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核酸的提?。篟NA提取條件較DNA要求嚴(yán)格,主要是因?yàn)榕R床標(biāo)本及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境在大量對(duì)RNA有強(qiáng)烈降解作用RNase.RNase是一類生物活性非常穩(wěn)定的酶類,天津核算提取設(shè)備供應(yīng)商.這種酶耐核酸的提取核酸包括DNA,天津核算提取設(shè)備供應(yīng)商、RNA兩種分子,在細(xì)胞中都是以與蛋白質(zhì)結(jié)合的狀態(tài)存在,核酸提取的主要步驟為:裂解細(xì)胞去除與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)以及多糖、脂類等生物大分子,去除其他不需要的核酸分子,如提取DNA分子時(shí),應(yīng)去除RNA,反之亦然。沉淀核酸純化核酸,去除鹽類,天津核算提取設(shè)備供應(yīng)商,有機(jī)劑等雜質(zhì)(一)DNA提取的經(jīng)典方法DNA提取的經(jīng)典方法,即所謂的酚-氯仿提取法。核酸提取儀開門自動(dòng)鎖定保障操作安全。天津核算提取設(shè)備供應(yīng)商
經(jīng)典的核酸提取方法通常是加去污劑(SDS 等)裂解細(xì)胞,經(jīng)蛋白酶處理、有機(jī)溶劑 提取及乙醇沉淀等步驟。 由于樣本的處理及保存對(duì) DNA 和 RNA(尤其是 RNA)的影響較大,因此在核酸測(cè)定 時(shí)標(biāo)本的處理及適當(dāng)保存對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確有效非常重要。 臨床常見的標(biāo)本有血清(漿)、全血、分泌物、棉拭子、膿液、體液、新鮮組織、石蠟 切片等,這些臨床標(biāo)本的處理和保存方法各有不同。 臨床標(biāo)本的處理 血清(漿)標(biāo)本 _x000c_一些病原體,如乙肝細(xì)菌(HBV)、丙肝細(xì)菌(HCV)、人類免疫缺陷細(xì)菌(HIV) 等的 PCR 檢測(cè)常采用血清或血漿標(biāo)本。武漢自動(dòng)核算提取設(shè)備供應(yīng)商核酸提取從而實(shí)現(xiàn)核酸游離在裂解體系中。
什么是核酸:由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,為生命的好基本物質(zhì)之一。核酸較廣存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物內(nèi)、生物體內(nèi)的核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成白。不同的核酸,其化學(xué)組成、核苷酸排列順序等不同。根據(jù)化學(xué)組成不同,核酸可分為核糖核酸(簡(jiǎn)稱RNA)和脫氧核糖核酸(簡(jiǎn)稱DNA)。DNA是儲(chǔ)存、復(fù)制和傳遞遺傳信息的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。提取核酸的方法及其優(yōu)缺點(diǎn):1.保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性。2.排除其它分子的污染。核酸提取應(yīng)注意的問題:1.簡(jiǎn)化步驟,縮短提取時(shí)間2.減少化學(xué)因素對(duì)核酸的降解3.減少物理因素對(duì)核酸的降解:機(jī)械剪切力和高溫4.防止核酸的生物降解。
含 CTAB的裂解液,幾乎成為富含多糖的樣品,如細(xì)菌、植物的基因組 DNA 抽提的選擇裂解方法。該方法成功與否與兩個(gè)因素有關(guān):一是 CTAB的質(zhì)量,二是洗滌的徹底程度。CTAB 的質(zhì)量對(duì)裂解效率有很大的影響,而且,似乎還說不清楚原因,因?yàn)榧词故峭还旧a(chǎn)的純度一樣的CTAB,批號(hào)不同,效果就可能差別很大。洗滌去除 CTAB 要比其它的鹽難一些,同時(shí), CTAB的少量殘留也會(huì)對(duì)酶活性有巨大影響,所以洗滌是否徹底也是該方法成功與否的關(guān)鍵。裂解時(shí)的溫度,多使用65C;但如果發(fā)現(xiàn)降解嚴(yán)重或者得率太低,可以試一下 37C – 45C 這個(gè)相對(duì)低溫的區(qū)域。 SDS堿裂解法是質(zhì)粒抽提的選擇裂解方法,具有快速、得率高、幾乎無基因組 DNA污染的特點(diǎn)??刂坪昧呀庖?菌體的比例和操作的溫和是該方法成功的關(guān)鍵。核酸提取為了避免觸電事故,儀器的輸入電源線必須接地。
注意事項(xiàng): 1. 儀器的安裝環(huán)境:正常的大氣壓(海拔高度應(yīng)該低于3000m)、溫度20-35℃、典型使用溫度25℃、相對(duì)濕度10%-80%、暢通流入的空氣為35℃或以下。 2. 避免將儀器放置在靠近熱源的地方,如電暖爐;同時(shí)為防止電子元件的短路,應(yīng)避免水或者其他液體濺入其中。 3. 進(jìn)風(fēng)口和排風(fēng)口均位于儀器背面,同時(shí)避免灰塵或纖維在進(jìn)風(fēng)口聚集,保持風(fēng)道的暢通。 4. 核酸提取儀離其他豎直面至少10cm, 5. 儀器接地:為了避免觸電事故,儀器的輸入電源線必須接地。 6. 遠(yuǎn)離帶電電路:操作人員不得擅自拆解儀器,更換元件或進(jìn)行機(jī)內(nèi)調(diào)節(jié)必須有持證的專業(yè)維修人員完成,不要在接通電源的情況下更換元件。核酸提取處理細(xì)胞破碎液或者組織勻漿后。天津全血核酸提取批發(fā)廠家
核酸提取磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合。天津核算提取設(shè)備供應(yīng)商
該方法結(jié)合高鹽沉淀,可以實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單的操作,但純度及得率的穩(wěn)定性可能會(huì)比用 PC 抽提的差一些。 高濃度蛋白質(zhì)變性劑 (如 GIT、GuHCl 等)的裂解方法,是抽提 RNA 的選擇。總 RNA 的抽提,重要的是快速裂解細(xì)胞膜,至于與基因組 DNA 相連接的蛋白質(zhì)的裂解以及基因組與蛋白質(zhì)"纏"住的問題,因?yàn)槎疾粫?huì)對(duì)以后的純化產(chǎn)生大的影響,可以不考慮。高濃度蛋白質(zhì)變性劑能快速破壞細(xì)胞膜,進(jìn)而迅速壓抑住細(xì)胞內(nèi)的 RNA酶,從而確保了 RNA 的完整性。除了極少量不適用該方法的樣品 – 主要是植物,其它絕大部分樣品的 RNA的抽提,都可以以高濃度的蛋白質(zhì)變性劑為基礎(chǔ)的。該方法也可用于基因組 DNA 抽提,非??焖俸?jiǎn)單,但純度不是很高。天津核算提取設(shè)備供應(yīng)商
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/2464325.html
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