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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:天津IMAB362特異人源Claudin18.2蛋白,人源Claudin18.2蛋白
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詳細(xì)說(shuō)明
3%H202:30uL。h.終止液H2S04:lmol/L。操作方法包被先取96孔ELISA板,將(ug/ml),按100uL/孔加入板孔中,4。C包被過(guò)夜;倒掉包被液,加入封閉液,室溫下封存2h;棄去封閉液,用洗滌液洗6次,每次2min;分別加入倍比稀釋的山羊抗人(500ug/ml)和抗血清,100wL/孔,室溫下孵育lh;棄去抗體和抗血清,用洗滌液洗6次,每次3min;加入HRP標(biāo)記的抗山羊二抗,100nL/孔,天津IMAB362特異人源Claudin18.2蛋白,室溫孕育lh;棄去二抗,用洗滌液洗6次,每次3min;加入底物顯色液,100uL/孔,室溫,顯色10-20min;加入終止液,天津IMAB362特異人源Claudin18.2蛋白,50"L/孔,終止反應(yīng);酶標(biāo)儀讀數(shù),測(cè)定沒(méi)孔在4卯nm的吸光值。免疫印跡反應(yīng)測(cè)定血清抗,結(jié)束后,按Bio-Rad產(chǎn)品說(shuō)明,凝膠靠近陰極一側(cè),硝酸纖維膜(NC膜)靠近陽(yáng)極一側(cè),置轉(zhuǎn)移緩沖液中(25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇),100V恒壓lh,將蛋白從凝膠電轉(zhuǎn)移至NC膜上,電轉(zhuǎn)移結(jié)束后,取出NC膜,用洗滌液TBST(含mol/TBS、Tween20)室溫洗3次,浸入封閉液(含2%BSA的TBST)中37。C,1h,洗滌液(TBST)室溫洗3次,加荷瘤小鼠抗血清,37t孵育1h,TBST室溫洗膜3次,加入兔抗山羊IgG-HRP二抗(中杉公司),天津IMAB362特異人源Claudin18.2蛋白,37'C孵育1h,TBST室溫洗膜3次,再用TBS洗3次,NC膜浸入OPD顯色液中,室溫避光顯色10min,蒸餾水沖洗終止反應(yīng)。天津IMAB362特異人源Claudin18.2蛋白
MNaH2P04,MTris()充分平衡Ni柱,先用含10mmo1咪唑的6M尿素,,()洗脫雜蛋白,再用含250mmo1咪唑的6M尿素,,(pH8,0)洗脫目的蛋白。收集洗脫峰,純化產(chǎn)物透析至2M尿素,,Tris(pH)復(fù)性,終濃度lmg/ml。***透析入Tris(pH)中,PEG8000濃縮后,用Bradford法測(cè)定蛋白濃度。動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)小鼠分組與免疫方案分組將24只BALB/c小鼠分成4組,于小鼠背部皮下按照l(shuí)x^個(gè)/只,每組6只分別接種胃*MFC和胰腺*MPC-83細(xì)胞各2組。每個(gè)腫瘤細(xì)胞接種2組荷瘤小鼠,待成瘤后,按照常規(guī)免疫方法分別注射鹽水。在第4次免疫后10天摘眼球**,測(cè)定血清中抗。免疫方案背部皮下多點(diǎn)注射;rhClaudinl8,2:40ug/只+生理鹽水總體積為200^L/只,分別隔周注射;第4次,使用:40Hg/只+生理鹽水200liL/只,腹腔注射。ELISA法測(cè)定血清抗,收集抗血清,通過(guò)間接ELISA測(cè)定血清抗(:1311出。每個(gè)樣品均設(shè)6個(gè)孔。ELISA實(shí)驗(yàn)方法如下所需溶液的配制a.包被緩沖液碳酸鹽緩沖液取Na2C03:g(終濃度mol/L),NaHC03:(終濃度mol/L),純水定容至200mL(),有效期兩周。b.洗滌液含Tween-20的PBS()。c.封閉液含1%BSA的洗滌液。d.稀釋液含BSA的洗滌液。e.底物緩沖液Na2HP04*12H20:g,檸檬酸mL(pH)。f.底物顯色液OPD:8mg。北京高純度人源Claudin18.2蛋白****
診斷、***或預(yù)防。因此,在一個(gè)方面,本**技術(shù)涉及一種分離的單克隆抗體(例如,人源化抗體)、或其抗原結(jié)合部分,其與,含有重鏈可變區(qū),該重鏈可變區(qū)含有CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū),其中,CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū)所含的氨基酸序列分別包含(1)SEQIDNOs:1、4和7;(2)SEQIDNOs:2、4和8;(3)SEQIDNOs:2、4和9;(4)SEQIDNOs:2、5和9;或(5)SEQIDNOs:3、6和8;或與其具有至少80%、85%、90%、95%、98%或99%同一性,其中該抗體或其抗原結(jié)合部分與。在一個(gè)方面,本**技術(shù)的分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分包含重鏈可變區(qū),其所含的氨基酸序列為SEQIDNOs:17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或49,或與其具有至少80%、85%、90%、95%、98%或99%同一性,其中該抗體或其抗原結(jié)合部分與。在一個(gè)方面,本**技術(shù)的分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分含有輕鏈可變區(qū),該輕鏈可變區(qū)含有CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū),其中,CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū)所含的氨基酸序列分別為(1)SEQIDNOs:10、13和16;(2)SEQIDNOs:11、13和16;(3)SEQIDNOs:10、14和16;。
免疫印跡反應(yīng)SDS-PAGE結(jié)束后,按Bio-Rad產(chǎn)品說(shuō)明,凝膠靠近陰極一側(cè),硝酸纖維膜(NC膜)靠近陽(yáng)極一側(cè),置轉(zhuǎn)移緩沖液中(25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇),100V恒壓lh,將蛋白從凝膠電轉(zhuǎn)移至NC膜上,電轉(zhuǎn)移結(jié)束后,取出NC膜,用洗滌液TBST(含mol/LTBS、Tween20)室溫洗3次,浸入封閉液(含2°/。BSA的TBST)中37°C,1h,洗滌液(TBST)室溫洗3次,加山羊抗人,37。C孵育1h,TBST室溫洗膜3次,加入兔抗山羊IgG-HRP二抗,37'C孵育lh,TBST室溫洗膜3次,再用TBS洗3次,NC膜浸入OPD顯色液中,室溫避光顯色10min,蒸餾水沖洗終止反應(yīng)。(3)融合蛋白的純化和復(fù)性取含,5000rpm離心10min,收菌,超聲裂菌;4'C,12000rpm,離心20min,分別收集上清液和沉淀。將沉淀用6mol/L尿素溶液重懸,fC下靜置溶解。將溶解的沉淀和上清分別取樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳,對(duì)目的蛋白的表達(dá)形式進(jìn)行分析。在證實(shí)目的蛋白以包涵體的形式表達(dá)后,用Ni-NTA柱親和層析純化所溶解的沉淀(包涵體)。按1g菌體加10mL裂菌緩沖液的比例將菌體重懸,冰浴條件下進(jìn)行超聲裂菌。12000rpm,離心15min,棄上清,1g沉淀加10mL6M尿素,,MTris(pH)。4'C攪拌2h,12000rpm,離心15min,共離心2次,收集上清待用。用6M尿素。
再用含250mmol咪唑的6M尿素,,(pH8,0)洗脫目的蛋白。收集洗脫峰,純化產(chǎn)物透析至2M尿素,,Tris(pH)復(fù)性,終濃度lmg/ml。***透析入(pH)中,PEG8000濃縮后,用Bradford法測(cè)定蛋白濃度(參見(jiàn)圖2)。三、動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)(1)小鼠分組與免疫方案分組將24只BALB/c小鼠分成4組,于小鼠背部皮下按照口107個(gè)/只,每組6只分別接種胃*MFC和胰腺*MPC-83細(xì)胞各2組。每個(gè)腫瘤細(xì)胞接種2組荷瘤小鼠,待成瘤后,按照常規(guī)免疫方法分別注射鹽水。在第4次免疫后10天摘眼球**,測(cè)定血清中抗。免疫方案背部皮下多點(diǎn)注射;rhClaudinl8,2:40Wg/只+生理鹽水總體積為200txL/只,分別隔周注射;第4次,使用:40ug/只+生理鹽水200wL/只,腹腔注射。(2)£03八法測(cè)定血清抗(:1&11&在第4次免疫后10天**,收集抗血清,通過(guò)間接ELISA測(cè)定血清抗。每個(gè)樣品均設(shè)6個(gè)孔。ELISA實(shí)驗(yàn)方法如下所需溶液的配制a.包被緩沖液碳酸鹽緩沖液取Na2C03:g(終濃度mol/L),NaHC03:(終濃度mol/L),純水定容至200mL(),有效期兩周。b.洗滌液含Tween-20的PBS()。c.封閉液含1%BSA的洗滌液。d.稀釋液含BSA的洗滌液。e.底物緩沖液Na2HP04*12H20:g,檸檬酸mL(pH)。f.底物顯色液OPD:8mg,3%H202:30uL。h.終止液H2S04:lmol/L。北京高純度人源Claudin18.2蛋白****
天津IMAB362特異人源Claudin18.2蛋白
25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇),100V恒壓lh,將蛋白從凝膠電轉(zhuǎn)移至NC膜上,電轉(zhuǎn)移結(jié)束后,取出NC膜,用洗滌液TBST(含mol/LTBS、)室溫洗3次,浸入封閉液(含2%BSA的TBST)中37°C,1h,洗滌液(TBST)室溫洗3次,加山羊抗人(Santacruze公司),37'C孵育1h,TBST室溫洗膜3次,加入兔抗山羊IgG-HRP二抗(中杉公司),37。C孵育1h,TBST室溫洗膜3次,再用TBS洗3次,NC膜浸入OPD顯色液中,室溫避光顯色10min,蒸餾水沖洗終止反應(yīng)(參見(jiàn)圖3)。(3)融合蛋白的純化和復(fù)性取含,5000rpm離心10min,收菌,超聲裂菌;4°C,12000rpm,離心20min,分別收集上清液和沉淀。將沉淀用6mol/L尿素溶液重懸,4'C下靜置溶解。將溶解的沉淀和上清分別取樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳,對(duì)目的蛋白的表達(dá)形式進(jìn)行分析。在證實(shí)目的蛋白以包涵體的形式表達(dá)后,用Ni-NTA柱親和層析純化所溶解的沉淀(包涵體)。按1g菌體加10mL裂菌緩沖液的比例將菌體重懸,冰浴條件下進(jìn)行超聲裂菌。12000rpm,離心15min,棄上清,1g沉淀加10mL6M尿素,,MTris(pH)。4"C攪拌2h,12000rpm,離心15min,共離心2次,收集上清待用。用6M尿素,MNaH2P04,MTris()充分平衡Ni柱,先用含10mmo1咪唑的6M尿素,,()洗脫雜蛋白。天津IMAB362特異人源Claudin18.2蛋白
上海朝瑞生物科技有限公司主要經(jīng)營(yíng)范圍是化工,擁有一支專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和良好的市場(chǎng)口碑。上海朝瑞科技致力于為客戶提供良好的科研技術(shù)服務(wù),應(yīng)用技術(shù)服務(wù),科研成果轉(zhuǎn)化,科學(xué)產(chǎn)品銷售,一切以用戶需求為中心,深受廣大客戶的歡迎。公司注重以質(zhì)量為中心,以服務(wù)為理念,秉持誠(chéng)信為本的理念,打造化工良好品牌。上海朝瑞科技憑借創(chuàng)新的產(chǎn)品、專業(yè)的服務(wù)、眾多的成功案例積累起來(lái)的聲譽(yù)和口碑,讓企業(yè)發(fā)展再上新高。
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