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PC抽提的關(guān)鍵是,一要混勻徹底,二要用量足夠。徹底混勻,才能確保苯酚與蛋白質(zhì)的充分接觸,使蛋白質(zhì)完全變性,青島全血核算提取試劑盒推薦,青島全血核算提取試劑盒推薦。許多人總是擔(dān)心混勻的劇烈程度是否會對核酸,尤其是基因組 DNA 造成破壞,實(shí)際上大可不必如此小心。劇烈的混勻操作,是會部分打斷大分子的基因組 DNA,但該破壞作用不會強(qiáng)烈到 DNA變成 10kb 以內(nèi)的小片段。手劇烈晃動混勻后,基因組 DNA 的片段,大部分會大于 20kb,這個(gè)大小,青島全血核算提取試劑盒推薦,除了一些特別的要求外,對 PCR和酶切,都是完全適用的。核酸提取儀可根據(jù)試劑優(yōu)化提純方案,配合精確的溫育時(shí)間。青島全血核算提取試劑盒推薦
產(chǎn)品特點(diǎn): 1.高純度、高得率 可根據(jù)試劑優(yōu)化提純方案,配合精確的溫育時(shí)間,實(shí)現(xiàn)了更高的提取效率,提取的DNA/RNA純度高,可以直接用于PCR和RT-PCR。 2.結(jié)果穩(wěn)定 避免人工操作引起的差異及錯誤,結(jié)果溫度,重復(fù)性好。 3.自我清潔 具有內(nèi)置可定時(shí)紫外消毒功能。 4.污染控制 嚴(yán)格控制孔間污染及批次間污染,杜絕交叉污染。 5.試劑開放 可使用各種磁珠法提取試劑。 6.安全可靠 開門自動鎖定保障操作安全;封閉提取倉,一次性耗材,好大程度減少操作者與試劑的接觸;智能化操作,避免有害物質(zhì)對人體的危害。青島全血核算提取試劑盒推薦核酸提取通過離心將DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片形成的沉淀分離。
洗滌: 洗滌首先一定要將沉淀懸浮起來;第二就是要有一定的時(shí)間,尤其是當(dāng)核酸沉淀比較大時(shí)(使核酸沉淀好終蓬松);第三是少量多次;第四則是去上清要徹底。教科書中的操作基本上都是“倒掉上清后倒置在吸水紙上片刻”,這一描述本身沒有問題,且十分方便,但因?yàn)樗麃碜試?,自然就有了“水土不服”的問題。如果離心管是經(jīng)過硅化的,因?yàn)橐后w幾乎不掛壁,所以上清可以去除得非常徹底;好的管子,即使沒有經(jīng)過硅化,殘留量也非常少,也沒有什么問題;差的管子,液體的掛壁非??捎^,其殘留量多到會影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。較少不受管子質(zhì)量影響的操作,就是倒掉液體后再短暫離心,將殘液用移液器吸出。 一定要牢記的是,殘液中都含有上一步操作中的雜質(zhì),其殘留量與混勻程度、核酸沉淀的大小都有關(guān)。揮發(fā)時(shí)去掉的是乙醇,雜質(zhì)是不會被揮發(fā)去除的。 另外,核酸沉淀的大小及裂解液的裂解能力也決定了洗滌的強(qiáng)度。沉淀越大,裂解液的裂解能力越強(qiáng),洗滌越要徹底:放置時(shí)間相對要長一點(diǎn),洗滌次數(shù)也要考慮增加。好關(guān)鍵的,洗滌一定要用室溫的 75% 乙醇。
純化方法: 評價(jià) PC 抽提/醇沉淀方法,是一個(gè)**過時(shí)的方法。穩(wěn)定、可靠、經(jīng)濟(jì)、方便。PC抽提可以徹底去除蛋白質(zhì),醇沉淀可以去除鹽,對于一般的干凈的樣品 (雜質(zhì)為蛋白質(zhì)),該方法完全可以獲得高質(zhì)量的核酸。雖然每次 PC抽提都會損失一部分核酸(因?yàn)椴豢赡軐⑺嗳恳迫?,以及低濃度核酸的醇沉淀效率低,但這些問題都可以靠操作的調(diào)整而得以解決或者減少影響。該方法的zui大的問題是不適合大規(guī)模抽提。 PC抽提是去除蛋白質(zhì)的一個(gè)非常有效的手段。苯酚能使蛋白質(zhì)變性,變性后的蛋白質(zhì)從水相中被析出,處于苯酚中或者苯酚/水相之間。核酸提取利用高鹽低PH結(jié)合核酸,低鹽高PH值洗脫,來分離純化核酸。
核酸的溶解和保存: 純化后的核酸,好后多使用水或者低濃度緩沖液溶解;其中 RNA 以水為主,DNA 則多以弱堿性的 Tris 或者 TE 溶解。經(jīng)典的 DNA溶解方法多提倡使用 TE 溶解,認(rèn)為 EDTA 可以減少 DNA 被可能殘留下來的 DNase 降解的風(fēng)險(xiǎn);如果操作過程控制得當(dāng),DNase的殘留幾乎是可以忽略的,完全可以直接使用 Tris 或者水 (pH 接近 7) 溶解 DNA。 基本上,核酸在保存中的穩(wěn)定性,與溫度成反比,與濃度成正比。雖然也有部分實(shí)驗(yàn)人員發(fā)現(xiàn),-20C 保存的 DNA 比 -70C 保存的穩(wěn)定,核酸提取保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性。重慶核算提取試劑盒廠家
核酸提取再用醇將核酸沉淀下來,實(shí)現(xiàn)核酸與鹽的分離。青島全血核算提取試劑盒推薦
核酸的提?。?RNA提取條件較 DNA要求嚴(yán)格 ,主要是因 為臨床標(biāo)本及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境 在大量對RNA有強(qiáng)烈降解作用 RNase. RNase 是一類生 物活性非常穩(wěn)定的酶類 .這種酶耐 核酸的提取核酸包括DNA、RNA 兩種分子,在細(xì)胞中都是以與蛋白質(zhì)結(jié)合的狀態(tài)存在,核酸提取的主 要步驟為: 裂解細(xì)胞 去除與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)以及多糖、脂類等生物大分子,去除其他不需要的核酸分子,如提 取DNA 分子時(shí),應(yīng)去除RNA,反之亦然。 沉淀核酸 純化核酸,去除鹽類,有機(jī)劑等雜質(zhì) (一)DNA提取的經(jīng)典方法 DNA 提取的經(jīng)典方法,即所謂的酚-氯仿提取法。青島全血核算提取試劑盒推薦
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/2408137.html
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