這樣你才能大膽地去**和糾正一些錯(cuò)誤的步驟，如抗體孵育條件主要是抗體濃度，天津多標(biāo)記免疫組化染色服務(wù)、溫度、時(shí)間，這三者一般是相互成反比的（相對(duì)），其中濃度是**重要的先決條件，溫度決定反應(yīng)的速度、時(shí)間決定反應(yīng)的量。比如溫度有4℃、室溫、37℃。我推薦4℃比較好，反應(yīng)**溫和，背景較淺；而37℃反應(yīng)速度較快，時(shí)間較短；室溫我不太提倡，除非你每次都把環(huán)境溫度控制在一定的范圍，否則，天津多標(biāo)記免疫組化染色服務(wù)，盡量選擇前兩者。2、定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢(shì)。相比于其他蛋白檢測(cè)方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高，是定位檢測(cè)分析優(yōu)先方法。尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。3、免疫組化結(jié)果定量分析的前提是高質(zhì)量的染色切片。免疫組化結(jié)果也能定量分析，但必須是背景染色淺而特異性染色較深的情況下，分析**為準(zhǔn)確，天津多標(biāo)記免疫組化染色服務(wù)，這種原則可能也是我們?nèi)粘徃鍟r(shí)判定研究結(jié)果的必備條件。4、免疫組化實(shí)驗(yàn)一定要設(shè)置陽性和陰性對(duì)照。陽性對(duì)照一般是用肯定表達(dá)這種抗原的切片來做；陰性對(duì)照一般是用PBS或非一抗替代一抗來進(jìn)行反應(yīng)，其余步驟均一致。前者是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無問題；后者是排除有無一抗外的非特異性染色。天津多標(biāo)記免疫組化染色服務(wù)

    ·若標(biāo)本自發(fā)熒光對(duì)照和特異性對(duì)照呈無熒光或弱熒光，陽性對(duì)照和待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光，則為特異性陽性染色。?直接免疫熒光法的注意事項(xiàng)(續(xù))·一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過3min，就有熒光減弱現(xiàn)象；·經(jīng)熒光染色的標(biāo)本比較好在當(dāng)天觀察，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸下降。(2)間接法又稱為熒光抗-抗體法?需要兩種抗體參與，即一抗和二抗(熒光素標(biāo)記)。一抗對(duì)標(biāo)本中的抗原來說起抗體的作用，但對(duì)熒光標(biāo)記的二抗來說又起著抗原作用。–可用來檢測(cè)標(biāo)本中未知抗原，也可檢測(cè)血清中未知抗體。?間接免疫熒光法操作步驟·標(biāo)本的處理及非特異染色的封閉同直接法；·一抗染色：–加未標(biāo)記的特異性抗體(通常1:100稀釋，用)，37?C作用30min或4?C過夜。·PBST漂洗5min×3次(震蕩漂洗)；?間接免疫熒光法操作步驟(續(xù))·加熒光標(biāo)記的二抗抗體，37?C濕盒避光作用30min。·PBST避光漂洗5min×3次(例如包上錫紙，在搖床上漂洗)；·甘油緩沖液封片·鏡檢·優(yōu)點(diǎn)：敏感性較高，比直接法高10倍左右；制備一種熒光標(biāo)記抗體，可應(yīng)用于多種一抗；·缺點(diǎn)：是參加反應(yīng)的因子較多，產(chǎn)生非特異性染色的機(jī)會(huì)增多。?間接免疫熒光法的注意事項(xiàng)·熒光染色后一般在1h內(nèi)完成觀察，或于4℃保存4h。江蘇四色免疫組化技術(shù)服務(wù)

    免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫熒光法【原理】·用于免疫熒光的標(biāo)記物是小分子的熒光素，可標(biāo)記抗體或抗原；免疫熒光技術(shù)·熒光素經(jīng)某種特定波長(zhǎng)的光照射激發(fā)后，能發(fā)射出一種比激發(fā)光波波長(zhǎng)更長(zhǎng)而且能量較低的熒光，籍此可作定位觀察或示蹤；·借助于熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。1、常用的熒光素·(1)異硫氰酸熒光素(FluoresceinIsothiocyanate,FITC)·(2)四甲基異硫氰酸羅丹明(TetramethylRhodamineIsothiocyanate,TRITC)·(3)四乙基羅丹明(RB200)·(4)碘化丙啶(propidiumiodide,PI)(1)異硫氰酸熒光素(FITC)·易溶于水和乙醇。·比較大吸收光譜為490～495nm，比較大發(fā)射光譜為520～530nm．呈翠綠色熒光，分子量?！ぴ趬A性條件下，F(xiàn)ITC的異硫氰酸基在水溶液中與Ig的自由氨基形成共價(jià)鍵，成為標(biāo)記的熒光抗體。一個(gè)lgG分子上**多能標(biāo)記15～20個(gè)FITC分子。(2)四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)·比較大吸收光譜550nm，比較大發(fā)射光譜620nm，呈紅色熒光，分子量為444。·與蛋白質(zhì)結(jié)合的方式同F(xiàn)ITC。(3)四乙基羅丹明(RB200)·不溶于水，易溶于乙醇和**?！け容^大吸收光譜為570nm，比較大發(fā)射光譜為595～600nm，呈橙紅色熒光，分子量為580?！B200在五氯化磷(PCl5)作用下轉(zhuǎn)變成磺酰氯(SO2Cl)。

    收藏查看我的收藏0有用+1已投票0免疫組織化學(xué)技術(shù)編輯鎖定免疫組織化學(xué)技術(shù)又稱為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，是指用標(biāo)記的特異性抗原或抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體的免疫反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)的抗原或抗體進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)免疫學(xué)檢測(cè)方法。中文名免疫組織化學(xué)技術(shù)外文名Immunohistochemistrytechnique目錄1發(fā)展簡(jiǎn)史2現(xiàn)狀與展望免疫組織化學(xué)技術(shù)發(fā)展簡(jiǎn)史編輯免疫熒光組織化學(xué)是現(xiàn)***物學(xué)和醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫熒光技術(shù)與形態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合發(fā)展成免疫熒光細(xì)胞（或組織）化學(xué)。它與葡萄球菌A蛋白（SPA）、生物素與卵白素、植物血凝素（ConA等）相結(jié)合拓寬了領(lǐng)域；與激光技術(shù)、電子計(jì)算機(jī)，掃描電視和雙光子顯微鏡等技術(shù)結(jié)合發(fā)展為定量免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)；熒光***細(xì)胞分類器Fluorescinactivatedcellsorter（FACS）的應(yīng)用，激光共聚焦顯微鏡的問世，使免疫熒光細(xì)胞技術(shù)發(fā)展到更高的階段，開創(chuàng)了免疫熒光技術(shù)的新領(lǐng)域。細(xì)胞顯微分光光度計(jì)與圖像分析儀的結(jié)合使免疫熒光組織化學(xué)的定量檢測(cè)更加準(zhǔn)確。

TSA技術(shù)(Tyramide Signal Amplification?，酪胺信號(hào)放大技術(shù))是做多重免疫熒光染色的一種多快好省的方法，它使同一張片子上所有的靶標(biāo)都可以選用特異性高的兔單克隆抗體，搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而且信號(hào)放大的倍數(shù)**增強(qiáng)。如果想要運(yùn)用這個(gè)技術(shù)，需要先做四個(gè)方面的準(zhǔn)備工作：嚴(yán)格驗(yàn)證的高特異性抗體：所有CST的IHC-P驗(yàn)證過的抗體都滿足mIHC(多重?zé)晒饷庖呓M化)高特異性的要求;HRP偶聯(lián)的針對(duì)一抗種屬亞型特異的二抗;酪胺熒光素(Perkin Elmer,Thermo Fisher Scientific等供應(yīng)商);多光譜成像系統(tǒng)(PerkinElmer等)。江蘇四色免疫組化技術(shù)服務(wù)

天津多標(biāo)記免疫組化染色服務(wù)

    在室溫下孵育5分鐘以封閉非特異性的背景染色。（注：孵育不要超過10分鐘，否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有5－10%正常羊血清，這一步可以省略。）6.緩沖液洗5min/2次。7.滴加一抗工作液37℃孵育1－2小時(shí)。（具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者**終決定）8.緩沖液洗5min/2次。9．滴加PrimaryAntibodyEnhancer（增強(qiáng)子），在室溫下孵育20分鐘。10．緩沖液洗5min/2次。11．滴加HRPPolymer（酶標(biāo)二抗），在室溫下孵育30分鐘。（注：HRPPolymer對(duì)光敏感，應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。）12．緩沖液洗5min/2次。13．向1mlDABPlusSubstrate（或AECPlusSubstrate)中滴加1-2滴DABPlusChromogen（或AECPlusChromogen），混勻后滴加到切片上，孵育3－15分鐘。（具體時(shí)間由染色深淺決定。）14．自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。免疫組化操作步驟⑴、石蠟切片脫蠟至水。⑵、3%H2O2室溫孵育5-10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。⑶、蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘x2（如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行）。⑷、5-10%正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10分鐘，傾去血清，勿洗。滴加一抗工作液，37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過夜。⑸、PBS沖洗，5分鐘x3次。天津多標(biāo)記免疫組化染色服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司是一家1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司，是一家擁有雇員人數(shù)優(yōu)異員工的企業(yè)。公司自成立以來，以質(zhì)量為發(fā)展，讓匠心彌散在每個(gè)細(xì)節(jié)，公司旗下[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]深受客戶的喜愛。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力，努力學(xué)習(xí)行業(yè)先進(jìn)知識(shí)，遵守行業(yè)規(guī)范，植根于化工行業(yè)的發(fā)展。公司憑借創(chuàng)新的產(chǎn)品、專業(yè)的服務(wù)、眾多的成功案例積累起來的聲譽(yù)和口碑，讓企業(yè)發(fā)展再上新高。

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