外光、可見光和甚至紅外光（780nm至3,000nm）。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分（大約380nm到800nm）。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。紫外分光光度計(jì)儀器使用一定周期后，由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作。

紫外可見分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)

紫外可見分光光度計(jì)的工作原理是由光源發(fā)出連續(xù)輻射光，經(jīng)單色器按波長(zhǎng)大小色散為單色光，單色光照射到吸收池，一部分被樣品溶液吸收，未被吸收的光經(jīng)檢測(cè)器的光電管將光強(qiáng)度變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)變化，并經(jīng)信號(hào)顯示系統(tǒng)調(diào)制放大后，顯示或打印出吸光度A（或透射比T），完成測(cè)定。

一、光源

光源是提供符合要求的入射光的裝置，紫外可見分光光度計(jì)可見光區(qū)常用的光源為鎢燈，紫外光區(qū)常用的光源為氫燈或氘燈。

1.1．鎢燈

鎢燈是常用的可見光光源，它可發(fā)射的波長(zhǎng)為325~2500nm的連續(xù)光譜，其中適宜的使用波長(zhǎng)范圍為320~1000nm，因此，也可用做近紅外光源。電能將鎢燈加熱到白熾時(shí)，發(fā)出的光強(qiáng)度在各波段的分布隨燈絲溫度而變化。燈絲的溫度取決于電源電壓。電源電壓的微小波動(dòng)都會(huì)引起鎢光強(qiáng)度的很大變化。因此必須使用穩(wěn)壓電源供電，鎢燈工作電壓為12V，也可以使用12V的直流電源供電。鎢燈的壽命一般可達(dá)10000小時(shí)以上。

目前很多光度計(jì)采用鹵鎢燈代替鎢燈，如7230G型、752PLUS型分光光度計(jì)等。鹵鎢燈具有較高的發(fā)光效率和較長(zhǎng)的使用壽命。 大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。與PC機(jī)一起聯(lián)用，需要從制造商購(gòu)買軟件?；ぷ贤饪梢姺止夤舛扔?jì)經(jīng)銷商

在選擇紫外可見分光光度計(jì)之前， 需要了解儀器的基礎(chǔ)構(gòu)架，有哪些地方是消耗品，有想哪些需要維修保養(yǎng)?；ぷ贤饪梢姺止夤舛扔?jì)經(jīng)銷商

紫外可見分光光度計(jì)的軟件功能可以極大地提升儀器的使用性能和價(jià)值，現(xiàn)代分光光度計(jì)生產(chǎn)廠商都非常重視儀器配套軟件的開發(fā)。除了儀器控制軟件和通用數(shù)據(jù)分析處理軟件外，很多儀器針對(duì)不同行業(yè)應(yīng)用開發(fā)了**分析軟件，給儀器使用者帶來(lái)了極大的便利。

紫外可見分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)一般地，紫外可見分光光度計(jì)主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測(cè)系統(tǒng)組成，如圖1所示。光源發(fā)出的復(fù)合光通過單色器被分解成單色光，當(dāng)單色光通過樣品室時(shí)，一部分被樣品吸收，其余未被吸收的光到達(dá)檢測(cè)器，被轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，經(jīng)電子電路的放大和數(shù)據(jù)處理后，通過顯示系統(tǒng)給出測(cè)量結(jié)果。 化工紫外可見分光光度計(jì)經(jīng)銷商

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