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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:蕪湖正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格,RNA提取試劑
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細(xì)胞RNA提取的方法:異丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以見到側(cè)壁沉淀,輕輕吸棄上清。向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀,幫助分離剩余的有機(jī)試劑(剩余有機(jī)試劑過(guò)多會(huì)影響OD值和PCR反應(yīng)),輕彈沉淀,使其浮在酒精,靜置1-2min,蕪湖正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格,讓酒精充分接觸沉淀,充分溶解有機(jī)試劑,然后4度離心5min。輕輕吸棄上清,蕪湖正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格。將EP管再次放于離心機(jī)中瞬時(shí)離心,棄掉管壁殘余液體。然后將EP管置于超凈臺(tái)中干燥5-10min.。注意RNA樣品不要過(guò)于干燥,否則很難溶解。加入50ul DEPC處理水,蕪湖正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格,震蕩充分溶解沉淀。測(cè)量RNA濃度。將RNA保存于-80度。細(xì)胞裂解后,細(xì)胞釋放出蛋白質(zhì)、DNA、RNA等物質(zhì)。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格
RNA組成結(jié)構(gòu):RNA和DNA一樣,也是由各種核苷酸通過(guò)3′,5′-磷酸二酯鍵連接構(gòu)成的多核苷酸鏈,但與DNA有一系列差異。1.在化學(xué)組成方面,RNA含核糖而不含脫氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是,每個(gè)tNA分子含有一個(gè)胸腺嘧啶,這是在RNA鏈合成后由尿嘧啶甲基化生的,此外,前面已提到,少數(shù)DNA含有少量核糖,但這些個(gè)別的例外并不能以此否定兩類核酸組成上的差異。2.RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的概念雖與DNA相同.但其基本結(jié)構(gòu)單位是核糖核苷酸而不是脫氧核糖核苷酸。此外,部分RNA5′端或3′端有特殊的核苷酸序列,而且RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)中沒有DNA那樣復(fù)雜的順序組織。3.絕大多數(shù)RNA為單鏈分子,單鏈可自身折迭形成發(fā)夾(hairpin)樣結(jié)構(gòu)而有局部雙螺旋結(jié)構(gòu)的特征,這是各種RAN空間結(jié)構(gòu)的共同特征。RNA局部雙螺旋結(jié)構(gòu)中堿基互補(bǔ)配對(duì)規(guī)律是A對(duì)U和G對(duì)C。由于RNA分子內(nèi)部不能較全形成堿基配對(duì),故其堿基克分子比A不等于U,G不等于C,不存在DNA堿基比例的 Chargaff規(guī)律。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格RNase主要來(lái)自樣品的細(xì)胞。
mRNA:是蛋白質(zhì)合成(翻譯)過(guò)程中的模版,蛋白質(zhì)分子中氨基酸的排列順序,就是由mRNA上每3個(gè)相鄰的核苷酸形成的密碼子的排列順序決定的;tRNA:的作用是在蛋白質(zhì)的合成過(guò)程中轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸,為蛋白質(zhì)的合成提供原料;并可準(zhǔn)確識(shí)別其所轉(zhuǎn)運(yùn)的氨基酸在mRNA上的密碼子;rRNA:主要是和一些蛋白質(zhì)組裝成一類重要的細(xì)胞器——核糖體,而核糖體就是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所——“裝配車間”。所以三種RNA的作用主要是參與蛋白質(zhì)的生物合成。tRNA上的反密碼當(dāng)然應(yīng)能識(shí)別mRNA上相應(yīng)的、互補(bǔ)的密碼,并與之配對(duì)。然而用提純的tRNA來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),發(fā)現(xiàn)一種tRNA能夠識(shí)別幾種密碼。例如,丙氨酸t(yī)RNA,其反密碼為IGC(5′>3′),可以識(shí)別三種密碼。rRNA與多種蛋白質(zhì)分子共同構(gòu)成**白體。**白體相當(dāng)于“裝配機(jī)”,能促使tRNA所攜帶的氨基?;s合成肽。**白體附著在mRNA上,并沿著mRNA長(zhǎng)鏈的起始信號(hào)向終止信號(hào)移動(dòng)。至于rRNA在蛋白質(zhì)生物合成中的具體作用還不清楚。
RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次。實(shí)際上,任何提取實(shí)驗(yàn),都會(huì)在純度和得率這一對(duì)矛盾中取舍。醇沉淀會(huì)將脂溶性雜質(zhì)去掉,但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會(huì)連同RNA一起被沉淀下來(lái)。因此,多整幾次,并不會(huì)讓RNA的純度翻倍,反而還會(huì)有降低得率的風(fēng)險(xiǎn)。一般情況下,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低,那就只能放棄純度,在低溫沉淀數(shù)小時(shí),以換來(lái)較高的得率。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦使用0.1% DEPC處理RNA相關(guān)用水,以滅活RNase。這一點(diǎn)是要肯定的。不過(guò),在使用DEPC的過(guò)程中,又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水,會(huì)有一股“香甜”的味道。許多人會(huì)以為那是殘留的DEPC而不敢用。實(shí)際上,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄。
酵母RNA的提取方法:濃鹽法。酵母菌外層是厚達(dá) 1.2μm 的細(xì)胞壁,其化學(xué)成分 是葡聚糖(30-40%)和甘露聚糖(30%),此外,脂類8.5-13.5%,蛋白質(zhì) 6-8%,還含有幾丁質(zhì),酵母菌的葡聚糖,分子是為 240000 道爾頓,是一種分枝聚合物,葡聚糖與甘露糖之間由蛋白質(zhì)維系起來(lái)。近 10% 的甘露聚糖的側(cè)鏈通過(guò)磷酸二酯鍵與磷酸邊接,所有這些連接方式都使得酵母提取物首要的也是關(guān)鍵的是如何破壞細(xì)胞壁。破壁方法有自溶破壁、酶法破壁等多種方法,而用高濃度鹽溶液處理,同時(shí)加熱,以改變細(xì)胞的通透性,就可以使核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)。由于 RNA 鈉鹽易溶于水, 在含鹽的菌體溶液中, RNA 有較高的溶解度, 這樣, 通過(guò)控制溫度使蛋白質(zhì)變性沉淀,通過(guò)離心將 RNA 及蛋白質(zhì)和脫核酵母菌體分離, 從而達(dá)到提取之目的。其中食鹽起到自溶促進(jìn)劑,以及防腐與脫臭的作用。他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格
提取的RNA樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶存在壓制作用的有機(jī)溶劑及過(guò)高濃度的金屬離子。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格
總RNA 快速提取試劑盒背景資料;EpiQuik?總RNA分離快速試劑盒為從哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織中分離總RNA提供了一種快速、簡(jiǎn)單和經(jīng)濟(jì)有效的方法。洗滌劑用于溶解細(xì)胞和滅活核糖核酸酶。特殊的高鹽緩沖系統(tǒng)允許蛋白質(zhì)/DNA被去除,RNA結(jié)合到自旋柱的玻璃纖維基質(zhì)上,同時(shí)污染物通過(guò)柱。雜質(zhì)被有效地沖洗掉,純凈的RNA被洗脫。該試劑盒純化的RNA適用于多種常規(guī)應(yīng)用,包括RT-PCR、cDNA合成、northern blotting、差異顯示、引物延伸和mRNA選擇??俁NA 快速提取試劑盒描述:本試劑盒包含了直接從培養(yǎng)細(xì)胞或組織中成功分離RNA所需的所有試劑。經(jīng)過(guò)裂解、結(jié)合和洗滌后,使用特殊設(shè)計(jì)的柱可以很容易地回收高達(dá)10個(gè)氧化格的RNA。然后,總RNA準(zhǔn)備用于各種下游應(yīng)用。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格
蘇州君欣生物科技有限公司致力于精細(xì)化學(xué)品,是一家生產(chǎn)型的公司。公司業(yè)務(wù)分為原代細(xì)胞,無(wú)血清細(xì)胞凍存液,干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基,動(dòng)物疾病模型等,目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn),為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司注重以質(zhì)量為中心,以服務(wù)為理念,秉持誠(chéng)信為本的理念,打造精細(xì)化學(xué)品良好品牌。蘇州君欣生物科技秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實(shí)”的經(jīng)營(yíng)理念,全力打造公司的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力。
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