免疫印跡法（immunoblotting ）因與Southern早先建立的檢測(cè)核酸的印跡方法Southern

blot相類似，北京膜蛋白Western Blot檢測(cè)分析服務(wù)，北京膜蛋白Western Blot檢測(cè)分析服務(wù)，亦被稱為Western blot。免疫印跡（western blotting）是在蛋白質(zhì)電泳分離和抗原抗體檢測(cè)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來一項(xiàng)檢測(cè)蛋白質(zhì)的技術(shù)，北京膜蛋白Western Blot檢測(cè)分析服務(wù)。它將SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的辨力與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合。典型的印跡實(shí)驗(yàn)包括三個(gè)步驟①蛋白質(zhì)的電泳分離；②將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固體膜上，用非特異性，非反應(yīng)活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質(zhì)區(qū)域；③免疫學(xué)檢測(cè)。免疫印跡克服了聚丙烯酰胺凝膠電泳后直接在凝膠上進(jìn)行免疫學(xué)分析的弊端，極大地提高了其利用率、分辨率和靈敏度，使其成為使用**的免疫化學(xué)方法之一。 北京膜蛋白Western Blot檢測(cè)分析服務(wù)

轉(zhuǎn)膜(Transfer)

推薦在Western實(shí)驗(yàn)中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)也可以使用，但硝酸纖維素膜比較脆，在操作過程中特別是用鑷子夾取等過程中容易裂開。膜的使用請(qǐng)參考生產(chǎn)商的推薦使用步驟。

通常如果使用Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)濕式轉(zhuǎn)膜裝置，可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電流為300-400mA，轉(zhuǎn)膜時(shí)間為30-60分鐘。也可以在15-20mA轉(zhuǎn)膜過夜。具體的轉(zhuǎn)膜時(shí)間要根據(jù)目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越長(zhǎng)，目的蛋白的分子量越小，需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越短。在轉(zhuǎn)膜過程中，特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時(shí)，通常會(huì)有非常嚴(yán)重的發(fā)熱現(xiàn)象，比較好把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)，通常分子量比較大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液(P0022)對(duì)膜進(jìn)行染色，以觀察實(shí)際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍(lán)快速染色液(P0017)對(duì)完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進(jìn)行染色，以觀察蛋白的殘留情況。 北京膜蛋白Western Blot檢測(cè)分析服務(wù)

全自動(dòng)western  blot無需凝膠、無需轉(zhuǎn)印，放入您的樣品，按個(gè)按鈕，然后就沒事了。首先，將樣品與Simple

Western樣品緩沖液混合，至終濃度1 μg/μL，還原并變性，然后將制備好的樣品、一抗和二抗、化學(xué)發(fā)光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后，將Simple

Western分析緩沖液、毛細(xì)管和制備好的分析板放入Simon內(nèi)，它自動(dòng)開展所有分析步驟。當(dāng)?shù)鞍籽刂?xì)管內(nèi)一個(gè)堆積和分離基質(zhì)遷移時(shí)，它們分離。分離后的蛋白固定到毛細(xì)管壁上。之后利用一抗鑒定目標(biāo)蛋白，用HRP結(jié)合的二抗和化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)蛋白。系統(tǒng)自動(dòng)報(bào)告檢測(cè)蛋白的分子量和信號(hào)。每次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)分析**多12個(gè)樣品，結(jié)果可在3-5小時(shí)內(nèi)獲得。15-150 kDa的目標(biāo)蛋白均可檢測(cè)。軟件報(bào)告每個(gè)檢測(cè)蛋白的分子量、面積、面積百分比和信噪比。對(duì)于傳統(tǒng)的Western blot而言，結(jié)果的重復(fù)性一直是個(gè)挑戰(zhàn)，因?yàn)槿狈?biāo)準(zhǔn)化的操作，且多個(gè)操作步驟引入了實(shí)驗(yàn)可變性。而Simple Western分析是完全自動(dòng)化的，因此結(jié)果的重復(fù)性更好。整體的定量也**改善了，因?yàn)槭∪チ宿D(zhuǎn)印步驟，從而避免了蛋白轉(zhuǎn)移的不一致。

全自動(dòng)單細(xì)胞western blot檢測(cè)分析原理：全自動(dòng)單細(xì)胞western blot分析是單細(xì)胞水平，蛋白質(zhì)表達(dá)定量分析系統(tǒng)。系統(tǒng)采用**的微流控western blot芯片，通過單細(xì)胞微孔設(shè)計(jì)，采集單細(xì)胞，然后原位裂解細(xì)胞，釋放蛋白，進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳，將不同分子量蛋白進(jìn)行分離，提高免疫學(xué)檢測(cè)特異性。之后，采用**技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)原位捕獲，使用western blot驗(yàn)證抗體及熒光標(biāo)記二抗直接雜交，掃描儀進(jìn)行芯片掃描后，分析軟件對(duì)掃描結(jié)果進(jìn)行深度定量分析。

Western blotting堪稱蛋白質(zhì)研究中的經(jīng)典方法。學(xué)生物的幾乎無人不曉，即使沒親手做過，也清楚其原理。經(jīng)典果然是經(jīng)典，30年來其操作步驟幾乎沒變過，依然是跑膠-轉(zhuǎn)膜-封閉-孵育-檢測(cè)。近兩年，各大公司陸續(xù)推出了Western blotting方面的新儀器，如新型轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，確實(shí)能省時(shí)省力不少，但仍然不能完全克服研究人員在面臨的挑戰(zhàn)。Western

blotting仍存在重復(fù)性差、實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)、無法準(zhǔn)確定量等問題。

近日，美國(guó)proteinsimple公司推出了一種Simple Western?分析，徹底改變了整個(gè)Western blot。此分析在一臺(tái)名為Simon的儀器上開展，Simon將所有實(shí)驗(yàn)步驟自動(dòng)化，包括蛋白上樣和分離、免疫印跡、洗滌、檢測(cè)以及數(shù)據(jù)的定量分析，讓研究人員從繁重的勞動(dòng)中解放出來，同時(shí)避免了可能影響實(shí)驗(yàn)重復(fù)性的人為因素。 北京膜蛋白Western Blot檢測(cè)分析服務(wù)

北京膜蛋白Western Blot檢測(cè)分析服務(wù)

化工工業(yè)在各國(guó)的國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占有重要地位，是許多國(guó)度的基礎(chǔ)產(chǎn)業(yè)和支柱產(chǎn)業(yè)，化學(xué)工業(yè)的發(fā)展速度和規(guī)模對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的各個(gè)領(lǐng)域有著直接影響。有限責(zé)任公司企業(yè)普遍把研發(fā)創(chuàng)新能力看作企業(yè)**重要的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力，加大研發(fā)加入、提升**水平，并積極構(gòu)建開放性和國(guó)際化的創(chuàng)新體系。科研技術(shù)服務(wù)，應(yīng)用技術(shù)服務(wù)，科研成果轉(zhuǎn)化，科學(xué)產(chǎn)品銷售的發(fā)展任務(wù)是提升示范升級(jí)水平、解決環(huán)保問題，關(guān)注競(jìng)爭(zhēng)力，努力實(shí)現(xiàn)相關(guān)產(chǎn)業(yè)融合發(fā)展。近年來，隨著服務(wù)型飛快增長(zhǎng)、人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)和環(huán)境保護(hù)工作力度的加大，中國(guó)化工產(chǎn)業(yè)取得了較大的發(fā)展。在國(guó)度和各級(jí)政商不斷加大重視并持續(xù)增加收入，以及伴隨著工業(yè)發(fā)展產(chǎn)生的大量市場(chǎng)需求等方面因素的作用下，中國(guó)城市化工行業(yè)始終保持較快增長(zhǎng)。北京膜蛋白Western Blot檢測(cè)分析服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)立于2003-01-22，是一家服務(wù)型公司。公司業(yè)務(wù)涵蓋科研技術(shù)服務(wù)，應(yīng)用技術(shù)服務(wù)，科研成果轉(zhuǎn)化，科學(xué)產(chǎn)品銷售等，價(jià)格合理，品質(zhì)有保證。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力，努力學(xué)習(xí)行業(yè)先進(jìn)知識(shí)，遵守行業(yè)規(guī)范，植根于化工行業(yè)的發(fā)展。上海朝瑞科技立足于全國(guó)市場(chǎng)，依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力，融合世界前沿的技術(shù)理念，飛快響應(yīng)客戶的變化需求。

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