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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:上海長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
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收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖海琖estern及IP細(xì)胞裂解液、RIPA裂解液等,裂解貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對(duì)于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白,例如細(xì)胞**白,上海長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白,也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提,上海長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包。收集完蛋白樣品后,為確保每個(gè)蛋白樣品的上樣量一致,需要測(cè)定每個(gè)蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,上海長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y(cè)定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y(cè)定方法對(duì)于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。如果使用Western及IP細(xì)胞裂解液或RIPA裂解液,可以使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒
1.為SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)??乖鹊鞍讟悠方?jīng)SDS處理后帶陰電荷,在聚丙烯酰膪凝膠中從陰極向陽(yáng)極泳動(dòng),分子量越小,泳動(dòng)速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見(jiàn)(只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶)。2.電轉(zhuǎn)移。將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上,選用低電壓(100V)和大電流(1~2A),通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見(jiàn)。3.酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜(相當(dāng)于包被了抗原的固相載體)依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后,加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物,使區(qū)帶染色。常用的HRP底物為3,3,—二氨基聯(lián)苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈藍(lán)紫色)。陽(yáng)性反應(yīng)的條帶清晰可辨,并可根據(jù)SDS-PAGE時(shí)加人的分子量標(biāo)準(zhǔn),確定各組分的分子量。本法綜合了SDS-PAGE的辨力和ELISA法的高特異性和敏感性,是一個(gè)有效的分析手段,不僅廣泛應(yīng)用于分析抗原組分及其免疫活性,并可用于疾病的診斷。在**中此法作為確診試驗(yàn)。抗原經(jīng)電泳轉(zhuǎn)移在硝酸纖維素膜上后,將膜切成小條,配合酶標(biāo)抗體及顯色底物制成的試劑盒可方便地在實(shí)驗(yàn)室中供檢測(cè)用。
全自動(dòng)單細(xì)胞western blot檢測(cè)分析原理:全自動(dòng)單細(xì)胞western blot分析是單細(xì)胞水平,蛋白質(zhì)表達(dá)定量分析系統(tǒng)。系統(tǒng)采用**的微流控western blot芯片,通過(guò)單細(xì)胞微孔設(shè)計(jì),采集單細(xì)胞,然后原位裂解細(xì)胞,釋放蛋白,進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳,將不同分子量蛋白進(jìn)行分離,提高免疫學(xué)檢測(cè)特異性。之后,采用**技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)原位捕獲,使用western blot驗(yàn)證抗體及熒光標(biāo)記二抗直接雜交,掃描儀進(jìn)行芯片掃描后,分析軟件對(duì)掃描結(jié)果進(jìn)行深度定量分析。
文章來(lái)源地址: http://www.cdcfah.com/cp/158993.html
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