三、蛋白質(zhì)分子量的測定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質(zhì)溶液在受到強大的離心力作用時，蛋白質(zhì)分子趨于下沉，沉降速度與蛋白質(zhì)分子的大小、密度和分子形狀有關(guān)，也與溶劑的密度和粘度有關(guān)。蛋白質(zhì)顆粒在離心場中的沉降速度用每單位時間內(nèi)顆粒下沉的距離來表示。 在離心場中，蛋白質(zhì)分子所受到的凈離心力（離心力減去浮力）與溶劑的摩擦力平衡時，每單位離心場強度的沉降速度稱為沉降系數(shù)（Sedimentation Coefficient）。國際上采用Svedberg單位作為沉降系數(shù)的單位，智能蛋白純化系統(tǒng)***的選擇，用S表示，智能蛋白純化系統(tǒng)***的選擇，以紀念超速離心法的創(chuàng)始人，瑞典***的蛋白質(zhì)化學(xué)家T.Svedberg。一個Svedberg單位（或直接稱一個S）為1×10—13s，智能蛋白純化系統(tǒng)***的選擇。蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)大約在1×10—13～200×10—13s范圍內(nèi)，即1S～200S。智能蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4 樣品的進一步分離純化 用等電點沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì)，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析（gel-filtration chromatography）又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠（Sephadex）裝入一個柱子中，制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，不同類型凝膠的網(wǎng)孔大小不同。當(dāng)把蛋白質(zhì)混合樣品加到凝膠柱中時，比凝膠網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可進入網(wǎng)孔內(nèi)，而大于網(wǎng)孔的分子則不能進入被排阻在凝膠顆粒之外。當(dāng)用洗脫液洗脫時，被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來，而比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可連續(xù)不斷地進入網(wǎng)孔內(nèi)。這樣的小分子不但流經(jīng)的路程長，而且受到來自凝膠內(nèi)部的阻力也很大，所以蛋白質(zhì)越小，從柱子上洗脫下來所需時間越長。由于不同蛋白質(zhì)的分子大小不同，進入網(wǎng)孔的程度不同，因此流出的速度不同，洗脫所用體積及時間不同，從而達到分離的目的。智能蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

三、蛋白質(zhì)分子量的測定 蛋白質(zhì)分子量測定的方法很多，目前常用的方法有以下幾種。 3.1 凝膠過濾法 凝膠過濾法測定蛋白質(zhì)分子量的原理如“分離純化方法”中所 述。一定型號的凝膠顆粒上具有一定大小的孔隙，只允許較小的分子進入膠粒，而大于孔隙的分子則不能進入膠粒而被排阻在膠粒外面。用洗脫液洗脫時，被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)先被洗脫下來，隨后能夠進入顆粒的蛋白質(zhì)也按分子量大小而先后被洗脫下來，分子量越小的越后被洗脫下來。由于不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質(zhì)分子量范圍，在此范圍內(nèi)，分子量的對數(shù)和洗脫體積之間成線性關(guān)系。因此，用幾種已知分子量的蛋白質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)進行層析分析，以每種蛋白質(zhì)的洗脫體積對它們的分子量的對數(shù)作圖，繪制出標(biāo)準(zhǔn)洗脫曲線。未知蛋白質(zhì)在同樣的條件下進行層析分析，根據(jù)其所用的洗脫體積，從標(biāo)準(zhǔn)洗脫曲線上可求出此未知蛋白質(zhì)對應(yīng)的分子量來。

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 分離純化蛋白質(zhì)的一般程序 2.1 材料的預(yù)處理及細胞破碎 分離提純某一種蛋白質(zhì)時，首先要把蛋白質(zhì)從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態(tài)，不喪失活性。所以要采用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒔M織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有： 1. 機械破碎法 這種方法是利用機械力的剪切作用，使細胞破碎。常用設(shè)備有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。 2. 滲透破碎法 這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。 3. 反復(fù)凍融法 生物組織經(jīng)凍結(jié)后，細胞內(nèi)液結(jié)冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質(zhì)不宜采用此法。 4. 超聲波法 使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破壞微生物細胞等。

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4.3. 親和層析 親和層析（affinity-chromatography）分離技術(shù)是根據(jù)許多蛋白質(zhì)對特定的化學(xué)基團具有專一性結(jié)合的原理。這些能被生物大分子如蛋白質(zhì)所識別并與之結(jié)合的基團稱為配基或配體（ligand）。親和層析是一種極有效的分離純化蛋白質(zhì)的方法。例如酶對它的底物具有特殊的親和力；抗原和抗體互為配基。以伴刀豆球蛋白A（concanavalin A）的分離純化為例，由于該蛋白對葡萄糖有專一性親和吸附，因此可把葡萄糖通過適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)反應(yīng)共價地連接到像瓊脂糖凝膠一類的載體表面上。為了防止載體表面的空間位阻影響待分離的蛋白質(zhì)大分子與其配基的結(jié)合，在配基和載體之間往往插入一段所謂的連接臂（或稱為間隔臂，spacerarm），使配體與載體之間保持足夠的距離。 將這種多糖顆粒裝入一定規(guī)格的玻璃管中就制成了一根親和層析柱。當(dāng)含有伴刀豆球蛋白的提取液加到層析柱的上部，并沿柱從上往下過時，待純化的蛋白質(zhì)與其特異性配基結(jié)合而被吸附到柱上，其他蛋白因不能與葡萄糖配基結(jié)合將通過柱子而流出（圖2-28a）。然后采用一定的洗脫條件，如濃的葡萄糖溶液進行洗脫，即可把該蛋白質(zhì)洗脫下來，達到與其它蛋白質(zhì)分離的目的。樣品前處理化學(xué)分析蛋白純化系統(tǒng)上門維修

智能蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

儀器儀表行業(yè)本身是一個加入，產(chǎn)出周期較長的行業(yè)，所以作為業(yè)內(nèi)廠家，一方面要尋找中、短期市場熱點，另一方面也要在產(chǎn)品、技術(shù)研發(fā)方面有長遠的規(guī)劃;目前，蛋白純化色譜系統(tǒng)，凝膠凈化色譜系統(tǒng)，制備液相色譜，柱塞泵等產(chǎn)品的產(chǎn)量居世界前列，實驗分析儀器等中產(chǎn)品的市場占比不斷上升，行業(yè)技術(shù)上總體已達到的中等國際水平，少數(shù)產(chǎn)品接近或達到當(dāng)前較高國際水平。目前我國機器人與自動化設(shè)備、機械電子設(shè)備的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及技術(shù)咨詢；光學(xué)檢測設(shè)備、光電產(chǎn)品研發(fā)、制造、銷售；實驗室設(shè)備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷售及提供相關(guān)的技術(shù)咨詢和售后服務(wù)；自營和代理各類商品及技術(shù)的進出口業(yè)務(wù)（限定企業(yè)經(jīng)營或禁止進出口的商品和技術(shù)除外）。（依法需經(jīng)批準(zhǔn)的項目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動）產(chǎn)品，主要集中在中低檔市場，而市場則主要被國外品牌所占據(jù)。在某些領(lǐng)域，國產(chǎn)產(chǎn)品甚至是空白，這就需要未來我國儀器儀表向市場進軍，擴大產(chǎn)品占比。從加工廣義角度來說，儀器儀表也可具有自動操控、報警、信號傳遞和數(shù)據(jù)處理等功能，例如用于工業(yè)生產(chǎn)過程自動操控中的氣動調(diào)節(jié)儀表，和電動調(diào)節(jié)儀表，以及集散型儀表操控系統(tǒng)也皆屬于儀器儀表。智能蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

蘇州英賽斯智能科技有限公司致力于儀器儀表，是一家生產(chǎn)型公司。公司業(yè)務(wù)分為蛋白純化色譜系統(tǒng)，凝膠凈化色譜系統(tǒng)，制備液相色譜，柱塞泵等，目前不斷進行創(chuàng)新和服務(wù)改進，為客戶提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司從事儀器儀表多年，有著創(chuàng)新的設(shè)計、強大的技術(shù)，還有一批**的專業(yè)化的隊伍，確保為客戶提供良好的產(chǎn)品及服務(wù)。英賽斯秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實”的經(jīng)營理念，全力打造公司的重點競爭力。

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