蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4 樣品的進一步分離純化 用等電點沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì)，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析，樣品前處理專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)廠家報價、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析（gel-filtration chromatography）又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠（Sephadex）裝入一個柱子中，制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網(wǎng)狀結(jié)構，不同類型凝膠的網(wǎng)孔大小不同。當把蛋白質(zhì)混合樣品加到凝膠柱中時，比凝膠網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可進入網(wǎng)孔內(nèi)，而大于網(wǎng)孔的分子則不能進入被排阻在凝膠顆粒之外，樣品前處理專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)廠家報價。當用洗脫液洗脫時，被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來，而比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可連續(xù)不斷地進入網(wǎng)孔內(nèi)。這樣的小分子不但流經(jīng)的路程長，而且受到來自凝膠內(nèi)部的阻力也很大，所以蛋白質(zhì)越小，從柱子上洗脫下來所需時間越長。由于不同蛋白質(zhì)的分子大小不同，進入網(wǎng)孔的程度不同，樣品前處理專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)廠家報價，因此流出的速度不同，洗脫所用體積及時間不同，從而達到分離的目的。樣品前處理專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)廠家報價

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4.2 纖維素柱層析法 該法是利用蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)作為分離的基礎。離子交換纖維素（cellulose ion-exchanger）是人工合成的纖維素衍生物，它具有松散的親水性網(wǎng)狀結(jié)構，有較大的表面積，使蛋白質(zhì)大分子可以自由通過。因此常用于蛋白質(zhì)的分離。 （1）羧甲基纖維素（CM-纖維素） 在纖維素顆粒上帶有羧甲基基團。在中性pH條件下，羧甲基上的質(zhì)子可解離下來（圖2-27a），而溶液中帶正電荷的蛋白質(zhì)分子可與纖維素顆粒上的羧甲基負電荷結(jié)合。可交換的基團帶正電，因此是一種陽離子交換劑。蛋白質(zhì)與離子交換纖維素之間結(jié)合能力的大小取決于彼此間相反電荷基團之間靜電吸引。 (2）二乙氨基乙基纖維素（DEAE-纖維素） 在中性pH條件下，它含有帶正電荷的基團，可與溶液中的帶負電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合，可交換的基團帶負電荷，因此是一種陰離子交換劑。當某一蛋白質(zhì)混合溶液通過裝有DEAE-纖維素的層析柱時，帶正電荷的蛋白質(zhì)不能結(jié)合而隨著洗脫液的流動先被洗脫下來。帶負電荷的蛋白質(zhì)將被結(jié)合到柱上。結(jié)合力取決于彼此相反電荷基團間的靜電吸引。然后選用一定pH和離子強度的緩沖液進行洗脫，改變蛋白質(zhì)分子所帶的靜電荷，依次從層析柱流出達到相互分離的目的。四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報價

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4.3. 親和層析 親和層析（affinity-chromatography）分離技術是根據(jù)許多蛋白質(zhì)對特定的化學基團具有專一性結(jié)合的原理。這些能被生物大分子如蛋白質(zhì)所識別并與之結(jié)合的基團稱為配基或配體（ligand）。親和層析是一種極有效的分離純化蛋白質(zhì)的方法。例如酶對它的底物具有特殊的親和力；抗原和抗體互為配基。以伴刀豆球蛋白A（concanavalin A）的分離純化為例，由于該蛋白對葡萄糖有專一性親和吸附，因此可把葡萄糖通過適當?shù)幕瘜W反應共價地連接到像瓊脂糖凝膠一類的載體表面上。為了防止載體表面的空間位阻影響待分離的蛋白質(zhì)大分子與其配基的結(jié)合，在配基和載體之間往往插入一段所謂的連接臂（或稱為間隔臂，spacerarm），使配體與載體之間保持足夠的距離。 將這種多糖顆粒裝入一定規(guī)格的玻璃管中就制成了一根親和層析柱。當含有伴刀豆球蛋白的提取液加到層析柱的上部，并沿柱從上往下過時，待純化的蛋白質(zhì)與其特異性配基結(jié)合而被吸附到柱上，其他蛋白因不能與葡萄糖配基結(jié)合將通過柱子而流出（圖2-28a）。然后采用一定的洗脫條件，如濃的葡萄糖溶液進行洗脫，即可把該蛋白質(zhì)洗脫下來，達到與其它蛋白質(zhì)分離的目的。

三、蛋白質(zhì)分子量的測定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質(zhì)溶液在受到強大的離心力作用時，蛋白質(zhì)分子趨于下沉，沉降速度與蛋白質(zhì)分子的大小、密度和分子形狀有關，也與溶劑的密度和粘度有關。蛋白質(zhì)顆粒在離心場中的沉降速度用每單位時間內(nèi)顆粒下沉的距離來表示。 在離心場中，蛋白質(zhì)分子所受到的凈離心力（離心力減去浮力）與溶劑的摩擦力平衡時，每單位離心場強度的沉降速度稱為沉降系數(shù)（Sedimentation Coefficient）。國際上采用Svedberg單位作為沉降系數(shù)的單位，用S表示，以紀念超速離心法的創(chuàng)始人，瑞典***的蛋白質(zhì)化學家T.Svedberg。一個Svedberg單位（或直接稱一個S）為1×10—13s。蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)大約在1×10—13～200×10—13s范圍內(nèi)，即1S～200S。

蛋白質(zhì)分離純化步驟 蛋白質(zhì)分離純化的一般原則： 大多數(shù)蛋白質(zhì)在組織細胞中都是和核酸等生物分子結(jié)合在一起，而且每種類型的細胞都含有成千上萬種不同的蛋白質(zhì)。許多蛋白質(zhì)在結(jié)構、性質(zhì)上有許多相似之處，所以蛋白質(zhì)的分離提純是一項復雜的工作。到目前為止，還沒有一**成的方法能把任何一種蛋白質(zhì)從復雜的混合物中提取出來。但是對于任何一種蛋白質(zhì)都有可能選擇一種較合適的分離純化程序以獲得高純度的制品。且分離的關鍵步驟、基本手段還是共同的。 蛋白質(zhì)提純的目的是增加產(chǎn)品的純度和產(chǎn)量，同時又要保持和提高產(chǎn)品的生物活性。因此，要分離純化某一種蛋白質(zhì)，首先應選擇一種含目的蛋白質(zhì)較豐富的材料。其次，應設法避免蛋白質(zhì)變性，以制備有活性的蛋白質(zhì)。對于大多數(shù)蛋白質(zhì)來說，純化操作都是在0～4℃的低溫下進行的。同時也應避免過酸、過堿的條件以及劇烈的攪拌和振蕩。另外，還要設法除去變性的蛋白質(zhì)和其它雜蛋白，從而達到增加純度和提高產(chǎn)量的目的。四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報價

樣品前處理專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)廠家報價

儀器儀表行業(yè)飛速發(fā)展一是因為我國的經(jīng)濟高速穩(wěn)定發(fā)展的運行;按照過去的經(jīng)驗，如果GDP的增長在10%以上時，儀表行業(yè)的增長率則在26%～30%之間。二是因為我國宏觀調(diào)控對儀表行業(yè)的影響有一個滯后期，儀表往往在工程的后期才交付使用，因此，因宏觀調(diào)控政策而減少的收入對儀表行業(yè)的影響不會太大。進一步提升我國儀器儀表技術和水平，其他內(nèi)資企業(yè)企業(yè)要順應產(chǎn)業(yè)發(fā)展潮流，在穩(wěn)固常規(guī)品種的同時，進一步發(fā)展智能儀器儀表，提升產(chǎn)業(yè)數(shù)字化、智能化、集成化水平。工業(yè)領域轉(zhuǎn)型升級、提升發(fā)展質(zhì)量等有利于儀器儀表行業(yè)的發(fā)展；**安全、社會安全、產(chǎn)業(yè)和信息安全等需要自主、蛋白純化色譜系統(tǒng)，凝膠凈化色譜系統(tǒng)，制備液相色譜，柱塞泵裝備，成為全社會共識；我們必須承認，在科學儀器上，我們跟其他地區(qū)相比，還有很大的差距。這個差距，就是我們提升的空間。合相關部門、大學和企業(yè)之力，中國的生產(chǎn)型必將在不遠的將來，在相關領域的基礎研究和重點光學部件研發(fā)上取得突破，產(chǎn)品進入世界中**水平，企業(yè)得到臺階式上升，迎頭趕上，與全球出名企業(yè)并駕齊驅(qū)。樣品前處理專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)廠家報價

蘇州英賽斯智能科技有限公司是一家機器人與自動化設備、機械電子設備的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及技術咨詢；光學檢測設備、光電產(chǎn)品研發(fā)、制造、銷售；實驗室設備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷售及提供相關的技術咨詢和售后服務；自營和代理各類商品及技術的進出口業(yè)務（限定企業(yè)經(jīng)營或禁止進出口的商品和技術除外）。（依法需經(jīng)批準的項目，經(jīng)相關部門批準后方可開展經(jīng)營活動）的公司，是一家集研發(fā)、設計、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司。公司自創(chuàng)立以來，投身于蛋白純化色譜系統(tǒng)，凝膠凈化色譜系統(tǒng)，制備液相色譜，柱塞泵，是儀器儀表的主力軍。英賽斯繼續(xù)堅定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路，既要實現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長，又要聚焦關鍵領域，實現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破。英賽斯始終關注儀器儀表市場，以敏銳的市場洞察力，實現(xiàn)與客戶的成長共贏。

文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/1327072.html