Western blotting堪稱蛋白質(zhì)研究中的經(jīng)典方法。學(xué)生物的幾乎無人不曉，即使沒親手做過，也清楚其原理。經(jīng)典果然是經(jīng)典，30年來其操作步驟幾乎沒變過，依然是跑膠-轉(zhuǎn)膜-封閉-孵育-檢測。近兩年，各大公司陸續(xù)推出了Western blotting方面的新儀器，如新型轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，確實能省時省力不少，但仍然不能完全克服研究人員在面臨的挑戰(zhàn)。Western

blotting仍存在重復(fù)性差、實驗耗時長、無法準(zhǔn)確定量等問題。

近日，江蘇熒光Western Blot實驗外包，美國proteinsimple公司推出了一種Simple Western?分析，徹底改變了整個Western blot。此分析在一臺名為Simon的儀器上開展，江蘇熒光Western Blot實驗外包，江蘇熒光Western Blot實驗外包，Simon將所有實驗步驟自動化，包括蛋白上樣和分離、免疫印跡、洗滌、檢測以及數(shù)據(jù)的定量分析，讓研究人員從繁重的勞動中解放出來，同時避免了可能影響實驗重復(fù)性的人為因素。 江蘇熒光Western Blot實驗外包

(1) SDS-PAGE凝膠配制 

SDS-PAGE凝膠可以使用商業(yè)生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。

(2) 樣品處理：在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻資料配制100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。 

(3) 上樣與電泳：冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。 為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果，以及判斷蛋白分子量大小，比較好使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(P0066)。電泳時通常推薦在上層膠時使用低電壓恒壓電泳，而在溴酚藍(lán)進入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置，低電壓可以設(shè)置在80-100V，高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。通常電泳時溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳，或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況，預(yù)計目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。 江蘇熒光Western Blot實驗外包

轉(zhuǎn)膜完畢后，立即把蛋白膜放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的Western洗滌液(P0023C)中，漂洗1-2分鐘，以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟，一定要注意膜的保濕，避免膜的干燥，否則極易產(chǎn)生較高的背景。用微型臺式真空泵或滴管等吸盡封閉液，立即加入稀釋好的一抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。如果一抗孵育一小時效果不佳，可以4℃緩慢搖動孵育過夜?；蚋鼡?jù)抗體的說明選擇適當(dāng)?shù)姆跤郎囟群蜁r間。微型臺式真空泵或滴管等吸盡洗滌液，立即加入稀釋好的二抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。 回收二抗。加入Western洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長洗滌時間并增加洗滌次數(shù)。使用

ECL化學(xué)發(fā)光試劑來檢測蛋白。壓片可以采用**的壓片暗盒進行。洗片時可以使用X光片自動洗片機。如果沒有自動洗片機，可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進行手工洗片。X光片推薦選用柯達(dá)原裝的生物實驗**柯達(dá)X-OMAT BT膠片。

收集蛋白樣品(Protein sample preparation)

可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖海琖estern及IP細(xì)胞裂解液、RIPA裂解液等，裂解貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白，例如細(xì)胞**白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等，可以參考相關(guān)文獻提取這些亞細(xì)胞組份蛋白，也可以使用試劑盒進行抽提。收集完蛋白樣品后，為確保每個蛋白樣品的上樣量一致，需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同，需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。如果使用Western及IP細(xì)胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白濃度測定試劑盒

全自動單細(xì)胞western blot檢測分析原理：全自動單細(xì)胞western blot分析是單細(xì)胞水平，蛋白質(zhì)表達(dá)定量分析系統(tǒng)。系統(tǒng)采用**的微流控western blot芯片，通過單細(xì)胞微孔設(shè)計，采集單細(xì)胞，然后原位裂解細(xì)胞，釋放蛋白，進行蛋白質(zhì)電泳，將不同分子量蛋白進行分離，提高免疫學(xué)檢測特異性。之后，采用**技術(shù)進行蛋白質(zhì)原位捕獲，使用western blot驗證抗體及熒光標(biāo)記二抗直接雜交，掃描儀進行芯片掃描后，分析軟件對掃描結(jié)果進行深度定量分析。上海微量蛋白Western Blot免疫印跡服務(wù)

江蘇熒光Western Blot實驗外包

近年來銷售競爭能力大幅度提高，成為全球精細(xì)化工產(chǎn)業(yè)極具活力、發(fā)展**快的市場。據(jù)統(tǒng)計，21世紀(jì)初期，歐美等發(fā)達(dá)地區(qū)的精細(xì)化工率已達(dá)到70%左右。當(dāng)前，世界經(jīng)濟復(fù)蘇步伐艱難緩慢，全球市場需求總體偏弱，國際原油和大宗原料價格低迷，能源發(fā)展呈現(xiàn)新的特征。從戰(zhàn)略需求看，發(fā)展科研技術(shù)服務(wù)，應(yīng)用技術(shù)服務(wù)，科研成果轉(zhuǎn)化，科學(xué)產(chǎn)品銷售是必然選擇?；の锪餍袠I(yè)作為細(xì)分領(lǐng)域，除了與現(xiàn)代有限責(zé)任公司企業(yè)發(fā)展趨勢趨同以外，還與化工行業(yè)的發(fā)展情況密切相關(guān)，化工行業(yè)的良好發(fā)展為化工物流行業(yè)的發(fā)展奠定堅實的基礎(chǔ)。如今，1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實驗室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)行業(yè)紛紛走向規(guī)?；?、智能化的道路。加上我國的產(chǎn)業(yè)政策，從環(huán)保的角度、從安全的角度，也要求生產(chǎn)方式從以前傳統(tǒng)的單體設(shè)備的生產(chǎn)，變成自動化、清潔化的生產(chǎn)裝置。江蘇熒光Western Blot實驗外包

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