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總RNA的定義:總RNA=mRNA+tRNA+rRNA,即:總RNA就是指mRNA,鄭州正規(guī)RNA提取試劑哪里買、tRNA、rRNA的總和。這是在還沒有發(fā)現(xiàn)lncRNA等microRNA的時(shí)候的概念,鄭州正規(guī)RNA提取試劑哪里買。但是卻被各大公司默認(rèn)的概念,一直延續(xù)至今。所以各位可以去各大公司的網(wǎng)站,看一看總RNA提取試劑盒案例提供的RNA電泳圖,只有表示總RNA的2條帶——28s和18s;表示microRNA的5s帶,要不沒有,要不很弱,鄭州正規(guī)RNA提取試劑哪里買。那么mRNA在哪里呢?從RNA電泳圖上能不能看到呢?真正成熟的mRNA,主要集中在28s和18s之間和上下的熒光背景(一般每條基因mRNA量很少,所以,整體一般看不到明顯帶,只表現(xiàn)為28s和18s中間和上下的連續(xù)的涂抹帶)。RNase主要來自樣品的細(xì)胞。鄭州正規(guī)RNA提取試劑哪里買
細(xì)胞RNA提取的方法:異丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以見到側(cè)壁沉淀,輕輕吸棄上清。向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀,幫助分離剩余的有機(jī)試劑(剩余有機(jī)試劑過多會(huì)影響OD值和PCR反應(yīng)),輕彈沉淀,使其浮在酒精,靜置1-2min,讓酒精充分接觸沉淀,充分溶解有機(jī)試劑,然后4度離心5min。輕輕吸棄上清。將EP管再次放于離心機(jī)中瞬時(shí)離心,棄掉管壁殘余液體。然后將EP管置于超凈臺(tái)中干燥5-10min.。注意RNA樣品不要過于干燥,否則很難溶解。加入50ul DEPC處理水,震蕩充分溶解沉淀。測(cè)量RNA濃度。將RNA保存于-80度。開封RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨買點(diǎn)無酶的吸頭、離心管,找一個(gè)普通的試驗(yàn)臺(tái),穿好實(shí)驗(yàn)服戴好手套,保護(hù)好自己就好。
RNA提取圍繞DEPC的玄學(xué)。單純高壓過的蒸餾水或超純水,基本可以視為無核酸酶活性等級(jí)的水。Thermo Fisher公司曾經(jīng)做一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)來說明這個(gè)問題。在PBS中加入不同濃度RNase A,高壓或不高壓,后溶解P-32標(biāo)記RNA 探針。較后數(shù)據(jù)顯示,除非原始的RNase A的濃度高達(dá)1 μg/ml,否則常規(guī)高壓過的水,基本檢測(cè)不出RNase A活性。當(dāng)然,Thermo的科學(xué)家也很謹(jǐn)慎,說這個(gè)結(jié)論*適用于RNase A,不能推廣到其他的RNase類型。不使用DEPC來處理RNA實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑和耗材,因?yàn)樘M(fèi)勁,而且DEPC還有毒性。相關(guān)的液體試劑,我會(huì)使用從公司購買的Nuclease-free的水來配制。沒有很貴,一小瓶夠用很久。很多時(shí)候買各種其他試劑,比如酶、siRNA等,也都會(huì)送這樣的水。在耗材方面,直接使用大公司的離心管和吸頭,根本不用擔(dān)心核酸酶的問題。
那RNA到底是什么呢?它又和基因有什么關(guān)系呢?基因的表達(dá).其實(shí)人體內(nèi)的RNA主要和基因的表達(dá)有關(guān)系。不知道你思考過這么一個(gè)問題沒有,基因是我們體內(nèi)的遺傳物質(zhì),它如何來表達(dá)自己呢?事實(shí)上,這個(gè)過程是需要用到RNA的。具體來說是這樣的,由于染色體是存在于細(xì)胞核當(dāng)中的,而根據(jù)上述的內(nèi)容,我們知道,基因其實(shí)是存在于染色體上的。如果一個(gè)基因要表達(dá),只有兩種辦法,一個(gè)就是它親自到細(xì)胞核外去完成一切的生命活動(dòng),另一個(gè)辦法就是找個(gè)幫手來完成。而我們的基因選擇的是第二條路徑,也就是找一個(gè)幫手,這個(gè)幫手就是RNA,更準(zhǔn)確地說是信使RNA(mRNA),基因會(huì)通過轉(zhuǎn)錄,利用堿基互補(bǔ)原則,合成一條信使RNA,這個(gè)過程都是在細(xì)胞核內(nèi)部完成的。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。
在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運(yùn)RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場(chǎng)所。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,像是組成剪接體的snRNA,負(fù)責(zé)rRNA成型的snoRNA,以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。而其他如I、II型內(nèi)含子、RNaseP、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶。在病菌方面,很多病菌只以RNA作為其中的遺傳信息載體(有別于細(xì)胞生物普遍用雙鏈DNA作載體)。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團(tuán)結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上,同時(shí)使污染物通過柱被有效地洗去。鄭州RNA提取試劑直銷廠家
再采集樣本之后馬上加入 DNA/RNA Shield,可以快速降解掉 RNase 等蛋白物質(zhì)。鄭州正規(guī)RNA提取試劑哪里買
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時(shí)能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。鄭州正規(guī)RNA提取試劑哪里買
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文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/2905776.html
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