乳化劑的鑒定·判斷乳化是否充分，可將一滴乳化好的液體滴在水面上(冷水中)，如能長(zhǎng)時(shí)間保持圓珠形而不散開，表示乳化達(dá)到要求。(3)免疫方法——免疫途徑·常有靜脈、腹腔、肌肉、皮下、皮內(nèi)、淋巴結(jié)、腳掌等注射。·一般采用多點(diǎn)注射方法–常在足、掌、腋窩淋巴結(jié)周圍、背部?jī)蓚?cè)、頜下、耳后等處的皮內(nèi)或皮下。–皮內(nèi)易引起細(xì)胞免疫反應(yīng)，有利于提高抗體的效價(jià)。(3)免疫方法——免疫途徑(續(xù))·幾點(diǎn)說(shuō)明：–大動(dòng)物一般不用腹腔注射–顆?？乖褪褂米魟r(shí)不能靜脈注射–抗原寶貴可采用淋巴結(jié)內(nèi)微量注射法，只需10～100?g抗原即可獲得較好的免疫效果。–皮內(nèi)注射較困難，特別是天冷時(shí)更難注入。(3)免疫方法——次數(shù)及間隔時(shí)間·次數(shù)一般為2～3次(初次免疫和加強(qiáng)免疫)–***注射后，10～15天再加強(qiáng)注射；–劑量同***或?yàn)?**的一半，用不全佐劑或不用佐劑?！らg隔時(shí)間，一般而言，上海六色免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)，動(dòng)物越大，間隔越長(zhǎng)–豚鼠、大鼠為7～8天，兔子為10～15天，羊?yàn)?4～28天；–第三次注射的間隔時(shí)間更長(zhǎng)些，效果更好，上海六色免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)，上海六色免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)。舉例1：家兔的免疫·初次免疫–用50～200?gAg加入FCA，在背部皮下注射6～8點(diǎn)，每點(diǎn)～，也可肌肉內(nèi)或皮內(nèi)注射；·兩周后，加強(qiáng)免疫–將50～200?gAg于PBS或FIA中。上海六色免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)

    ⑹、滴加適量生物素標(biāo)記二抗工作液，37℃孵育10-30分鐘。⑺、PBS沖洗，5分鐘x3次。⑻、滴加適量的辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育10-30分鐘。⑼、PBS沖洗，5分鐘x3次。⑽、顯色劑顯色3-15分鐘（DAB或NBT/BCIP）⑾、自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。免疫組化化染色步驟冰凍切片4-8μm，室溫放置30分鐘后，入4℃**固定10分鐘，PBS洗，5分鐘x3，用過(guò)氧化氫孵育5-10分鐘，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。免疫組化判定分析編輯免疫組化染色（IHC）從實(shí)驗(yàn)結(jié)果而言，免疫組化技術(shù)服務(wù)主要涉及抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述與分析，圖片的確定與選取，相關(guān)數(shù)據(jù)的提供，上述工作是免疫組化工作的重點(diǎn)內(nèi)容，只有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)操作，專業(yè)化的結(jié)果分析才能更好的滿足客戶的要求，這點(diǎn)對(duì)于形式為腹水，上清，培養(yǎng)液之類的抗體顯得更為重要。關(guān)于上述服務(wù)內(nèi)容應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)開始前由雙方明確，一般而言，客戶方實(shí)驗(yàn)前應(yīng)提出需要什么樣的結(jié)果與分析，例如是簡(jiǎn)要還是詳細(xì)的描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需要實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)否，圖片的數(shù)量與規(guī)格等。如果為雙盲試驗(yàn)或有第三方參與，則事先申明。免疫組化意義編輯近年來(lái)，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn)。天津五色免疫組化檢測(cè)服務(wù)

    9）抗體稀釋液其實(shí)許多實(shí)驗(yàn)室抗體稀釋液就用一般PBS即可，但**的抗體稀釋液中除PBS成份外，還加了疊氮化鈉防腐劑、BSA穩(wěn)定劑等組份，對(duì)抗體的多次回收利用較好。正因?yàn)檫@種原因，我一直用國(guó)產(chǎn)的**抗體稀釋液，一段時(shí)間在更換新抗體稀釋液時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)了陰性結(jié)果（提示可能一抗沒(méi)有結(jié)合），***從抗體濃度和孵育時(shí)間、封閉時(shí)間等原因排除后，發(fā)現(xiàn)是新抗體稀釋液的PH值偏酸，而使抗原抗體反應(yīng)不佳，終而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。10）切片清洗（浸洗、沖洗和漂洗）為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當(dāng)?shù)丶訌?qiáng)清洗（延長(zhǎng)時(shí)間和增多次數(shù)）尤為重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均為5次*5min。注意：①單獨(dú)沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染。②溫柔沖洗，防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式；③沖洗的時(shí)間要足夠，才能徹底洗去結(jié)合的物質(zhì)。④PBS的PH和離子強(qiáng)度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓(xùn)，當(dāng)時(shí)我買的抗體稀釋液偏酸，結(jié)果背景一片黃（未見特異性染色），建議PH在。（中性及弱堿性條件（PH7-8）有利于免疫復(fù)合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成。

實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用、**基本的方法，對(duì)于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對(duì)照觀察；還能長(zhǎng)期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過(guò)程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法?？贵w免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體，單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后，從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

    這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry）技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）技術(shù)。2、原理根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng)，前者再用標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合，***通過(guò)呈色反應(yīng)或熒光來(lái)顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。3、分類1）按標(biāo)記物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。2）按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。3）按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合，如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶（PAP）法；親和連接，如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是比較常用的方法；聚合物鏈接，如即用型二步法。天津四色免疫組化技術(shù)服務(wù)

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    如淋巴細(xì)胞表面抗原尤其適合?！そM織凍結(jié)過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)、外的水分會(huì)形成冰晶，凍結(jié)的速度愈慢，冰晶顆粒愈大，可嚴(yán)重影響組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。因此制備凍塊時(shí)要求低溫、速凍。1、冰凍組織塊的常用方法·液氮中冰凍：組織投入液氮中(一196?C)中10～20sec；·干冰中加入**(或異戊烷)，液體立即氣化起泡，溫度降至一70?C，將組織投入，若在干冰**中置一盛有異戊烷的容器，組織投入該容器內(nèi)結(jié)凍則更好；–上述組織在速凍時(shí)應(yīng)浸埋于OCT包埋劑或甲基纖維素糊狀液內(nèi)，以保護(hù)組織。–制成凍塊后若需保存，應(yīng)以鋁箔或塑料薄膜封包，貯存于-70?C冰箱。2、切片·供免疫組化用的冰凍切片同樣要求附貼平整，并有連續(xù)性。·載玻片也應(yīng)清潔無(wú)油污，但一般無(wú)需涂抹粘附劑；·切片時(shí)，使用恒溫冷凍切片機(jī)，在箱內(nèi)溫度-25?C。切片厚度一般為4～8?m。3、切片后處理·切好的冰凍切片，室溫下自然晾干1～2h后，入4?C**固定10min，待干燥后作免疫組化染色或封存于-20℃?！け鶅銮衅捎谇衅夹g(shù)要求較高，不易得到連續(xù)性很好的切片，其形態(tài)結(jié)構(gòu)亦不如石蠟片，且凍塊和切片不便于長(zhǎng)期貯存，因此冰凍切片的應(yīng)用受限。上海六色免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司屬于化工的高新企業(yè)，技術(shù)力量雄厚。是一家有限責(zé)任公司企業(yè)，隨著市場(chǎng)的發(fā)展和生產(chǎn)的需求，與多家企業(yè)合作研究，在原有產(chǎn)品的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)不斷改進(jìn)，追求新型，在強(qiáng)化內(nèi)部管理，完善結(jié)構(gòu)調(diào)整的同時(shí)，優(yōu)良的質(zhì)量、合理的價(jià)格、完善的服務(wù)，在業(yè)界受到寬泛好評(píng)。公司業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]，價(jià)格合理，品質(zhì)有保證，深受廣大客戶的歡迎。上海朝瑞科技將以真誠(chéng)的服務(wù)、創(chuàng)新的理念、***的產(chǎn)品，為彼此贏得全新的未來(lái)！

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