核酸提取純化原則和要求 1.保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性 2.排除其它分子的污染（如提取DNA時(shí)排除RNA的干擾） 3.核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有壓抑作用的有機(jī)溶劑和高濃度的金屬離子 4.盡可能降低蛋白質(zhì)、多糖和脂類等大分子物質(zhì)核酸提取純化方法 酚/氯仿抽提法 1956年發(fā)明，通過酚/氯仿處理細(xì)胞破碎液或者組織勻漿后，在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分，在有機(jī)相中主要是脂類物質(zhì)，上海全血核酸提取批發(fā)，蛋白質(zhì)位于兩相之間，上海全血核酸提取批發(fā)。 醇沉淀法 乙醇能夠消除核酸的水化層，上海全血核酸提取批發(fā)，使帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)暴露出來，NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團(tuán)結(jié)合，形成沉淀。核酸提取方法已經(jīng)成為了 RNA 抽提的主流。上海全血核酸提取批發(fā)

PC抽提的關(guān)鍵是，一要混勻徹底，二要用量足夠。徹底混勻，才能確保苯酚與蛋白質(zhì)的充分接觸，使蛋白質(zhì)完全變性。許多人總是擔(dān)心混勻的劇烈程度是否會(huì)對(duì)核酸，尤其是基因組 DNA 造成破壞，實(shí)際上大可不必如此小心。劇烈的混勻操作，是會(huì)部分打斷大分子的基因組 DNA，但該破壞作用不會(huì)強(qiáng)烈到 DNA變成 10kb 以內(nèi)的小片段。手劇烈晃動(dòng)混勻后，基因組 DNA 的片段，大部分會(huì)大于 20kb，這個(gè)大小，除了一些特別的要求外，對(duì) PCR和酶切，都是完全適用的。上海自動(dòng)核算提取設(shè)備批發(fā)核酸提取儀靈活、高效地定義您的應(yīng)用，可滿足不同試劑要求。

含 CTAB的裂解液，幾乎成為富含多糖的樣品，如細(xì)菌、植物的基因組 DNA 抽提的選擇裂解方法。該方法成功與否與兩個(gè)因素有關(guān)：一是 CTAB的質(zhì)量，二是洗滌的徹底程度。CTAB 的質(zhì)量對(duì)裂解效率有很大的影響，而且，似乎還說不清楚原因，因?yàn)榧词故峭还旧a(chǎn)的純度一樣的CTAB，批號(hào)不同，效果就可能差別很大。洗滌去除 CTAB 要比其它的鹽難一些，同時(shí)， CTAB的少量殘留也會(huì)對(duì)酶活性有巨大影響，所以洗滌是否徹底也是該方法成功與否的關(guān)鍵。裂解時(shí)的溫度，多使用65C；但如果發(fā)現(xiàn)降解嚴(yán)重或者得率太低，可以試一下 37C – 45C 這個(gè)相對(duì)低溫的區(qū)域。 SDS堿裂解法是質(zhì)粒抽提的選擇裂解方法，具有快速、得率高、幾乎無基因組 DNA污染的特點(diǎn)。控制好裂解液/菌體的比例和操作的溫和是該方法成功的關(guān)鍵。

CTAB法是提取DNA主要的方法，其他方法還有生物方式：酶法，化學(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法，物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。 細(xì)胞器DNA、細(xì)胞核DNA。 單鏈環(huán)狀、雙鏈線性、雙鏈環(huán)狀。 組織DNA、細(xì)胞懸液DNA、、細(xì)菌DNA、質(zhì)粒DNA、真核生物DNA、細(xì)菌DNA。 提取原則 1.應(yīng)當(dāng)將如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等其他生物大分子的污染應(yīng)降低到Zdi程度。 2.應(yīng)當(dāng)盡可能去除如RNA的其他核酸分子。 3.使核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性得以保證。 4.不應(yīng)當(dāng)有對(duì)酶有壓抑作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子存在于核酸樣品中。核酸提取使核酸與二氧化硅基質(zhì)結(jié)合。

核酸提取純化方法： 1.層析柱法 通過特殊硅基質(zhì)吸附材料，能夠特定吸附DNA，而RNA和蛋白質(zhì)順利通過，然后利用高鹽低PH結(jié)合核酸，低鹽高PH值洗脫，來分離純化核酸。 2.熱裂解堿法 堿法提取主要是利用共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線性染色質(zhì)在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來分離他們，在堿性下，變性蛋白是可溶的。 3.煮沸裂解法 加熱處理DNA溶液，利用線性DNA分子的特性，通過離心將DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片形成的沉淀分離。 4.納米磁珠法 運(yùn)用納米技術(shù)對(duì)超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后，制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合。利用氧化硅納米微球的超順磁性，在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下，從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。核酸提取在有機(jī)相中主要是脂類物質(zhì)，蛋白質(zhì)位于兩相之間。北京核酸提取銷售公司

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不要因?yàn)?1ml 裂解液可以抽提 100mg 樣品，就一定使用 100mg樣品。裂解液的用量，表面上與抽提的結(jié)果 (純度及得率)沒有關(guān)系，然而，在實(shí)際操作中，對(duì)結(jié)果是有比較大的影響的。裂解液的用量原則是：確保能徹底裂解樣品，同時(shí)使裂解體系中核酸的濃度適中。濃度過低，將導(dǎo)致沉淀效率低，影響得率；濃度過高，去除雜質(zhì)的過程復(fù)雜且不徹底，導(dǎo)致純度下降。另外，裂解液的用量是以樣品中蛋白質(zhì)的含量為基準(zhǔn)的，而不是以核酸含量為基準(zhǔn)，這一點(diǎn)務(wù)必牢記。上海全血核酸提取批發(fā)

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