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產品關鍵詞:北京lncRNA熒光定量PCR分析服務,熒光定量PCR
***更新:2020-08-25 14:18:35
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詳細說明
實時熒光定量PCR在病原微生物檢測中的應用
實時熒光定量PCR是通過熒光信號監(jiān)測目的基因擴增數量的定量PCR技術,具有靈敏度高,檢測速度快等優(yōu)點。實時熒光定量PCR已被應用于乙肝病原微生物、登革熱病原微生物、流感病原微生物、水皰口炎病原微生物等病原微生物的快速檢測,在病原微生物快速分型、相似病原微生物的鑒別檢測、耐藥病原微生物突變體檢測等臨床和公共衛(wèi)生領域得到廣泛應用。狂犬病是危害嚴重的**共患病,病死率幾乎為。實時熒光定量PCR技術已被應用于狂犬病病原微生物和狂犬病相關病原微生物的核酸檢測,具有與金標準DFA相當的靈敏度和特異度,同時克服了金標準DFA的某些局限性,如檢測速度更快,無需提取腦組織,北京lncRNA熒光定量PCR分析服務,對唾液、腦脊液等低病原微生物載量樣本具有較好的檢出效果,北京lncRNA熒光定量PCR分析服務,具有成為人間狂犬病診斷技術的潛力。靈敏度是傳統RT-PCR的200倍以上,北京lncRNA熒光定量PCR分析服務,交叉污染的風險更低。實時熒光定量PCR也應用于歐洲蝙蝠病原微生物等狂犬病相關病原微生物的檢測,可建立多重實時熒光定量PCR在單一檢測體系對多種病原微生物進行快速鑒別,對于預防病原微生物性傳染病具有重要的公共衛(wèi)生意義。 北京lncRNA熒光定量PCR分析服務
純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
變性瓊脂糖凝膠電泳測定
制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
灌制凝膠板,預留加樣孔至少可以加入25 μl溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內,加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。
準備RNA樣品
取3μgRNA,加3倍體積的甲醛上樣染液,加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10μg/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。
電泳
上樣前凝膠須預電泳5min,隨后將樣品加入上樣孔。5–6V/cm電壓下2h,電泳至溴酚蘭指示劑進膠至少2–3cm。
紫外透射光下觀察并拍照 上海熒光定量PCR課題承包
實時熒光定量常用Taqman探針法和SYBR Green I法兩類。
1.TaqMan探針法
TaqMan 探針法是具有高度特異性的定量PCR技術。它的工作原理為有一對 PCR 引物和一條探針存在于PCR 反應體系中,有熒光淬滅基團存在于3′
端標記,有報告基團存在于探針的5′ 端標記,探針*和模板特異結合,兩條引物之間是其結合點。因此信號儀器搜集不到,伴隨反應的進展,探針在外切核酸酶的活性的作用下被切斷,從而造成淬滅基團不能吸收基團的熒光能量,從而使熒光信號產生,所以模板 DNA 的拷貝數取決于信號的強度。
2.SYBR Green I法
SYBR Green I為一種具有綠色激發(fā)波長的染料,其發(fā)射波長比較大約為 520 nm,比較大吸收波長約為 497 nm,能夠結合所有的雙螺旋小溝區(qū)域。由于處于游離狀態(tài),SYBR Green I發(fā)出的熒光較弱,然而其結合雙鏈 DNA之后,就會使得熒光**增強,熒光信號的增加完全同步PCR 產物的增加。
實時熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性高和精確性高的優(yōu)點,此項技術已被應用于分子生物學、醫(yī)學、食品檢測和環(huán)境監(jiān)測等多個領域 。在分子生物學領域的研究應用 定量核酸濃度:傳統方法是用瓊脂糖凝膠電泳或者分光光度計測定核酸濃度,其結果不準確而且易污染,實時熒光定量PCR可以解決這些問題,它的準確性、靈敏度高且無污染,對一些傳染性疾病進行定量分析、病原微生物和***含量檢測,此項技術都是優(yōu)先
研究基因表達:應用實時定量PCR技術可以對基因時間、空間表達水平差異進行比較。例如,對特定基因用物理、化學、***等不同方法處理后的差異進行比較,為人們的科學研究提供依據
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段、熒光信號**擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化;在平臺期,擴增產物已不再呈**級增加,PCR終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,無法計算起始模板拷貝數。因此只有在熒光信號**擴增階段,PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,故選擇在這個階段進行定量分析。為了定量方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了幾個重要的概念:擴增曲線、熒光閾值、CT值。上海熒光定量PCR課題承包
北京lncRNA熒光定量PCR分析服務
在PCR擴增時加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸:5’端標記一個報告熒光基團,3’端標記一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統可接收到熒光信號。
在熒光擴增曲線上人為設定的一個值,它可以設定在熒光信號**擴增階段任意位置上,但一般熒光閾值的設置是PCR反應**-15個循環(huán)熒光信號標準偏差的10倍。 北京lncRNA熒光定量PCR分析服務
上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)建于2003-01-22,注冊資金 700-1000萬元,辦公設施齊全,辦公環(huán)境優(yōu)越,已全力實行網絡化辦公,**提高了速度和效率。zrbiorise,SPRICELL,scienceladde是上海朝瑞生物科技有限公司的主營品牌,是專業(yè)的1.發(fā)布科研技術 2.發(fā)布應用技術 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務 7.發(fā)布協同代研發(fā)服務 8.發(fā)布升級改造產品服務 9.發(fā)布實驗室及儀器設備共享 10.發(fā)布培訓基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務 15.發(fā)布資源交換業(yè)務公司,擁有自己**的技術體系。公司不**提供專業(yè)的1.發(fā)布科研技術 2.發(fā)布應用技術 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務 7.發(fā)布協同代研發(fā)服務 8.發(fā)布升級改造產品服務 9.發(fā)布實驗室及儀器設備共享 10.發(fā)布培訓基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務 15.發(fā)布資源交換業(yè)務,同時還建立了完善的售后服務體系,為客戶提供質量的產品和服務。自公司成立以來,一直秉承“以質量求生存,以信譽求發(fā)展”的經營理念,始終堅持以客戶的需求和滿意為重點,為客戶提供質量的科研技術服務,應用技術服務,科研成果轉化,科學產品銷售,從而使公司不斷發(fā)展壯大。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/1036078.html
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