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核糖核酸(縮寫為RNA,即Ribonucleic Acid),存在于生物細(xì)胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種,即A(腺嘌呤)、G(鳥嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶),其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。核糖核酸在體內(nèi)的作用主要是引導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。人體一個細(xì)胞含RNA約10pg(含DNA約7pg)。與DNA相比,RNA種類繁多,分子量較小,含量變化大。RNA可根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能的不同分為信使RNA和非編碼RNA。非編碼RNA分為非編碼大RNA和非編碼小RNA。非編碼大RNA包括核糖體RNA、長鏈非編碼RNA。非編碼小RNA包括轉(zhuǎn)移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA(20~300nt)包括 miRNA、 SiRNA,青島RNA提取試劑單價、 piRNA、scRNA,青島RNA提取試劑單價、 snRNA、 snoRNA等,青島RNA提取試劑單價,細(xì)菌也有小分子RNA(50~500nt)。很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結(jié)構(gòu)乃至三級結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。青島RNA提取試劑單價
細(xì)胞RNA提取的方法:實(shí)驗(yàn)提取步驟:標(biāo)準(zhǔn)Trizol提取步驟為 液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心。將細(xì)胞培養(yǎng)皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進(jìn)口EP管中。加入1/5體積的氯仿,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘。(氯仿為有機(jī)溶劑,有效的使有機(jī)相和無機(jī)相迅速分離。有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合,從而使得蛋白和RNA脫離,RNA進(jìn)入水相)。4度離心15分鐘,一定注意選擇低溫離心。離心后分成三層,RNA在上清里,從離心機(jī)輕輕拿出EP管,以免管內(nèi)物質(zhì)震蕩導(dǎo)致下層沉淀激起。吸取上清的時候一定要動作輕柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下層沉淀,將液體置于新的EP管中。加入等體積異丙醇,4度靜置10min,然后12000rpm離心10min。昆明正規(guī)RNA提取試劑單價在提取時,實(shí)驗(yàn)人員需要佩戴口罩和手套等各種防護(hù)裝備,以防實(shí)驗(yàn)室污染。
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。
Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,采用變性劑即內(nèi)含異硫氰酸胍酚和β-巰基乙醇等變性物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶。異硫氰酸胍屬于解偶劑,是一類強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性劑,可溶解蛋白質(zhì),并使蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)消失,細(xì)胞結(jié)構(gòu)降解,**白迅速與核酸分離。β-巰基乙醇主要破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵。細(xì)胞裂解后,細(xì)胞釋放出蛋白質(zhì)、DNA、RNA等物質(zhì),再根據(jù)它們在不同的PH值和不同極性溶劑的溶解度不同而使得分開。RNA的定量計算1.RNA定量方法與DNA定量相似。RNA在260nm波長處有較大的吸收峰。因此,可以用260nm波長分光測定RNA濃度,OD值為1相當(dāng)于大約40μg/ml的單鏈RNA。如用1cm光徑,用 ddH2O稀釋DNA樣品n倍并以ddH2O為空白對照,根據(jù)此時讀出的OD260值即可計算出樣品稀釋前的濃度:RNA(mg/ml)=40×OD260讀數(shù)×稀釋倍數(shù)(n)/1000。2. RNA純品的OD260/OD280的比值為2.0,故根據(jù)OD260/OD280的比值可以估計RNA的純度。若比值較低,說明有殘余蛋白質(zhì)存在;比值太高,則提示RNA有降解。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機(jī)相。
RNA提取圍繞DEPC的玄學(xué)。單純高壓過的蒸餾水或超純水,基本可以視為無核酸酶活性等級的水。Thermo Fisher公司曾經(jīng)做一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)來說明這個問題。在PBS中加入不同濃度RNase A,高壓或不高壓,后溶解P-32標(biāo)記RNA 探針。較后數(shù)據(jù)顯示,除非原始的RNase A的濃度高達(dá)1 μg/ml,否則常規(guī)高壓過的水,基本檢測不出RNase A活性。當(dāng)然,Thermo的科學(xué)家也很謹(jǐn)慎,說這個結(jié)論*適用于RNase A,不能推廣到其他的RNase類型。不使用DEPC來處理RNA實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑和耗材,因?yàn)樘M(fèi)勁,而且DEPC還有毒性。相關(guān)的液體試劑,我會使用從公司購買的Nuclease-free的水來配制。沒有很貴,一小瓶夠用很久。很多時候買各種其他試劑,比如酶、siRNA等,也都會送這樣的水。在耗材方面,直接使用大公司的離心管和吸頭,根本不用擔(dān)心核酸酶的問題。他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度。蕪湖昆明RNA提取試劑
mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板。青島RNA提取試劑單價
安德魯·法爾稱:“克雷格和我的工作是研究為什么一些基因會停止運(yùn)行,我們試圖去控制它們,我們發(fā)現(xiàn)了一些東西可以有效地中止它們。這些基因并不能告訴你它們能做什么,所以如果你能中止它們,你就可以開始了解它們能做什么。不過,較初發(fā)現(xiàn)RNA現(xiàn)象的是一位華人學(xué)者,非??上?,他沒有進(jìn)一步弄清這是為什么?!?二人發(fā)現(xiàn)的是一個有關(guān)控制基因信息流程的關(guān)鍵機(jī)制。人們的基因組通過從細(xì)胞核里的DNA向蛋白質(zhì)的合成機(jī)制發(fā)出生產(chǎn)蛋白質(zhì)的指令,這些指令通過mRNA傳送。他們發(fā)現(xiàn)一種可以用特定基因降解mRNA的方式,在這種RNA干擾現(xiàn)象中,雙鏈RNA以一種非常明確的方式壓制了基因表達(dá)。這項(xiàng)技術(shù)被用于全球的實(shí)驗(yàn)室來確定在各種病癥中哪種基因起到了重要作用。青島RNA提取試劑單價
蘇州君欣生物科技有限公司位于江蘇省張家港市塘橋鎮(zhèn)東城科技創(chuàng)業(yè)園C幢二樓,擁有一支專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)。在蘇州君欣生物科技近多年發(fā)展歷史,公司旗下現(xiàn)有品牌蘇州君欣生物等。公司以用心服務(wù)為重點(diǎn)價值,希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力,將蘇州君欣生物科技有限公司的經(jīng)營范圍包括原代細(xì)胞的定制以及相關(guān)產(chǎn)品的配套銷售與服務(wù),干細(xì)胞染色體核型分析與鑒定、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基以及無血清細(xì)胞凍存等系列產(chǎn)品的生產(chǎn)與銷售,動物疾病模型的構(gòu)建以及藥物效果的驗(yàn)證等領(lǐng)域。等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底。蘇州君欣生物科技有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋原代細(xì)胞,無血清細(xì)胞凍存液,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,動物疾病模型,堅(jiān)持“質(zhì)量保證、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/2828326.html
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