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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:上海常規(guī)蛋白Western Blot檢測分析服務(wù),western blot
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詳細說明
Western blotting堪稱蛋白質(zhì)研究中的經(jīng)典方法。學生物的幾乎無人不曉,即使沒親手做過,也清楚其原理。經(jīng)典果然是經(jīng)典,30年來其操作步驟幾乎沒變過,依然是跑膠-轉(zhuǎn)膜-封閉-孵育-檢測。近兩年,各大公司陸續(xù)推出了Western blotting方面的新儀器,如新型轉(zhuǎn)印系統(tǒng),確實能省時省力不少,但仍然不能完全克服研究人員在面臨的挑戰(zhàn)。Western
blotting仍存在重復(fù)性差、實驗耗時長、無法準確定量等問題。
近日,美國proteinsimple公司推出了一種Simple Western?分析,徹底改變了整個Western blot。此分析在一臺名為Simon的儀器上開展,Simon將所有實驗步驟自動化,包括蛋白上樣和分離,上海常規(guī)蛋白Western Blot檢測分析服務(wù)、免疫印跡,上海常規(guī)蛋白Western Blot檢測分析服務(wù),上海常規(guī)蛋白Western Blot檢測分析服務(wù)、洗滌、檢測以及數(shù)據(jù)的定量分析,讓研究人員從繁重的勞動中解放出來,同時避免了可能影響實驗重復(fù)性的人為因素。 上海常規(guī)蛋白Western Blot檢測分析服務(wù)
全自動單細胞western blot檢測分析原理:全自動單細胞western blot分析是單細胞水平,蛋白質(zhì)表達定量分析系統(tǒng)。系統(tǒng)采用**的微流控western blot芯片,通過單細胞微孔設(shè)計,采集單細胞,然后原位裂解細胞,釋放蛋白,進行蛋白質(zhì)電泳,將不同分子量蛋白進行分離,提高免疫學檢測特異性。之后,采用**技術(shù)進行蛋白質(zhì)原位捕獲,使用western blot驗證抗體及熒光標記二抗直接雜交,掃描儀進行芯片掃描后,分析軟件對掃描結(jié)果進行深度定量分析。上海常規(guī)蛋白Western Blot檢測分析服務(wù)
(1) SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以使用商業(yè)生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。
(2) 樣品處理:在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積,在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻資料配制100℃或沸水浴加熱3-5分鐘,以充分變性蛋白。
(3) 上樣與電泳:冷卻到室溫后,把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。 為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果,以及判斷蛋白分子量大小,比較好使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標準(P0066)。電泳時通常推薦在上層膠時使用低電壓恒壓電泳,而在溴酚藍進入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標準電泳裝置或類似電泳裝置,低電壓可以設(shè)置在80-100V,高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。通常電泳時溴酚藍到達膠的底端處附近即可停止電泳,或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標準的電泳情況,預(yù)計目的蛋白已經(jīng)被適當分離后即可停止電泳。
轉(zhuǎn)膜(Transfer)
推薦在Western實驗中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)也可以使用,但硝酸纖維素膜比較脆,在操作過程中特別是用鑷子夾取等過程中容易裂開。膜的使用請參考生產(chǎn)商的推薦使用步驟。
通常如果使用Bio-Rad的標準濕式轉(zhuǎn)膜裝置,可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電流為300-400mA,轉(zhuǎn)膜時間為30-60分鐘。也可以在15-20mA轉(zhuǎn)膜過夜。具體的轉(zhuǎn)膜時間要根據(jù)目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的轉(zhuǎn)膜時間越長,目的蛋白的分子量越小,需要的轉(zhuǎn)膜時間越短。在轉(zhuǎn)膜過程中,特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時,通常會有非常嚴重的發(fā)熱現(xiàn)象,比較好把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進行轉(zhuǎn)膜。
轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標準,通常分子量比較大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液(P0022)對膜進行染色,以觀察實際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍快速染色液(P0017)對完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進行染色,以觀察蛋白的殘留情況。
全自動western blot無需凝膠、無需轉(zhuǎn)印,放入您的樣品,按個按鈕,然后就沒事了。首先,將樣品與Simple
Western樣品緩沖液混合,至終濃度1 μg/μL,還原并變性,然后將制備好的樣品、一抗和二抗、化學發(fā)光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后,將Simple
Western分析緩沖液、毛細管和制備好的分析板放入Simon內(nèi),它自動開展所有分析步驟。當?shù)鞍籽刂毠軆?nèi)一個堆積和分離基質(zhì)遷移時,它們分離。分離后的蛋白固定到毛細管壁上。之后利用一抗鑒定目標蛋白,用HRP結(jié)合的二抗和化學發(fā)光底物檢測蛋白。系統(tǒng)自動報告檢測蛋白的分子量和信號。每次實驗可同時分析**多12個樣品,結(jié)果可在3-5小時內(nèi)獲得。15-150 kDa的目標蛋白均可檢測。軟件報告每個檢測蛋白的分子量、面積、面積百分比和信噪比。對于傳統(tǒng)的Western blot而言,結(jié)果的重復(fù)性一直是個挑戰(zhàn),因為缺乏標準化的操作,且多個操作步驟引入了實驗可變性。而Simple Western分析是完全自動化的,因此結(jié)果的重復(fù)性更好。整體的定量也**改善了,因為省去了轉(zhuǎn)印步驟,從而避免了蛋白轉(zhuǎn)移的不一致。 上海常規(guī)蛋白Western Blot檢測分析服務(wù)
上海常規(guī)蛋白Western Blot檢測分析服務(wù)
目前,我國精細化工率在48%左右,與發(fā)達地區(qū)存在較大的差距,整個銷售行業(yè)處于成長期,還有很大的發(fā)展空間。作為科研技術(shù)服務(wù),應(yīng)用技術(shù)服務(wù),科研成果轉(zhuǎn)化,科學產(chǎn)品銷售的重要組成部分,防銹顏料發(fā)揮著減緩金屬腐蝕的效果,常見的含重金屬的防銹顏料雖然性能優(yōu)異,但對環(huán)境會造成極大污染,因而在實際使用中逐漸受到限制?;の锪餍袠I(yè)作為細分領(lǐng)域,除了與現(xiàn)代有限責任公司企業(yè)發(fā)展趨勢趨同以外,還與化工行業(yè)的發(fā)展情況密切相關(guān),化工行業(yè)的良好發(fā)展為化工物流行業(yè)的發(fā)展奠定堅實的基礎(chǔ)。不少行業(yè)行家對智能制造的意義所在進行了定義?!耙话銇碚f,一個行業(yè)的工業(yè)發(fā)展軌跡,普遍都會遵循一個規(guī)律:那就是沿著手工-機械化-電氣化-自動化-信息化-智能制造這樣的道路來發(fā)展?!?。目前,國內(nèi)的1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實驗室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)產(chǎn)制造行業(yè)同樣是在沿著這個軌跡發(fā)展的。上海常規(guī)蛋白Western Blot檢測分析服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司總部位于上海市松江區(qū)廣富林路697號昂立大廈2113室,是一家1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實驗室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司。上海朝瑞科技擁有一支經(jīng)驗豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團隊,以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供科研技術(shù)服務(wù),應(yīng)用技術(shù)服務(wù),科研成果轉(zhuǎn)化,科學產(chǎn)品銷售。上海朝瑞科技不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺,以應(yīng)用為重點,以服務(wù)為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價值,提供更優(yōu)服務(wù)。上海朝瑞科技始終關(guān)注化工市場,以敏銳的市場洞察力,實現(xiàn)與客戶的成長共贏。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/1201658.html
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