全自動單細胞western blot檢測分析原理：全自動單細胞western blot分析是單細胞水平，蛋白質(zhì)表達定量分析系統(tǒng)。系統(tǒng)采用**的微流控western blot芯片，通過單細胞微孔設(shè)計，采集單細胞，然后原位裂解細胞，釋放蛋白，進行蛋白質(zhì)電泳，將不同分子量蛋白進行分離，提高免疫學檢測特異性，上海膜蛋白Western Blot技術(shù)服務。之后，上海膜蛋白Western Blot技術(shù)服務，采用**技術(shù)進行蛋白質(zhì)原位捕獲，使用western blot驗證抗體及熒光標記二抗直接雜交，上海膜蛋白Western Blot技術(shù)服務，掃描儀進行芯片掃描后，分析軟件對掃描結(jié)果進行深度定量分析。上海膜蛋白Western Blot技術(shù)服務

(1) SDS-PAGE凝膠配制 

SDS-PAGE凝膠可以使用商業(yè)生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。

(2) 樣品處理：在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻資料配制100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。 

(3) 上樣與電泳：冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。 為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果，以及判斷蛋白分子量大小，比較好使用預染蛋白質(zhì)分子量標準(P0066)。電泳時通常推薦在上層膠時使用低電壓恒壓電泳，而在溴酚藍進入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標準電泳裝置或類似電泳裝置，低電壓可以設(shè)置在80-100V，高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。通常電泳時溴酚藍到達膠的底端處附近即可停止電泳，或者可以根據(jù)預染蛋白質(zhì)分子量標準的電泳情況，預計目的蛋白已經(jīng)被適當分離后即可停止電泳。 北京微量蛋白Western Blot檢測服務

轉(zhuǎn)膜(Transfer)

推薦在Western實驗中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)也可以使用，但硝酸纖維素膜比較脆，在操作過程中特別是用鑷子夾取等過程中容易裂開。膜的使用請參考生產(chǎn)商的推薦使用步驟。

通常如果使用Bio-Rad的標準濕式轉(zhuǎn)膜裝置，可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電流為300-400mA，轉(zhuǎn)膜時間為30-60分鐘。也可以在15-20mA轉(zhuǎn)膜過夜。具體的轉(zhuǎn)膜時間要根據(jù)目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的轉(zhuǎn)膜時間越長，目的蛋白的分子量越小，需要的轉(zhuǎn)膜時間越短。在轉(zhuǎn)膜過程中，特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時，通常會有非常嚴重的發(fā)熱現(xiàn)象，比較好把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進行轉(zhuǎn)膜。

轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預染蛋白質(zhì)分子量標準，通常分子量比較大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液(P0022)對膜進行染色，以觀察實際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍快速染色液(P0017)對完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進行染色，以觀察蛋白的殘留情況。

轉(zhuǎn)膜完畢后，立即把蛋白膜放置到預先準備好的Western洗滌液(P0023C)中，漂洗1-2分鐘，以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟，一定要注意膜的保濕，避免膜的干燥，否則極易產(chǎn)生較高的背景。用微型臺式真空泵或滴管等吸盡封閉液，立即加入稀釋好的一抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。如果一抗孵育一小時效果不佳，可以4℃緩慢搖動孵育過夜?；蚋鼡?jù)抗體的說明選擇適當?shù)姆跤郎囟群蜁r間。微型臺式真空泵或滴管等吸盡洗滌液，立即加入稀釋好的二抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。 回收二抗。加入Western洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當延長洗滌時間并增加洗滌次數(shù)。使用

ECL化學發(fā)光試劑來檢測蛋白。壓片可以采用**的壓片暗盒進行。洗片時可以使用X光片自動洗片機。如果沒有自動洗片機，可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進行手工洗片。X光片推薦選用柯達原裝的生物實驗**柯達X-OMAT BT膠片。

全自動western  blot無需凝膠、無需轉(zhuǎn)印，放入您的樣品，按個按鈕，然后就沒事了。首先，將樣品與Simple

Western樣品緩沖液混合，至終濃度1 μg/μL，還原并變性，然后將制備好的樣品、一抗和二抗、化學發(fā)光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后，將Simple

Western分析緩沖液、毛細管和制備好的分析板放入Simon內(nèi)，它自動開展所有分析步驟。當?shù)鞍籽刂毠軆?nèi)一個堆積和分離基質(zhì)遷移時，它們分離。分離后的蛋白固定到毛細管壁上。之后利用一抗鑒定目標蛋白，用HRP結(jié)合的二抗和化學發(fā)光底物檢測蛋白。系統(tǒng)自動報告檢測蛋白的分子量和信號。每次實驗可同時分析**多12個樣品，結(jié)果可在3-5小時內(nèi)獲得。15-150 kDa的目標蛋白均可檢測。軟件報告每個檢測蛋白的分子量、面積、面積百分比和信噪比。對于傳統(tǒng)的Western blot而言，結(jié)果的重復性一直是個挑戰(zhàn)，因為缺乏標準化的操作，且多個操作步驟引入了實驗可變性。而Simple Western分析是完全自動化的，因此結(jié)果的重復性更好。整體的定量也**改善了，因為省去了轉(zhuǎn)印步驟，從而避免了蛋白轉(zhuǎn)移的不一致。 北京微量蛋白Western Blot檢測服務

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化工工業(yè)在各國的國民經(jīng)濟中占有重要地位，是許多國度的基礎(chǔ)產(chǎn)業(yè)和支柱產(chǎn)業(yè)，化學工業(yè)的發(fā)展速度和規(guī)模對社會經(jīng)濟的各個領(lǐng)域有著直接影響。世界各國對環(huán)境保護和綠色發(fā)展的重視程度日益提升，出臺了很多環(huán)境方面的政策、法規(guī)，同時環(huán)境執(zhí)法力度也在逐步提高，化工有限責任公司企業(yè)需要積極探索綠色低碳、安全環(huán)保的技術(shù)，加強與信息化技術(shù)融合，盡可能地發(fā)展環(huán)保型產(chǎn)品，實現(xiàn)清潔生產(chǎn)，并在節(jié)約能源和資源方面，采用先進工藝技術(shù)，降低原材料消耗；配備廢水、廢氣、廢固處理設(shè)備，極大限度地降低三廢排放量，增加節(jié)水措施，提高水的重復利用率等?？梢哉f，“綠色化工”已經(jīng)成為行業(yè)發(fā)展潮流?？蒲屑夹g(shù)服務，應用技術(shù)服務，科研成果轉(zhuǎn)化，科學產(chǎn)品銷售寬泛應用于國民經(jīng)濟和****的眾多領(lǐng)域中，成為我國化工體系中市場需求增長**快的領(lǐng)域之一，近年來很多產(chǎn)品的消費量年均增長都在10%以上。在全球化工行業(yè)業(yè)績承壓的環(huán)境下，各個塑料巨頭們都在找尋下一個加入贏利點。未來，經(jīng)濟上的成功將越來越取決于數(shù)字化、生產(chǎn)流程和產(chǎn)品開發(fā)的有機融合，這需要創(chuàng)新的服務型。如今，*根據(jù)材料的功能來評估材料價值是不夠的，可持續(xù)性也越來越重要。上海膜蛋白Western Blot技術(shù)服務

上海朝瑞生物科技有限公司致力于化工，以科技創(chuàng)新實現(xiàn)***管理的追求。上海朝瑞科技擁有一支經(jīng)驗豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團隊，以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供科研技術(shù)服務，應用技術(shù)服務，科研成果轉(zhuǎn)化，科學產(chǎn)品銷售。上海朝瑞科技始終以本分踏實的精神和必勝的信念，影響并帶動同事和團隊取得成功。上海朝瑞科技始終關(guān)注化工行業(yè)。海納百川，有容乃大，國內(nèi)外同行的智慧都是促使我們前行的力量。

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