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詳細(xì)說(shuō)明
DNA稱脫氧核糖核酸,是一種分子,雙鏈結(jié)構(gòu),由脫氧核糖核苷酸(成分為:脫氧核糖、磷酸及四種含氮堿基)組成??山M成遺傳指令,引導(dǎo)生物發(fā)育與生命機(jī)能運(yùn)作。主要功能是長(zhǎng)期性的資訊儲(chǔ)存,蘇州RNA提取試劑廠家,可比喻為“藍(lán)圖”或“食譜”。RNA稱核糖核酸,是以DNA的一條鏈為模板,以堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),是遺傳信息傳遞過(guò)程中的橋梁。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤,G鳥嘌呤,C胞嘧啶,U尿嘧啶。其中,U尿嘧啶取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成為RNA的特征堿基。RNA是核糖核酸,DNA是脫氧核酸。區(qū)別:1.兩性解離:DNA無(wú),bai只有酸解離,堿基被屏蔽(在分子內(nèi)部形成了H鍵)。RNA有,有PI。2.粘度大:DNA;RNA,粘度由分子長(zhǎng)度/直徑?jīng)Q定,DNA為線狀分子,RNA為線團(tuán),蘇州RNA提取試劑廠家。3.堿的作用:DNA耐堿RNA易被堿水解。4.顯色反應(yīng):鑒別DNA和RNA+濃HCl RNA ------→ 綠色化合物DNA ------→ 藍(lán)紫色化合物苔黑酚。二苯胺啡啶溴紅(熒光染料)和溴嘧啶都可對(duì)DNA染色,蘇州RNA提取試劑廠家,原理是卡在分子中,DNA的離心和電泳顯色可用它們。細(xì)胞裂解后,細(xì)胞釋放出蛋白質(zhì)、DNA、RNA等物質(zhì)。蘇州RNA提取試劑廠家
法爾和梅洛的發(fā)現(xiàn)??茖W(xué)家在矮牽?;▽?shí)驗(yàn)中所觀察到的奇怪現(xiàn)象,其實(shí)是因?yàn)樯矬w內(nèi)某種特定基因“沉默”了。導(dǎo)致基因“沉默”的機(jī)制就是RNA干擾機(jī)制。此前,RNA分子只是被當(dāng)作從DNA(脫氧核糖核酸)到蛋白質(zhì)的“中間人”、將遺傳信息從“藍(lán)圖”傳到“工人”手中的“信使”。但法爾和梅洛的研究讓人們認(rèn)識(shí)到,RNA作用不可小視,它可以使特定基因開(kāi)啟、關(guān)閉、更活躍或更不活躍,從而影響生物的體型和發(fā)育等。諾貝爾獎(jiǎng)評(píng)審會(huì)在評(píng)價(jià)法爾和梅洛的研究成果時(shí)說(shuō):“他們的發(fā)現(xiàn)能解釋許多令人困惑、相互矛盾的實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果,并揭示了控制遺傳信息流動(dòng)的自然機(jī)制。這開(kāi)啟了一個(gè)新的研究領(lǐng)域。”天津正規(guī)RNA提取試劑產(chǎn)品介紹若比值較低,說(shuō)明有殘余蛋白質(zhì)存在;比值太高,則提示RNA有降解。
RNA提取圍繞DEPC的玄學(xué)。單純高壓過(guò)的蒸餾水或超純水,基本可以視為無(wú)核酸酶活性等級(jí)的水。Thermo Fisher公司曾經(jīng)做一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明這個(gè)問(wèn)題。在PBS中加入不同濃度RNase A,高壓或不高壓,后溶解P-32標(biāo)記RNA 探針。較后數(shù)據(jù)顯示,除非原始的RNase A的濃度高達(dá)1 μg/ml,否則常規(guī)高壓過(guò)的水,基本檢測(cè)不出RNase A活性。當(dāng)然,Thermo的科學(xué)家也很謹(jǐn)慎,說(shuō)這個(gè)結(jié)論*適用于RNase A,不能推廣到其他的RNase類型。不使用DEPC來(lái)處理RNA實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑和耗材,因?yàn)樘M(fèi)勁,而且DEPC還有毒性。相關(guān)的液體試劑,我會(huì)使用從公司購(gòu)買的Nuclease-free的水來(lái)配制。沒(méi)有很貴,一小瓶夠用很久。很多時(shí)候買各種其他試劑,比如酶、siRNA等,也都會(huì)送這樣的水。在耗材方面,直接使用大公司的離心管和吸頭,根本不用擔(dān)心核酸酶的問(wèn)題。
RNA提取實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:研缽150度烘烤4小時(shí),離心管、吸頭用DEPC處理;操作過(guò)程更是要求必須在超凈臺(tái)進(jìn)行或者在RNA提取專區(qū)進(jìn)行,離心機(jī)、移液器、試劑**,帶口罩、帽子,屏住呼吸、不說(shuō)話,帶乳膠手套并要時(shí)常更換。這樣做無(wú)非是聽(tīng)說(shuō)RNase很不好(書本上或者網(wǎng)上“RNA提取注意事項(xiàng)”),無(wú)處不在,所以到處都要擦的bling bling才能做實(shí)驗(yàn),好像空氣中的RNase都能炸出汁的樣子。RNase主要來(lái)自樣品的細(xì)胞。如果按比例來(lái)說(shuō)的的話,細(xì)胞內(nèi)源性的RNase占99.9%,實(shí)驗(yàn)環(huán)境的RNase占0.01%,一般可以忽略不計(jì)。所以,研缽洗干凈、烘干即可。買點(diǎn)無(wú)酶的吸頭、離心管,找一個(gè)普通的試驗(yàn)臺(tái),穿好實(shí)驗(yàn)服戴好手套,保護(hù)好自己就好。口罩愛(ài)帶不帶,做實(shí)驗(yàn)時(shí)高冷一點(diǎn),不要指點(diǎn)江山,唾沫橫飛即可。如果做實(shí)驗(yàn)時(shí)必須要用到trizol(主要成分苯酚)、氯仿、B-巰基乙醇等易揮發(fā)有毒試劑時(shí),帶口罩可以保護(hù)自己哦。其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多,且效果還不錯(cuò),性價(jià)比還可以。
RNA干擾機(jī)制:1998年,美國(guó)兩位科學(xué)家安德魯·法爾和克雷格·梅洛在《自然》雜志上共同發(fā)表了有關(guān)發(fā)現(xiàn)RNA(核糖核酸)干擾機(jī)制的論文,被同行稱為“近一段時(shí)間以來(lái)分子生物學(xué)較激動(dòng)人心的發(fā)現(xiàn)之一”。安德魯·法爾1959年出生在美國(guó)加利福尼亞州圣克拉拉縣,本科在加利福尼亞大學(xué)伯克利分校主修數(shù)學(xué),*用3年時(shí)間就拿到了學(xué)位。1983年獲美國(guó)麻省理工學(xué)院生物學(xué)博士學(xué)位。他逐漸對(duì)涉及生命奧秘的遺傳學(xué)產(chǎn)生了興趣,并將其作為自己終身的學(xué)術(shù)追求。 克雷格·梅洛生于1960年,他的父親是一名古生物學(xué)家,梅洛童年時(shí)經(jīng)常跟著父親在美國(guó)西部尋找化石。高中時(shí)代,梅洛的興趣逐漸轉(zhuǎn)移到了基因工程方面。當(dāng)時(shí)科學(xué)家克隆了人類胰島素基因,并將其DNA(脫氧核糖核酸)置入到細(xì)菌中,這樣就可以人工合成無(wú)限多的胰島素。這一成果為全球數(shù)百萬(wàn)糖尿病患者帶來(lái)了福音。梅洛回憶說(shuō):“科學(xué)研究能夠真正地對(duì)人類健康產(chǎn)生影響,這個(gè)想法激起了我的興趣?!眱?yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。天津正規(guī)RNA提取試劑產(chǎn)品介紹
買點(diǎn)無(wú)酶的吸頭、離心管,找一個(gè)普通的試驗(yàn)臺(tái),穿好實(shí)驗(yàn)服戴好手套,保護(hù)好自己就好。蘇州RNA提取試劑廠家
細(xì)胞RNA提取的方法:異丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以見(jiàn)到側(cè)壁沉淀,輕輕吸棄上清。向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀,幫助分離剩余的有機(jī)試劑(剩余有機(jī)試劑過(guò)多會(huì)影響OD值和PCR反應(yīng)),輕彈沉淀,使其浮在酒精,靜置1-2min,讓酒精充分接觸沉淀,充分溶解有機(jī)試劑,然后4度離心5min。輕輕吸棄上清。將EP管再次放于離心機(jī)中瞬時(shí)離心,棄掉管壁殘余液體。然后將EP管置于超凈臺(tái)中干燥5-10min.。注意RNA樣品不要過(guò)于干燥,否則很難溶解。加入50ul DEPC處理水,震蕩充分溶解沉淀。測(cè)量RNA濃度。將RNA保存于-80度。蘇州RNA提取試劑廠家
蘇州君欣生物科技有限公司坐落在江蘇省張家港市塘橋鎮(zhèn)東城科技創(chuàng)業(yè)園C幢二樓,是一家專業(yè)的蘇州君欣生物科技有限公司的經(jīng)營(yíng)范圍包括原代細(xì)胞的定制以及相關(guān)產(chǎn)品的配套銷售與服務(wù),干細(xì)胞染色體核型分析與鑒定、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基以及無(wú)血清細(xì)胞凍存等系列產(chǎn)品的生產(chǎn)與銷售,動(dòng)物疾病模型的構(gòu)建以及藥物效果的驗(yàn)證等領(lǐng)域。公司。目前我公司在職員工以90后為主,是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的團(tuán)隊(duì)。蘇州君欣生物科技有限公司主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋原代細(xì)胞,無(wú)血清細(xì)胞凍存液,干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基,動(dòng)物疾病模型,堅(jiān)持“質(zhì)量保證、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。公司深耕原代細(xì)胞,無(wú)血清細(xì)胞凍存液,干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基,動(dòng)物疾病模型,正積蓄著更大的能量,向更廣闊的空間、更寬泛的領(lǐng)域拓展。
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