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蛋白質分離純化步驟(二) 2.4.3. 親和層析 親和層析(affinity-chromatography)分離技術是根據(jù)許多蛋白質對特定的化學基團具有專一性結合的原理,直銷蛋白純化系統(tǒng)上門維修。這些能被生物大分子如蛋白質所識別并與之結合的基團稱為配基或配體(ligand),直銷蛋白純化系統(tǒng)上門維修。親和層析是一種極有效的分離純化蛋白質的方法。例如酶對它的底物具有特殊的親和力;抗原和抗體互為配基。以伴刀豆球蛋白A(concanavalin A)的分離純化為例,由于該蛋白對葡萄糖有專一性親和吸附,因此可把葡萄糖通過適當?shù)幕瘜W反應共價地連接到像瓊脂糖凝膠一類的載體表面上。為了防止載體表面的空間位阻影響待分離的蛋白質大分子與其配基的結合,在配基和載體之間往往插入一段所謂的連接臂(或稱為間隔臂,spacerarm),使配體與載體之間保持足夠的距離。 將這種多糖顆粒裝入一定規(guī)格的玻璃管中就制成了一根親和層析柱。當含有伴刀豆球蛋白的提取液加到層析柱的上部,并沿柱從上往下過時,直銷蛋白純化系統(tǒng)上門維修,待純化的蛋白質與其特異性配基結合而被吸附到柱上,其他蛋白因不能與葡萄糖配基結合將通過柱子而流出(圖2-28a)。然后采用一定的洗脫條件,如濃的葡萄糖溶液進行洗脫,即可把該蛋白質洗脫下來,達到與其它蛋白質分離的目的。直銷蛋白純化系統(tǒng)上門維修
蛋白質純化方法-親和層析親和層析法包括特異性配體親和層析法以及通用性配體親和層析法。比較這兩種親和層析法。特異性配體親和層析法通常將復雜的生命大分子物質作為配體,它的結合力比較大河吸附選擇性比較強。而通用性配體親和層析法通常將簡單的小分子物質作為配體,因此,它具有低廉的成本,吸附容量比較高,通過對吸附和脫附條件的改善能夠使得層析的分辨率提高。原理親和層析的原理類似于酶-底物,***-受體與抗原-抗體等特異性反應的機理。有一定的親和力在每對反應物之間。與在酶與底物的反應中,只有特異的底物才可以結合一定的酶,使復合物產生相同。在親和層析中,只有特異的配體才可以和一定的生命大分子有親和力,并且使復合物產生。親和層析配體呈固相,而酶與底物的反應底物呈液相是它們的不同點。事實上,親和層析是在含有活化基團的基質M上以共價鍵的方式固化具有識別能力的配體L,將固相載體制作成功而固化后的配體束縛特異物質的能力依然保持。所以當在小層析柱裝入固相載體,使得欲分離的樣品在該柱經(jīng)過。此時,樣品中對配體有親和力的物質S就能夠通過結構互補效應、范德瓦爾力與靜電引力等作用在固相載體上吸附著。 江蘇直銷蛋白純化系統(tǒng)
三、蛋白質分子量的測定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質溶液在受到強大的離心力作用時,蛋白質分子趨于下沉,沉降速度與蛋白質分子的大小、密度和分子形狀有關,也與溶劑的密度和粘度有關。蛋白質顆粒在離心場中的沉降速度用每單位時間內顆粒下沉的距離來表示。 在離心場中,蛋白質分子所受到的凈離心力(離心力減去浮力)與溶劑的摩擦力平衡時,每單位離心場強度的沉降速度稱為沉降系數(shù)(Sedimentation Coefficient)。國際上采用Svedberg單位作為沉降系數(shù)的單位,用S表示,以紀念超速離心法的創(chuàng)始人,瑞典***的蛋白質化學家T.Svedberg。一個Svedberg單位(或直接稱一個S)為1×10—13s。蛋白質的沉降系數(shù)大約在1×10—13~200×10—13s范圍內,即1S~200S。
蛋白質分離純化步驟(二) 2.4.2 纖維素柱層析法 該法是利用蛋白質的酸堿性質作為分離的基礎。離子交換纖維素(cellulose ion-exchanger)是人工合成的纖維素衍生物,它具有松散的親水性網(wǎng)狀結構,有較大的表面積,使蛋白質大分子可以自由通過。因此常用于蛋白質的分離。 (1)羧甲基纖維素(CM-纖維素) 在纖維素顆粒上帶有羧甲基基團。在中性pH條件下,羧甲基上的質子可解離下來(圖2-27a),而溶液中帶正電荷的蛋白質分子可與纖維素顆粒上的羧甲基負電荷結合??山粨Q的基團帶正電,因此是一種陽離子交換劑。蛋白質與離子交換纖維素之間結合能力的大小取決于彼此間相反電荷基團之間靜電吸引。 (2)二乙氨基乙基纖維素(DEAE-纖維素) 在中性pH條件下,它含有帶正電荷的基團,可與溶液中的帶負電荷的蛋白質結合,可交換的基團帶負電荷,因此是一種陰離子交換劑。當某一蛋白質混合溶液通過裝有DEAE-纖維素的層析柱時,帶正電荷的蛋白質不能結合而隨著洗脫液的流動先被洗脫下來。帶負電荷的蛋白質將被結合到柱上。結合力取決于彼此相反電荷基團間的靜電吸引。然后選用一定pH和離子強度的緩沖液進行洗脫,改變蛋白質分子所帶的靜電荷,依次從層析柱流出達到相互分離的目的。
蛋白質分離純化步驟(二) 2.2 蛋白質的抽提 通常選擇適當?shù)木彌_液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據(jù)欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等),使膜結構破壞,利于蛋白質與膜分離。在抽提過程中,應注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質的變性。 2.3蛋白質粗制品的獲得 選用適當?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法: 1. 等電點沉淀法 不同蛋白質的等電點不同,可用等電點沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質仍保持其天然性質,并能再度溶解而不變性。 3. 有機溶劑沉淀法 中性有機溶劑如乙醇、**,它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉淀出來,因此可用來沉淀蛋白質。此外,有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層,促使蛋白質分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機溶劑會使蛋白質變性,使用該法時,要注意在低溫下操作.樣品前處理智能蛋白純化系統(tǒng)廠家報價
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儀器儀表行業(yè)本身是一個加入,產出周期較長的行業(yè),所以作為業(yè)內廠家,一方面要尋找中、短期市場熱點,另一方面也要在產品、技術研發(fā)方面有長遠的規(guī)劃;目前,蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵等產品的產量居世界前列,實驗分析儀器等中產品的市場占比不斷上升,行業(yè)技術上總體已達到的中等國際水平,少數(shù)產品接近或達到當前較高國際水平。目前我國機器人與自動化設備、機械電子設備的研發(fā)、生產、銷售及技術咨詢;光學檢測設備、光電產品研發(fā)、制造、銷售;實驗室設備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷售及提供相關的技術咨詢和售后服務;自營和代理各類商品及技術的進出口業(yè)務(限定企業(yè)經(jīng)營或禁止進出口的商品和技術除外)。(依法需經(jīng)批準的項目,經(jīng)相關部門批準后方可開展經(jīng)營活動)產品,主要集中在中低檔市場,而市場則主要被國外品牌所占據(jù)。在某些領域,國產產品甚至是空白,這就需要未來我國儀器儀表向市場進軍,擴大產品占比。從加工廣義角度來說,儀器儀表也可具有自動操控、報警、信號傳遞和數(shù)據(jù)處理等功能,例如用于工業(yè)生產過程自動操控中的氣動調節(jié)儀表,和電動調節(jié)儀表,以及集散型儀表操控系統(tǒng)也皆屬于儀器儀表。直銷蛋白純化系統(tǒng)上門維修
蘇州英賽斯智能科技有限公司致力于儀器儀表,是一家生產型公司。公司業(yè)務分為蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵等,目前不斷進行創(chuàng)新和服務改進,為客戶提供良好的產品和服務。公司秉持誠信為本的經(jīng)營理念,在儀器儀表深耕多年,以技術為先導,以自主產品為重點,發(fā)揮人才優(yōu)勢,打造儀器儀表良好品牌。英賽斯立足于全國市場,依托強大的研發(fā)實力,融合前沿的技術理念,飛快響應客戶的變化需求。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/1622099.html
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