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產(chǎn)品關鍵詞:上海熒光Western Blot免疫印跡服務
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詳細說明
全自動單細胞western blot檢測分析原理:全自動單細胞western blot分析是單細胞水平,蛋白質(zhì)表達定量分析系統(tǒng)。系統(tǒng)采用**的微流控western blot芯片,通過單細胞微孔設計,采集單細胞,上海熒光Western Blot免疫印跡服務,然后原位裂解細胞,釋放蛋白,進行蛋白質(zhì)電泳,上海熒光Western Blot免疫印跡服務,將不同分子量蛋白進行分離,提高免疫學檢測特異性。之后,采用**技術進行蛋白質(zhì)原位捕獲,使用western blot驗證抗體及熒光標記二抗直接雜交,上海熒光Western Blot免疫印跡服務,掃描儀進行芯片掃描后,分析軟件對掃描結(jié)果進行深度定量分析。
免疫印跡法(immunoblotting )因與Southern早先建立的檢測核酸的印跡方法Southern
blot相類似,亦被稱為Western blot。免疫印跡(western blotting)是在蛋白質(zhì)電泳分離和抗原抗體檢測的基礎上發(fā)展起來一項檢測蛋白質(zhì)的技術。它將SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的辨力與抗原抗體反應的特異性相結(jié)合。典型的印跡實驗包括三個步驟①蛋白質(zhì)的電泳分離;②將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固體膜上,用非特異性,非反應活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質(zhì)區(qū)域;③免疫學檢測。免疫印跡克服了聚丙烯酰胺凝膠電泳后直接在凝膠上進行免疫學分析的弊端,極大地提高了其利用率、分辨率和靈敏度,使其成為使用**的免疫化學方法之一。
1.為SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白樣品經(jīng)SDS處理后帶陰電荷,在聚丙烯酰膪凝膠中從陰極向陽極泳動,分子量越小,泳動速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見(只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶)。2.電轉(zhuǎn)移。將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上,選用低電壓(100V)和大電流(1~2A),通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見。3.酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜(相當于包被了抗原的固相載體)依次與特異性抗體和酶標第二抗體作用后,加入能形成不溶性顯色物的酶反應底物,使區(qū)帶染色。常用的HRP底物為3,3,—二氨基聯(lián)苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈藍紫色)。陽性反應的條帶清晰可辨,并可根據(jù)SDS-PAGE時加人的分子量標準,確定各組分的分子量。本法綜合了SDS-PAGE的辨力和ELISA法的高特異性和敏感性,是一個有效的分析手段,不僅廣泛應用于分析抗原組分及其免疫活性,并可用于疾病的診斷。在**中此法作為確診試驗??乖?jīng)電泳轉(zhuǎn)移在硝酸纖維素膜上后,將膜切成小條,配合酶標抗體及顯色底物制成的試劑盒可方便地在實驗室中供檢測用。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/158992.html
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