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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:蘇州自動(dòng)核算提取試劑盒生產(chǎn)廠家,核酸提取
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為什么需要核酸提?。汉怂崽崛榇罅科毡檠芯亢蛻?yīng)用提供了答案(例如:克隆、qRT-PCR和全基因組、轉(zhuǎn)錄組范疇中的二代測序技術(shù)),獲得的核酸可以多種方式進(jìn)行應(yīng)用。準(zhǔn)確的研究目的,決定了要提取的核酸類型;核酸的應(yīng)用往往影響提取方法的選擇。(例如:標(biāo)準(zhǔn)的End-point PCR反應(yīng),不需要與全基因組測序?qū)嶒?yàn)相同的DNA質(zhì)量)為了確定較佳的研究方法,有必要清楚了解核酸的下游應(yīng)用以及任何與樣品類型相關(guān)的潛在限制,蘇州自動(dòng)核算提取試劑盒生產(chǎn)廠家。(例如,臨床樣品采集量往往有限,核酸提取存在挑戰(zhàn),蘇州自動(dòng)核算提取試劑盒生產(chǎn)廠家,蘇州自動(dòng)核算提取試劑盒生產(chǎn)廠家。)雖然依據(jù)樣品類型,細(xì)胞裂解方式不同,但整體的核酸提取重心原則不變:細(xì)胞或組織樣品裂解,去除非核酸污染物(例如,蛋白質(zhì)等)。核酸提取從而實(shí)現(xiàn)核酸游離在裂解體系中。蘇州自動(dòng)核算提取試劑盒生產(chǎn)廠家
PC抽提的關(guān)鍵是,一要混勻徹底,二要用量足夠。徹底混勻,才能確保苯酚與蛋白質(zhì)的充分接觸,使蛋白質(zhì)完全變性。許多人總是擔(dān)心混勻的劇烈程度是否會(huì)對(duì)核酸,尤其是基因組DNA造成破壞,實(shí)際上大可不必如此小心。劇烈的混勻操作,是會(huì)部分打斷大分子的基因組DNA,但該破壞作用不會(huì)強(qiáng)烈到DNA變成10kb以內(nèi)的小片段。手劇烈晃動(dòng)混勻后,基因組DNA的片段,大部分會(huì)大于20kb,這個(gè)大小,除了一些特別的要求外,對(duì)PCR和酶切,都是完全適用的。蘇州自動(dòng)核算提取試劑盒生產(chǎn)廠家核酸提取加熱處理DNA溶液,利用線性DNA分子的特性。
注意事項(xiàng): 1. 儀器的安裝環(huán)境:正常的大氣壓(海拔高度應(yīng)該低于3000m)、溫度20-35℃、典型使用溫度25℃、相對(duì)濕度10%-80%、暢通流入的空氣為35℃或以下。 2. 避免將儀器放置在靠近熱源的地方,如電暖爐;同時(shí)為防止電子元件的短路,應(yīng)避免水或者其他液體濺入其中。 3. 進(jìn)風(fēng)口和排風(fēng)口均位于儀器背面,同時(shí)避免灰塵或纖維在進(jìn)風(fēng)口聚集,保持風(fēng)道的暢通。 4. 核酸提取儀離其他豎直面至少10cm, 5. 儀器接地:為了避免觸電事故,儀器的輸入電源線必須接地。 6. 遠(yuǎn)離帶電電路:操作人員不得擅自拆解儀器,更換元件或進(jìn)行機(jī)內(nèi)調(diào)節(jié)必須有持證的專業(yè)維修人員完成,不要在接通電源的情況下更換元件。
核酸的物理性質(zhì):①黏性:DNA的高軸比等性質(zhì)使得其水溶液具有高黏性,很長的DNA分子又易于被機(jī)械力或超聲波損傷,同時(shí)黏度下降。② 浮力密度:可根據(jù)DNA的密度對(duì)其進(jìn)行純化和分析。在高濃度分子質(zhì)量的鹽溶液(CsCl)中,DNA具有與溶液大致相同的密度,將溶液高速離心,則CsCl趨于沉降于底部,從而建立密度梯度,而DNA較終沉降于其浮力密度相應(yīng)的位置,形成狹帶,這種技術(shù)成為平衡密度梯度離心或等密度梯度離心。③穩(wěn)定性:核酸的結(jié)構(gòu)相當(dāng)穩(wěn)定,其主要原因有1、堿基對(duì)間的氫鍵2、堿基的堆積作用3、環(huán)境中的陽離子。核酸提取排除其它分子的污染(如提取DNA時(shí)排除RNA的干擾)。
核酸提取磁珠使用過程中的幾種常見誤區(qū):誤區(qū):樣本取用的越多,提取效果越好在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身就很少的情況下,往往核酸提取效果不好,很多實(shí)驗(yàn)人員就會(huì)采用多取樣本的方式增加核酸提取量。但簡單地增加樣本取樣量,有時(shí)會(huì)引入過多的雜質(zhì),超出裂解液裂解能力,也會(huì)使提取效率降低,所以并不推薦通過簡單的增加樣本取樣量的方式來達(dá)到增加提取量的目的。如果確實(shí)是由于樣本量不足而引起的提取量過低,建議在前處理先經(jīng)過富集或者濃縮步驟再開始提取?;蛘咴黾恿呀獾耐耆?,使更多的核酸暴露出來也是一種解決方法。核酸提取通過離心將DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片形成的沉淀分離。蘇州自動(dòng)核算提取試劑盒生產(chǎn)廠家
核酸提取使用研磨儀這種超聲破碎細(xì)胞的方法來破碎細(xì)胞。蘇州自動(dòng)核算提取試劑盒生產(chǎn)廠家
純化方法: 評(píng)價(jià) PC 抽提/醇沉淀方法,是一個(gè)**過時(shí)的方法。穩(wěn)定、可靠、經(jīng)濟(jì)、方便。PC抽提可以徹底去除蛋白質(zhì),醇沉淀可以去除鹽,對(duì)于一般的干凈的樣品 (雜質(zhì)為蛋白質(zhì)),該方法完全可以獲得高質(zhì)量的核酸。雖然每次 PC抽提都會(huì)損失一部分核酸(因?yàn)椴豢赡軐⑺嗳恳迫?,以及低濃度核酸的醇沉淀效率低,但這些問題都可以靠操作的調(diào)整而得以解決或者減少影響。該方法的zui大的問題是不適合大規(guī)模抽提。 PC抽提是去除蛋白質(zhì)的一個(gè)非常有效的手段。苯酚能使蛋白質(zhì)變性,變性后的蛋白質(zhì)從水相中被析出,處于苯酚中或者苯酚/水相之間。蘇州自動(dòng)核算提取試劑盒生產(chǎn)廠家
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/2959807.html
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