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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:北京9分鐘完成RNA提取試劑盒***的選擇,RNA提取試劑盒
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詳細(xì)說明
RNA提取注意事項(xiàng)(2)
使用正確的細(xì)胞或組織儲(chǔ)存條件
在樣品用液氮瞬間凍結(jié)之后,應(yīng)該儲(chǔ)存在-80°C,千萬不能解凍。即使是置于含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍,也會(huì)導(dǎo)致RNA的降解和損失。瞬間凍結(jié)的組織應(yīng)該首先在**溫條件下先研磨成粉,然后置于裂解液中進(jìn)行勻漿。 RNAfixer使樣品儲(chǔ)存更為便利,北京9分鐘完成RNA提取試劑盒***的選擇。儲(chǔ)存在RNA保護(hù)試劑中的細(xì)胞或組織可在室溫下穩(wěn)定保存長(zhǎng)達(dá)1個(gè)星期,北京9分鐘完成RNA提取試劑盒***的選擇,在4°C可穩(wěn)定保存長(zhǎng)達(dá)1個(gè)月,或長(zhǎng)久保存在-20°C,北京9分鐘完成RNA提取試劑盒***的選擇。具體參數(shù)請(qǐng)看相關(guān)保護(hù)試劑說明書。 對(duì)基層醫(yī)療地區(qū)的患者來說,進(jìn)行基因檢測(cè)十分不易。北京9分鐘完成RNA提取試劑盒***的選擇
RNA 常用提取方法(1)
1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法:
原理:使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效制抑RN A 酶的活性,經(jīng)過起始密度為1.78g/m l 的氯化銫介質(zhì),進(jìn)行密度梯度超速離心,RNA沉淀于管底,而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法,不但能得到高質(zhì)量的RNA ,而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA。
2、鹽酸胍-有機(jī)溶劑法:
原理:本法有MacDonald1987年在Strohman報(bào)道的方法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成的,適用于沒有超速離心及設(shè)備的情況下提取細(xì)胞總RNA。它利用鹽酸胍制抑RNA酶,勻漿裂解細(xì)胞,有機(jī)溶劑抽提去除蛋白質(zhì),通過選擇性沉淀RNA分子而去除DNA。
3、氯化鋰-尿素法:
原理:本法首先由Auffray報(bào)道,利用高濃度尿素變性蛋白質(zhì)同時(shí)制抑RNA酶,3 mol/L LiCl選擇性沉淀RNA。
北京9分鐘完成RNA提取試劑盒***的選擇但其售價(jià)較高,單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用花費(fèi)太大,對(duì)精度要求不高的實(shí)驗(yàn)沒有必要購(gòu)買,當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒。
產(chǎn)品特點(diǎn):
■ 從微量的樣本中純化得到的高質(zhì)量的RNA,如顯微切割得到的組織, 纖維組織和細(xì)胞 。
■ 配有***的DNase Ⅰ,可有效去除DNA 污染。
■ RNA純度更高,無雜質(zhì)殘留,特別適合于對(duì)純度要求很高的下游實(shí)驗(yàn)。
■ 操作安全可靠,無需酚/ 氯仿抽提,無需氯化銫梯度離心,無需氯化鋰或乙醇沉淀。
保存條件:
室溫(15-25℃)保存
DNase Ⅰ,緩沖液RDD,RNase-Free ddH2O
(管裝):2-8℃保存
自備試劑
β- 巰基乙醇、無水乙醇
下游應(yīng)用:
■ RT-PCR。
■ Northern Blot、Dot Blot。
■ Real-Time PCR。
■ 芯片分析。
■ polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析和分子克隆。
RNA 完整性檢測(cè)
取 1 μl RNA 加入適當(dāng) RNA loading buffer,混勻,進(jìn)行電泳檢測(cè)。若出現(xiàn)清晰的三條帶,分別為 28S、18S 和 5S,且條帶之間界限清晰,就證明 RNA 樣品的完整性非常好。可參考以下圖示:
RNA 純度檢測(cè)
利用分光光度計(jì)或者NanoDrop 儀檢測(cè)RNA 樣品在260nm、280nm 處的OD 值, 并計(jì)算 A260/A280 的比值。純的 RNA 的比值應(yīng)在 2.0 左右。
提取到的 RNA 得率很低。可能的原因如下:
樣品裂解或勻漿處理不徹底。
RNA 沉淀?xiàng)l件和時(shí)間太短,沒有充分沉淀 RNA 造成 RNA 損失。
***得到的 RNA 沉淀未完全溶解。
為基因檢測(cè)企業(yè)的發(fā)展創(chuàng)造了大量機(jī)遇。
使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買**提取試劑盒, 如果不是**試劑盒,或許能提出RNA,但不能確保其質(zhì)量以及完整性,會(huì)影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析、分子克隆等后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。當(dāng)前提取效果好的是RNA提取試劑盒,但其售價(jià)較高,單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用花費(fèi)太大,對(duì)精度要求不高的實(shí)驗(yàn)沒有必要購(gòu)買,當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒,但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(zhǎng)的問題(如果碰上國(guó)內(nèi)無貨的時(shí)候,要從國(guó)外發(fā)貨,會(huì)等很長(zhǎng)一段時(shí)間)。普通的提取實(shí)驗(yàn)用國(guó)產(chǎn)的試劑盒就足以,價(jià)格不高,基本上各地均有現(xiàn)貨操作繁瑣、周期長(zhǎng)、成本高,這是目前我國(guó)基因檢測(cè)行業(yè)的現(xiàn)狀。江蘇快速RNA提取試劑盒50T/690元
但另一方面,我國(guó)基因檢測(cè)產(chǎn)業(yè)鏈上游的測(cè)序儀器和試劑等關(guān)鍵技術(shù)領(lǐng)域仍然存在著“卡脖子”現(xiàn)象。北京9分鐘完成RNA提取試劑盒***的選擇
Trizol法提取RNA實(shí)驗(yàn)步驟及原理
1.在提取組織RNA時(shí),每50~100mg組織用1mL Trizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解;提取細(xì)胞RNA時(shí),先用PBS洗滌/離心沉淀細(xì)胞,每5-10 ╳106個(gè)細(xì)胞加1mL Trizol后, 反復(fù)用吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞.
2、將組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中, 在室溫15~30℃下放置5分鐘;在EP管中,按照每1mL TRIZOL加0.2mL氯仿的量加入氯仿(即為1/5體積), 蓋上EP管蓋子, 在手中用力震蕩15秒(10次), 在室溫下(15℃~30℃)放置2~3分鐘后, 14000rpm(4℃)離心15分鐘.
【注:離心后分為3層,RNA在上層水相, DNA在中間層, 蛋白質(zhì)在下層有機(jī)相】
3、取上層水相置于新EP管中(~500uL, 用200uL的黃色*頭小心吸取, 約吸取3次, 杜絕取到中間層/下層), 按照每1mL Trizol加0.5mL異丙醇的量加入異丙醇(即為1/2體積), 4℃下靜置20分鐘, 沉淀RNA;14000rpm(4℃)離心15分鐘.
4、按照每1mL TRIZOL加1mL75%乙醇進(jìn)行洗滌(即為1倍體積, 注:用DEPC水配置75%乙醇), 混合(#用移液器輕輕吹打即可,不用將沉淀打碎), 14000rpm(4℃)離心20分鐘, 棄上清(#比較好用真空泵吸去上清);讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥(#或在超凈臺(tái)中小風(fēng)吹干,比較好置于干凈的環(huán)境中,防止灰塵雜質(zhì)進(jìn)入);用45uL Rnase-free water 溶解RNA沉淀. 北京9分鐘完成RNA提取試劑盒***的選擇
上海朝瑞生物科技有限公司坐落在上海市松江區(qū)廣富林路697號(hào)昂立大廈2113室,是一家專業(yè)的1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)公司。目前我公司在職員工達(dá)到5~10人人,是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的高速團(tuán)隊(duì)。公司以誠(chéng)信為本,業(yè)務(wù)領(lǐng)域涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ],我們本著對(duì)客戶負(fù)責(zé),對(duì)員工負(fù)責(zé),更是對(duì)公司發(fā)展負(fù)責(zé)的態(tài)度,爭(zhēng)取做到讓每位客戶滿意。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了優(yōu)良的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/1008027.html
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