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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:北京線粒體蛋白Western Blot免疫印跡服務(wù)
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詳細(xì)說明
全自動(dòng)western blot無需凝膠、無需轉(zhuǎn)印,放入您的樣品,按個(gè)按鈕,然后就沒事了。首先,將樣品與Simple
Western樣品緩沖液混合,至終濃度1 μg/μL,還原并變性,然后將制備好的樣品、一抗和二抗、化學(xué)發(fā)光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后,將Simple
Western分析緩沖液、毛細(xì)管和制備好的分析板放入Simon內(nèi),它自動(dòng)開展所有分析步驟。當(dāng)?shù)鞍籽刂?xì)管內(nèi)一個(gè)堆積和分離基質(zhì)遷移時(shí),它們分離。分離后的蛋白固定到毛細(xì)管壁上。之后利用一抗鑒定目標(biāo)蛋白,用HRP結(jié)合的二抗和化學(xué)發(fā)光底物檢測蛋白。系統(tǒng)自動(dòng)報(bào)告檢測蛋白的分子量和信號(hào)。每次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)分析**多12個(gè)樣品,北京線粒體蛋白Western Blot免疫印跡服務(wù),結(jié)果可在3-5小時(shí)內(nèi)獲得。15-150 kDa的目標(biāo)蛋白均可檢測,北京線粒體蛋白Western Blot免疫印跡服務(wù)。軟件報(bào)告每個(gè)檢測蛋白的分子量、面積、面積百分比和信噪比。對(duì)于傳統(tǒng)的Western blot而言,北京線粒體蛋白Western Blot免疫印跡服務(wù),結(jié)果的重復(fù)性一直是個(gè)挑戰(zhàn),因?yàn)槿狈?biāo)準(zhǔn)化的操作,且多個(gè)操作步驟引入了實(shí)驗(yàn)可變性。而Simple Western分析是完全自動(dòng)化的,因此結(jié)果的重復(fù)性更好。整體的定量也**改善了,因?yàn)槭∪チ宿D(zhuǎn)印步驟,從而避免了蛋白轉(zhuǎn)移的不一致。
收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖海琖estern及IP細(xì)胞裂解液、RIPA裂解液等,裂解貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對(duì)于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白,例如細(xì)胞**白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白,也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。收集完蛋白樣品后,為確保每個(gè)蛋白樣品的上樣量一致,需要測定每個(gè)蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y定方法對(duì)于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。如果使用Western及IP細(xì)胞裂解液或RIPA裂解液,可以使用BCA蛋白濃度測定試劑盒
Western blotting堪稱蛋白質(zhì)研究中的經(jīng)典方法。學(xué)生物的幾乎無人不曉,即使沒親手做過,也清楚其原理。經(jīng)典果然是經(jīng)典,30年來其操作步驟幾乎沒變過,依然是跑膠-轉(zhuǎn)膜-封閉-孵育-檢測。近兩年,各大公司陸續(xù)推出了Western blotting方面的新儀器,如新型轉(zhuǎn)印系統(tǒng),確實(shí)能省時(shí)省力不少,但仍然不能完全克服研究人員在面臨的挑戰(zhàn)。Western
blotting仍存在重復(fù)性差、實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長、無法準(zhǔn)確定量等問題。
近日,美國proteinsimple公司推出了一種Simple Western?分析,徹底改變了整個(gè)Western blot。此分析在一臺(tái)名為Simon的儀器上開展,Simon將所有實(shí)驗(yàn)步驟自動(dòng)化,包括蛋白上樣和分離、免疫印跡、洗滌、檢測以及數(shù)據(jù)的定量分析,讓研究人員從繁重的勞動(dòng)中解放出來,同時(shí)避免了可能影響實(shí)驗(yàn)重復(fù)性的人為因素。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/157632.html
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