需求數(shù)量:0
價格要求:面議
所在地:上海市
包裝要求:
產(chǎn)品關鍵詞:北京Virus法細胞永生化,細胞永生化
***更新:2020-09-02 22:09:53
瀏覽次數(shù):0次
聯(lián)系我們
當前位置:首頁?產(chǎn)品供應?農(nóng)業(yè)?農(nóng)林牧漁項目合作?北京Virus法細胞永生化 歡迎咨詢 上海朝瑞生物科技供應
需求數(shù)量:0
價格要求:面議
所在地:上海市
包裝要求:
產(chǎn)品關鍵詞:北京Virus法細胞永生化,細胞永生化
***更新:2020-09-02 22:09:53
瀏覽次數(shù):0次
聯(lián)系我們聯(lián)系人:仲先生
郵箱: scienceladder@163.com
電話: 18621867065
傳真: 021_
網(wǎng)址:
手機: 021-54133071
地址: 上海市松江區(qū)廣富林路697號昂立大廈2113室
[當前離線] [加為商友] [發(fā)送信件]
詳細說明
而且當皮膚細胞從痣進展為惡性黑色素瘤時,也追蹤了它們,結果提示著端粒酶在**中起著更為復雜的作用。論文通信作者、加州大學伯克利分校分子與細胞生物學助理教授DirkHockemeyer說:“我們的研究結果對如何考慮促進**產(chǎn)生的**早過程和將端粒酶作為***靶點產(chǎn)生影響。這也意味著端粒生物學在**產(chǎn)生的早期階段發(fā)揮的作用已被極大地忽視。我們在黑色素瘤中的發(fā)現(xiàn)很可能也適合其他的**類型,這也就意味著人們會更加仔細地研究較早的端??s短作為一種*****機制所發(fā)揮的作用。”從痣到**Hockemeyer、他在加州大學伯克利分校的同事們與加州大學舊金山分校皮膚病理學家BorisBastian及其同事合作,發(fā)現(xiàn)細胞永生化是一個兩步驟過程,**初由***端粒酶的突變引起,但這種***水平較低。該突變位于端粒酶基因上游的一個啟動子(被稱作TERT),北京Virus法細胞永生化,該啟動子調(diào)節(jié)著端粒酶的表達水平,北京Virus法細胞永生化。四年前,北京Virus法細胞永生化,已有人報道過,大約70%的惡性黑色素瘤在TERT啟動子中具有這種相同的突變。Hockemeyer說,這種TERT啟動子突變不能產(chǎn)生足夠的端端粒酶來使得前*細胞永生化,但會延緩正常的細胞衰老,從而允許有更多的時間來讓更多的***端粒酶的變化發(fā)生。他猜測端粒酶水平足以延長**短的端粒。北京Virus法細胞永生化
例如EB***(epstein-barrvirus,EBV)、猿猴***40(simianvirus40,SV40)和人**瘤***(humanpapillomavirus,HPV)。這些******其天然宿主細胞,能誘導細胞永生化。EBV能使B淋巴母細胞永生化形成淋巴母細胞樣細胞系,它是通過潛伏蛋白***細胞因子與其受體相互作用的途徑使細胞永生的。EBV永生化B細胞的一個*****的特點是端粒酶活性的提高,這可能是導致B細胞永生的主要原因。目前,EB***介導的細胞永生化應用**多的是B淋巴細胞,其他細胞中的應用很少。SV40是簡單的真核細胞***,SV40的T抗原片段是**常用的目的片段,將其整合入靶細胞核內(nèi)并表達,可導致細胞增殖活力的改變并表現(xiàn)出多種與**相關的轉(zhuǎn)化顯型。應用的方法包括:野生型SV40***共培養(yǎng)***靶細胞、磷酸鈣法、電穿孔以及逆轉(zhuǎn)錄***載體法等。HPV已成功將人的包皮細胞、角化上皮以及乳腺、胰導管和口腔等的上皮細胞永生化。HPV***的早期表達蛋白E6和E7在細胞永生化中起決定性作用。E6和E7蛋白能夠改變細胞的終末分化,誘導細胞進入S期,使細胞繞過正常細胞的周期檢查點。***法獲得的永生化細胞往往發(fā)生細胞表型改變,而且一般只應用于***的特定宿主細胞。由于該法將整個***基因組導入了細胞,因此。上海HPV法細胞永生化專業(yè)定制
一、 試劑
1、 淋巴細胞分離液:避光4度保存,用前在37度水浴中加溫。整個分離過程中,溫度應控制在8-28度,溫度過高或過低均影響分離質(zhì)量。
2、 全培養(yǎng)基(用前配置):RPM1640培養(yǎng)基,內(nèi)含20%胎牛血清(Gibco){56℃滅活30分鐘},1.6-1.8% 1M的HEPES,1.2% 0.2mol/L谷氨酰胺,1%青霉素和鏈霉素。
3、 環(huán)胞酶素A(CyA):5ml(250mg)/瓶,用1640培養(yǎng)基稀釋成0.2mg/ml,使用時終濃度為2ug/ml(0.5%)。
4、 EBV液購自中國科學院遺傳所,儲存于零下80度。使用時從冰箱中取出,37度迅速融化,用0.22um的濾膜過濾,不要超過0.5-1小時。
二、 建株方法
1、 取外周血3-4ml,肝素抗凝(血液室溫可放置48小時),應用液濃度5u/ml,可加入5-10ml外周血。
2、 將血液與等量1640培養(yǎng)液混勻后,沿管壁漸漸加入到含有4ml淋巴細胞分離液的離心管中(混合血:淋巴細胞分離液=6:4),3000轉(zhuǎn)離心10分鐘。
3、 吸取白細胞層,移入另一支離心管中,加入不含血清的1640培養(yǎng)液6ml,輕輕混勻,進行***次洗滌。1500轉(zhuǎn)離心15分鐘。
4、 棄上清液,再加6ml1640全培養(yǎng)液進行第二次洗滌,離心1500轉(zhuǎn)15分鐘。
5、 棄上清液,加入2ml1640全培養(yǎng)基(全培養(yǎng)基加入前,置37度水浴10分鐘),然后加入環(huán)胞霉素A(4%)和1.2mlEBV液/份,充分混勻后移入到25平方厘米的培養(yǎng)瓶,置37度,5%CO2培養(yǎng)箱中。
6、 每2-3天加入3ml新鮮配制的培養(yǎng)基(1.6% 1M HEPES 緩沖液;15%胎牛血清(FBS);1%青霉素和鏈霉素;PRMI 1640補足到**)。7天左右鏡下觀察,可見淋巴細胞明顯增大,出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。
建立人卵巢*永生化細胞系,為卵巢*體外研究提供實驗模型。方法利用基因重組技術構建猴腎virus40(SV40)T抗原基因的gaoxiao真核表達載體pcD2SV40。將其轉(zhuǎn)染10例原代培養(yǎng)的早期傳代細胞,經(jīng)G418篩選,抗性克隆擴大培養(yǎng),建立永生化細胞系。免疫組化檢測細胞的上皮起源,用PCR、RTPCR和SouthernBlot方法鑒定SV40T基因在轉(zhuǎn)染細胞中的表達。觀察所建立的永生化細胞系的染色體核型。結果10例轉(zhuǎn)染細胞中,6例篩選出抗性克隆。角蛋白免疫組化證實3例為上皮起源。其中2例上皮起源細胞得以擴大培養(yǎng)成系,長期穩(wěn)定傳代,分別命名為BUPH:OVSC2和BUPH:OVCA3。經(jīng)鑒定兩種細胞系中存在SV40T在基因水平及轉(zhuǎn)錄水平的表達。其染色體核型均符合人體惡性細胞特征。結論利用SV40T抗原基因進行人卵巢*原代細胞的永生化是一種可行的、可重復的建系方法,可提高卵巢*細胞成系機率。上海HPV法細胞永生化專業(yè)定制
北京Virus法細胞永生化
正常組織來源的細胞在體外培養(yǎng)條件下可分裂生長,但經(jīng)過有限次數(shù)的傳代后,就會停止增殖,發(fā)生衰老和死亡,這種現(xiàn)象稱之為海弗利克極限。有的細胞自發(fā)或受外界因素的影響,可以從增殖衰老危機中逃離,從而擁有無限增殖的能力,該過程稱之為細胞永生化。然而自發(fā)永生化的幾率非常小,嚙齒類動物為10-5-10-6, 而人類細胞則更為罕見, 小于10-12。通過轉(zhuǎn)染技術將外源性永生化基因?qū)肽康募毎蛘T導衰老相關基因突變,可以增加永生化的發(fā)生率,從而建立穩(wěn)定的永生化細胞株。
永生化細胞能夠提供穩(wěn)定均一、性狀一致的細胞來源,并且可以降低材料成本,因此,它是體外研究細胞增殖、分化、凋亡、衰老等的理想模型,加之,永生化細胞和**細胞關系密切,所以永生化細胞也是研究**發(fā)生機制的重要模型。另外,由于永生化細胞具有可以多次傳代的特性,可以利用各種細胞永生化的方法使那些傳代困難、增殖緩慢、容易衰老的細胞獲得永生,從而為研究人員提供更多的細胞資源。 北京Virus法細胞永生化
上海朝瑞生物科技有限公司是一家1.發(fā)布科研技術 2.發(fā)布應用技術 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務 9.發(fā)布實驗室及儀器設備共享 10.發(fā)布培訓基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務 15.發(fā)布資源交換業(yè)務的公司,致力于發(fā)展為創(chuàng)新務實、誠實可信的企業(yè)。公司自創(chuàng)立以來,投身于科研技術服務,應用技術服務,科研成果轉(zhuǎn)化,科學產(chǎn)品銷售,是化工的主力軍。上海朝瑞科技致力于把技術上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對用戶產(chǎn)品上的貼心,為用戶帶來良好體驗。上海朝瑞科技始終關注化工行業(yè)。滿足市場需求,提高產(chǎn)品價值,是我們前行的力量。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/1134302.html
本企業(yè)其它產(chǎn)品 更多>>