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核酸提取純化方法: 1.層析柱法 通過(guò)特殊硅基質(zhì)吸附材料,能夠特定吸附DNA,而RNA和蛋白質(zhì)順利通過(guò),然后利用高鹽低PH結(jié)合核酸,低鹽高PH值洗脫,來(lái)分離純化核酸。 2.熱裂解堿法 堿法提取主要是利用共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線性染色質(zhì)在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來(lái)分離他們,在堿性下,變性蛋白是可溶的。 3.煮沸裂解法 加熱處理DNA溶液,利用線性DNA分子的特性,通過(guò)離心將DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片形成的沉淀分離。 4.納米磁珠法 運(yùn)用納米技術(shù)對(duì)超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行改良和表面修飾后,制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合,濟(jì)南全血核算提取試劑盒報(bào)價(jià)。利用氧化硅納米微球的超順磁性,在Chaotropic鹽(鹽酸胍,濟(jì)南全血核算提取試劑盒報(bào)價(jià)、異硫氰酸胍等)和外加磁場(chǎng)的作用下,從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA,濟(jì)南全血核算提取試劑盒報(bào)價(jià)。核酸提取儀實(shí)現(xiàn)了更高的提取效率,提取的DNA/RNA純度高。濟(jì)南全血核算提取試劑盒報(bào)價(jià)
磁珠法核酸提取,具有傳統(tǒng)DNA提取方法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì),主要體現(xiàn)在[1-2]:①能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化、大批量操作,目前已有96孔的核酸自動(dòng)提取儀,用一個(gè)樣品的提取時(shí)間即可實(shí)現(xiàn)對(duì)96個(gè)樣品的處理,符合生物學(xué)高通量的操作要求,使得傳染性疾病爆發(fā)時(shí)能夠進(jìn)行快速及時(shí)的應(yīng)對(duì),這一特點(diǎn)使得傳統(tǒng)方法望塵莫及;②操作簡(jiǎn)單、用時(shí)短,整個(gè)提取流程只有四步,大多可以在36-40分鐘內(nèi)完成;③安全無(wú)毒,不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑,對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的傷害減少到好少,完全符合現(xiàn)代環(huán)保理念;④磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度大。天津自動(dòng)核算提取試劑盒哪家好核酸提取減少物理因素對(duì)核酸的降解,機(jī)械剪切力和高溫。
核酸提取純化原則和要求 1.保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性 2.排除其它分子的污染(如提取DNA時(shí)排除RNA的干擾) 3.核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有壓抑作用的有機(jī)溶劑和高濃度的金屬離子 4.盡可能降低蛋白質(zhì)、多糖和脂類等大分子物質(zhì)核酸提取純化方法 酚/氯仿抽提法 1956年發(fā)明,通過(guò)酚/氯仿處理細(xì)胞破碎液或者組織勻漿后,在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分,在有機(jī)相中主要是脂類物質(zhì),蛋白質(zhì)位于兩相之間。 醇沉淀法 乙醇能夠消除核酸的水化層,使帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)暴露出來(lái),NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團(tuán)結(jié)合,形成沉淀。
核酸抽提原理:去污劑則是通過(guò)使蛋白質(zhì)變性,破壞膜結(jié)構(gòu)及解開(kāi)與核酸相連接的蛋白質(zhì),從而實(shí)現(xiàn)核酸游離在裂解體系中。裂解體系中還可能加入蛋白酶;利用蛋白酶將蛋白質(zhì)消化成小的片段,促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)的分開(kāi),同時(shí),也便于后面的純化操作以及獲得更純的核酸。也有直接使用高濃度的蛋白質(zhì)變性劑 (如GIT、GuHCl 等) 裂解的,該方法已經(jīng)成為了 RNA 抽提的主流,卻不是基因組 DNA 抽提的主流。好常用的純化方法,一是PC 抽提 + 醇沉淀,二是介質(zhì)純化。第一種方法是利用 PC對(duì)裂解體系進(jìn)行反復(fù)抽提以去除蛋白質(zhì),實(shí)現(xiàn)核酸與蛋白質(zhì)的分離;再用醇將核酸沉淀下來(lái),實(shí)現(xiàn)核酸與鹽的分離。核酸提取醇沉淀方法,是一個(gè)**過(guò)時(shí)的方法。
核酸提取的其他方法: 胍鹽提取結(jié)合二氧化硅吸附法 二氧化硅具有特異吸附核酸的特性,異硫氰酸胍可使細(xì)胞裂解,因此在高濃度異硫氰酸胍存 在下,從細(xì)胞(包括細(xì)菌)或細(xì)菌顆粒中釋放出來(lái)的核酸成分可以結(jié)合在二氧化硅上,利用此 特性可提取血液和尿液中 DNA 和 RNA。 2.TRIzol 試劑提取 RNA 方法: TRIzol 試劑盒是由 GIBCO BRI 公司推出的產(chǎn)品,其操作方法簡(jiǎn)單方便,一小時(shí)內(nèi)即可完 成。 TRIzol 試劑裂解細(xì)胞, 用 再加入氯仿, 離心后可見(jiàn)三層, 上層為透明的水相含有 RNA, 中間層含 DNA,下層為紅色的有機(jī)相,含蛋白質(zhì)。 核酸提取使核酸與二氧化硅基質(zhì)結(jié)合。濟(jì)南核酸提取銷售公司
核酸提取可以多種方式進(jìn)行應(yīng)用。濟(jì)南全血核算提取試劑盒報(bào)價(jià)
標(biāo)本通常由醫(yī)護(hù)人員采集,應(yīng)注意避免溶血,如為血漿標(biāo)本注意抗凝劑的選 擇,一 般用 EDTA-Na2 或枸櫞酸納,不可使用肝素。標(biāo)本為全血時(shí),及時(shí)分離出血漿,提取細(xì)菌 DNA 進(jìn)行檢測(cè)。 HCV:檢測(cè) RNA 細(xì)菌。由于 RNA 極易降解,標(biāo)本的制備和保存方式往往可以影響測(cè)定結(jié) 果。若用血漿標(biāo)本,應(yīng)使用 EDTA 抗凝。嚴(yán)禁使用肝素,因其對(duì) PCR 擴(kuò)增有壓抑作用, 且 無(wú)法在核酸提取過(guò)程中去除??鼓?6 小時(shí)內(nèi)分離血漿。如用血清標(biāo)本,則應(yīng)盡快(2 小時(shí) 內(nèi))分離血清 進(jìn)行檢測(cè),或-20oC 保存。 全血標(biāo)本 通常用來(lái)提取外周血單個(gè)核細(xì)胞核酸:如基因組 DNA、線粒體 DNA、總 RNA 等。 抗凝劑:一般使用 EDTA-Na2、枸櫞酸納,不使用肝素。 前處理: 1)加適量的紅細(xì)胞裂解液(破膜液),裂解全血中的紅細(xì)胞。 2)再加適量的細(xì)胞核裂液(破核液),裂解白細(xì)胞中的細(xì)胞核,使核內(nèi) DNA 釋放出來(lái)。 3)然后再加 SDS(十二烷基硫酸鈉)等去污劑,溶解脂蛋白,解聚**白。 SDS 可與蛋白 質(zhì)結(jié)成復(fù)合物, 使蛋白質(zhì)變性沉淀, SDS 在以后的核酸提取過(guò) 程中必須 但 除去。 濟(jì)南全血核算提取試劑盒報(bào)價(jià)
文章來(lái)源地址: http://www.cdcfah.com/cp/2434413.html
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