核酸的提取 核酸包括 DNA、RNA 兩種分子，在細(xì)胞中都是以與蛋白質(zhì)結(jié)合的狀態(tài)存在，重慶全血核酸提取供應(yīng)商，核酸提取的主 要步驟為： 裂解細(xì)胞 去除與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)以及多糖、脂類等生物大分子，去除其他不需要的核酸分子，如提 取 DNA 分子時，應(yīng)去除 RNA，反之亦然。 沉淀核酸 純化核酸，去除鹽類，有機(jī)劑等雜質(zhì) (一)DNA 提取的經(jīng)典方法 DNA 提取的經(jīng)典方法，即所謂的酚-氯仿提取法。因為使用兩種不同的有機(jī)溶劑交替抽提更 容易將蛋白除去，提取次序為酚，重慶全血核酸提取供應(yīng)商、酚/氯仿（1：1），重慶全血核酸提取供應(yīng)商、氯仿，這種方法提取的 DNA 純度高、 片段大、效果好，缺點(diǎn)是較為繁瑣。 核酸提取在有機(jī)相中主要是脂類物質(zhì)，蛋白質(zhì)位于兩相之間。重慶全血核酸提取供應(yīng)商

核酸的基本結(jié)構(gòu)單元是核苷酸，核苷酸含有含氮堿基、戊糖和磷酸3種組分。堿基與戊糖構(gòu)成核苷，核苷的磷酸酯為核苷酸。DNA和RNA中的戊糖不同，RNA中的戊糖是D-核糖；DNA不含核糖而含D-2-脫氧核糖(核糖中2位碳原子上的羥基為氫所取代)。核酸就是根據(jù)其中戊糖種類來分類的，DNA和RNA的堿基也有所不同。核酸的理化性質(zhì) RNA和核苷酸的純品都呈白色粉末或結(jié)晶，DNA則為白色類似石棉樣的纖維狀物。除肌苷酸、鳥苷酸具有鮮味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。DNA、RNA和核苷酸都是極性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，它們的鈉鹽比游離核酸易溶于水，RNA鈉鹽在水中溶解度可達(dá)40g/L，DNA鈉鹽在水中為10g/L，呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。天然狀態(tài)的DNA 是以脫氧核糖**白(DNP)形式存在于細(xì)胞核中。要從細(xì)胞中提取DNA 時，先把DNP抽提出來，再把P除去，再除去細(xì)胞中的糖，RNA 及無機(jī)離子等，從中分離DNA。重慶全血核酸提取供應(yīng)商核酸提取不需要與全基因組測序?qū)嶒炏嗤腄NA質(zhì)量。

標(biāo)本通常由醫(yī)護(hù)人員采集，應(yīng)注意避免溶血，如為血漿標(biāo)本注意抗凝劑的選 擇，一 般用 EDTA-Na2 或枸櫞酸納，不可使用肝素。標(biāo)本為全血時，及時分離出血漿，提取細(xì)菌 DNA 進(jìn)行檢測。 HCV：檢測 RNA 細(xì)菌。由于 RNA 極易降解，標(biāo)本的制備和保存方式往往可以影響測定結(jié) 果。若用血漿標(biāo)本，應(yīng)使用 EDTA 抗凝。嚴(yán)禁使用肝素，因其對 PCR 擴(kuò)增有壓抑作用, 且 無法在核酸提取過程中去除?？鼓?6 小時內(nèi)分離血漿。如用血清標(biāo)本，則應(yīng)盡快（2 小時 內(nèi)）分離血清 進(jìn)行檢測，或-20oC 保存。 全血標(biāo)本 通常用來提取外周血單個核細(xì)胞核酸：如基因組 DNA、線粒體 DNA、總 RNA 等。 抗凝劑：一般使用 EDTA-Na2、枸櫞酸納，不使用肝素。 前處理： 1）加適量的紅細(xì)胞裂解液（破膜液），裂解全血中的紅細(xì)胞。 2）再加適量的細(xì)胞核裂液（破核液），裂解白細(xì)胞中的細(xì)胞核，使核內(nèi) DNA 釋放出來。 3）然后再加 SDS（十二烷基硫酸鈉）等去污劑，溶解脂蛋白，解聚**白。 SDS 可與蛋白 質(zhì)結(jié)成復(fù)合物， 使蛋白質(zhì)變性沉淀， SDS 在以后的核酸提取過 程中必須 但 除去。

裂解方法的評價： 含蛋白酶的裂解方法，可以認(rèn)為是抽提基因組 DNA 的選擇。裂解包括膜蛋白的游離和與基因組 DNA相連接的蛋白質(zhì)的游離。蛋白酶的作用是使蛋白質(zhì)變小，故而對蛋白質(zhì)的游離有巨大的促進(jìn)作用；同時，巨大的基因組 DNA是很容易"纏"住大分子的東西的，蛋白質(zhì)被蛋白酶消化變小后，則不容易被基因組 DNA"纏"住，有利于蛋白質(zhì)在純化操作中的去除，使zui終獲得的基因組 DNA 的純度更高。另外一個思路是，如果基因組 DNA 與蛋白質(zhì)"纏"在一起。核酸提取其中還有和DNA結(jié)合的組蛋白，我們可以給里邊加入蛋白酶等方法來去除。

提取方法： 1.表面活性劑快速制備法 使用Triton X-100A或NP40表面活性劑對細(xì)胞破碎，然后使用蛋白酶K或酚將蛋白去除，使用乙醇沉淀或透析。 2.加熱法快速制備 溫度96℃-100℃加熱5min，之后離心后取上清，能夠在PCR反應(yīng)時使用。 3.堿變性快速制備 首先使用NaOH作用20min，再將HCI加入中和，離心后取上清，含有少量DNA。 4.玻璃棒纏繞法 使用鹽酸胍對細(xì)胞進(jìn)行裂解，在乙醇上鋪上裂解物，然后在界面使用帶鉤或U型玻璃棒輕攪，在玻棒繞DNA沉淀液，使得80kbDNA生成。核酸提取儀可使用各種磁珠法提取試劑。重慶全血核酸提取供應(yīng)商

核酸提取防止核酸的生物降解。重慶全血核酸提取供應(yīng)商

小型自動核酸提取儀： 小型的自動化儀器是通過運(yùn)行結(jié)構(gòu)的特殊性來達(dá)到自動提取核酸的目的，可以在任何實驗室得到應(yīng)用。 根據(jù)提取原理不同劃分 采用離心柱法的儀器 離心柱法核酸提取儀主要采用離心機(jī)和自動移液裝置相結(jié)合的方法，通量一般在1-12個樣本，操作時間和手工提取差不多，并不能提高實際工作效率，且價格昂貴，不同型號儀器的耗材也不能通用，*適合經(jīng)費(fèi)充足的大型實驗室使用。自動液體工作站是功能非常強(qiáng)大的設(shè)備，液體分液、吸液等自動完成，甚至能通過整合擴(kuò)增、檢測等功能，實現(xiàn)標(biāo)本提取、擴(kuò)增、檢測全自動化。提取核酸只是其功能的一個應(yīng)用，不太適合常規(guī)實驗室提取核酸，一般都應(yīng)用在單一類標(biāo)本并且一次提取標(biāo)本量非常大(至少96個，一般幾百個)的實驗需求上。自動工作站的平臺建立及平臺的運(yùn)作，需要比較大的資金。重慶全血核酸提取供應(yīng)商

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