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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:上海長(zhǎng)條帶Western Blot技術(shù)服務(wù),western blot
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1.為SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)??乖鹊鞍讟悠方?jīng)SDS處理后帶陰電荷,在聚丙烯酰膪凝膠中從陰極向陽極泳動(dòng),分子量越小,泳動(dòng)速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見(只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶)。2.電轉(zhuǎn)移。將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上,選用低電壓(100V)和大電流(1~2A),通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見。3.酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜(相當(dāng)于包被了抗原的固相載體)依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后,加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物,上海長(zhǎng)條帶Western Blot技術(shù)服務(wù),使區(qū)帶染色。常用的HRP底物為3,3,—二氨基聯(lián)苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈藍(lán)紫色),上海長(zhǎng)條帶Western Blot技術(shù)服務(wù)。陽性反應(yīng)的條帶清晰可辨,上海長(zhǎng)條帶Western Blot技術(shù)服務(wù),并可根據(jù)SDS-PAGE時(shí)加人的分子量標(biāo)準(zhǔn),確定各組分的分子量。本法綜合了SDS-PAGE的辨力和ELISA法的高特異性和敏感性,是一個(gè)有效的分析手段,不僅廣泛應(yīng)用于分析抗原組分及其免疫活性,并可用于疾病的診斷。在**中此法作為確診試驗(yàn)。抗原經(jīng)電泳轉(zhuǎn)移在硝酸纖維素膜上后,將膜切成小條,配合酶標(biāo)抗體及顯色底物制成的試劑盒可方便地在實(shí)驗(yàn)室中供檢測(cè)用。 上海長(zhǎng)條帶Western Blot技術(shù)服務(wù)
免疫印跡法(immunoblotting )因與Southern早先建立的檢測(cè)核酸的印跡方法Southern
blot相類似,亦被稱為Western blot。免疫印跡(western blotting)是在蛋白質(zhì)電泳分離和抗原抗體檢測(cè)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來一項(xiàng)檢測(cè)蛋白質(zhì)的技術(shù)。它將SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的辨力與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合。典型的印跡實(shí)驗(yàn)包括三個(gè)步驟①蛋白質(zhì)的電泳分離;②將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固體膜上,用非特異性,非反應(yīng)活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質(zhì)區(qū)域;③免疫學(xué)檢測(cè)。免疫印跡克服了聚丙烯酰胺凝膠電泳后直接在凝膠上進(jìn)行免疫學(xué)分析的弊端,極大地提高了其利用率、分辨率和靈敏度,使其成為使用**的免疫化學(xué)方法之一。 上海長(zhǎng)條帶Western Blot技術(shù)服務(wù)
全自動(dòng)western blot無需凝膠、無需轉(zhuǎn)印,放入您的樣品,按個(gè)按鈕,然后就沒事了。首先,將樣品與Simple
Western樣品緩沖液混合,至終濃度1 μg/μL,還原并變性,然后將制備好的樣品、一抗和二抗、化學(xué)發(fā)光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后,將Simple
Western分析緩沖液、毛細(xì)管和制備好的分析板放入Simon內(nèi),它自動(dòng)開展所有分析步驟。當(dāng)?shù)鞍籽刂?xì)管內(nèi)一個(gè)堆積和分離基質(zhì)遷移時(shí),它們分離。分離后的蛋白固定到毛細(xì)管壁上。之后利用一抗鑒定目標(biāo)蛋白,用HRP結(jié)合的二抗和化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)蛋白。系統(tǒng)自動(dòng)報(bào)告檢測(cè)蛋白的分子量和信號(hào)。每次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)分析**多12個(gè)樣品,結(jié)果可在3-5小時(shí)內(nèi)獲得。15-150 kDa的目標(biāo)蛋白均可檢測(cè)。軟件報(bào)告每個(gè)檢測(cè)蛋白的分子量、面積、面積百分比和信噪比。對(duì)于傳統(tǒng)的Western blot而言,結(jié)果的重復(fù)性一直是個(gè)挑戰(zhàn),因?yàn)槿狈?biāo)準(zhǔn)化的操作,且多個(gè)操作步驟引入了實(shí)驗(yàn)可變性。而Simple Western分析是完全自動(dòng)化的,因此結(jié)果的重復(fù)性更好。整體的定量也**改善了,因?yàn)槭∪チ宿D(zhuǎn)印步驟,從而避免了蛋白轉(zhuǎn)移的不一致。
Western blotting堪稱蛋白質(zhì)研究中的經(jīng)典方法。學(xué)生物的幾乎無人不曉,即使沒親手做過,也清楚其原理。經(jīng)典果然是經(jīng)典,30年來其操作步驟幾乎沒變過,依然是跑膠-轉(zhuǎn)膜-封閉-孵育-檢測(cè)。近兩年,各大公司陸續(xù)推出了Western blotting方面的新儀器,如新型轉(zhuǎn)印系統(tǒng),確實(shí)能省時(shí)省力不少,但仍然不能完全克服研究人員在面臨的挑戰(zhàn)。Western
blotting仍存在重復(fù)性差、實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)、無法準(zhǔn)確定量等問題。
近日,美國(guó)proteinsimple公司推出了一種Simple Western?分析,徹底改變了整個(gè)Western blot。此分析在一臺(tái)名為Simon的儀器上開展,Simon將所有實(shí)驗(yàn)步驟自動(dòng)化,包括蛋白上樣和分離、免疫印跡、洗滌、檢測(cè)以及數(shù)據(jù)的定量分析,讓研究人員從繁重的勞動(dòng)中解放出來,同時(shí)避免了可能影響實(shí)驗(yàn)重復(fù)性的人為因素。
轉(zhuǎn)膜完畢后,立即把蛋白膜放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的Western洗滌液(P0023C)中,漂洗1-2分鐘,以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟,一定要注意膜的保濕,避免膜的干燥,否則極易產(chǎn)生較高的背景。用微型臺(tái)式真空泵或滴管等吸盡封閉液,立即加入稀釋好的一抗,室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)。如果一抗孵育一小時(shí)效果不佳,可以4℃緩慢搖動(dòng)孵育過夜?;蚋鼡?jù)抗體的說明選擇適當(dāng)?shù)姆跤郎囟群蜁r(shí)間。微型臺(tái)式真空泵或滴管等吸盡洗滌液,立即加入稀釋好的二抗,室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)。 回收二抗。加入Western洗滌液,在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后,再加入洗滌液洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。使用
ECL化學(xué)發(fā)光試劑來檢測(cè)蛋白。壓片可以采用**的壓片暗盒進(jìn)行。洗片時(shí)可以使用X光片自動(dòng)洗片機(jī)。如果沒有自動(dòng)洗片機(jī),可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進(jìn)行手工洗片。X光片推薦選用柯達(dá)原裝的生物實(shí)驗(yàn)**柯達(dá)X-OMAT BT膠片。 上海長(zhǎng)條帶Western Blot技術(shù)服務(wù)
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進(jìn)入21世紀(jì)以來,國(guó)內(nèi)精細(xì)化工業(yè)進(jìn)入了新的發(fā)展時(shí)期,涌現(xiàn)了一大批規(guī)模銷售企業(yè),使精細(xì)化工的生產(chǎn)門類、品種不斷增加,領(lǐng)域日益擴(kuò)大,精細(xì)化工成為充滿活力的朝陽工業(yè)。作為科研技術(shù)服務(wù),應(yīng)用技術(shù)服務(wù),科研成果轉(zhuǎn)化,科學(xué)產(chǎn)品銷售的重要組成部分,防銹顏料發(fā)揮著減緩金屬腐蝕的功效,常見的含重金屬的防銹顏料雖然性能優(yōu)異,但對(duì)環(huán)境會(huì)造成極大污染,因而在實(shí)際使用中逐漸受到限制。要建立“責(zé)任明確、管理高效、資源共享、保障有力”的園區(qū)安全管理工作機(jī)制,將園區(qū)內(nèi)有限責(zé)任公司企業(yè)之間的相互影響降到比較低,強(qiáng)化園區(qū)內(nèi)企業(yè)的安全生產(chǎn)管控,夯實(shí)安全生產(chǎn)基礎(chǔ),加強(qiáng)應(yīng)急救援綜合能力建設(shè),促進(jìn)園區(qū)安全生產(chǎn)和安全發(fā)展。不少行業(yè)**對(duì)智能制造的意義所在進(jìn)行了定義?!耙话銇碚f,一個(gè)行業(yè)的工業(yè)發(fā)展軌跡,普遍都會(huì)遵循一個(gè)規(guī)律:那就是沿著手工-機(jī)械化-電氣化-自動(dòng)化-信息化-智能制造這樣的道路來發(fā)展?!?。目前,國(guó)內(nèi)的1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)產(chǎn)制造行業(yè)同樣是在沿著這個(gè)軌跡發(fā)展的。上海長(zhǎng)條帶Western Blot技術(shù)服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司是一家1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司,致力于成為客戶業(yè)務(wù)創(chuàng)新、化工可信賴的合作伙伴。上海朝瑞科技擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì),以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供科研技術(shù)服務(wù),應(yīng)用技術(shù)服務(wù),科研成果轉(zhuǎn)化,科學(xué)產(chǎn)品銷售。公司始終以本分踏實(shí)的精神和必勝的信念,影響并帶動(dòng)同事和團(tuán)隊(duì)取得成功。上海朝瑞科技始終關(guān)注化工市場(chǎng),以敏銳的市場(chǎng)洞察力以準(zhǔn)確確認(rèn),實(shí)現(xiàn)與客戶的成長(zhǎng)共贏。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/1049081.html
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