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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:上海動物細(xì)胞永生化
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—個性化定制您理想的細(xì)胞系細(xì)胞永生化(Cellimmortalization)是指體外培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)過自發(fā)的或受外界因素的影響從增殖衰老危機(jī)中逃離,從而具有無限增殖能力的過程。正常組織來源的細(xì)胞在通常的體外培養(yǎng)條件下可分裂生長,但經(jīng)過有限次數(shù)的傳代后,就會停止增殖,發(fā)生衰老和死亡。而細(xì)胞培養(yǎng)是一項基本的科研技術(shù),無論是基礎(chǔ)的科學(xué)研究,還是在臨床***,上海動物細(xì)胞永生化,以及生物工程制藥,疫苗研發(fā)等方面,都發(fā)揮著重要的作用。利用基因轉(zhuǎn)染等技術(shù)將外源性永生化基因?qū)肽康募?xì)胞內(nèi),從而建立永生化細(xì)胞株,以達(dá)到使體外培養(yǎng)的細(xì)胞具有無限增殖能力且細(xì)胞間無差異的目的。對細(xì)胞永生化進(jìn)行深入研究,不僅有利于我們了解細(xì)胞增殖與衰老的分子機(jī)制,上海動物細(xì)胞永生化,而且為探尋*****及***移植的研究奠定了堅實的基礎(chǔ)。此外,由于永生化細(xì)胞具有可以多次傳代的特性,可以利用各種細(xì)胞永生化的方法使那些傳代困難,上海動物細(xì)胞永生化、增殖緩慢、容易衰老的細(xì)胞獲得永生,從而為研究人員提供更多的細(xì)胞資源,為科學(xué)研究提供了良好的體外細(xì)胞模型。細(xì)胞永生化的機(jī)理與建立方法由于體外培養(yǎng)細(xì)胞自發(fā)性永生化率非常低,目前普遍采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將外源性永生化基因?qū)肽康募?xì)胞內(nèi),以增加永生化。
一、 試劑
1、 淋巴細(xì)胞分離液:避光4度保存,用前在37度水浴中加溫。整個分離過程中,溫度應(yīng)控制在8-28度,溫度過高或過低均影響分離質(zhì)量。
2、 全培養(yǎng)基(用前配置):RPM1640培養(yǎng)基,內(nèi)含20%胎牛血清(Gibco){56℃滅活30分鐘},1.6-1.8% 1M的HEPES,1.2% 0.2mol/L谷氨酰胺,1%青霉素和鏈霉素。
3、 環(huán)胞酶素A(CyA):5ml(250mg)/瓶,用1640培養(yǎng)基稀釋成0.2mg/ml,使用時終濃度為2ug/ml(0.5%)。
4、 EBV液購自中國科學(xué)院遺傳所,儲存于零下80度。使用時從冰箱中取出,37度迅速融化,用0.22um的濾膜過濾,不要超過0.5-1小時。
二、 建株方法
1、 取外周血3-4ml,肝素抗凝(血液室溫可放置48小時),應(yīng)用液濃度5u/ml,可加入5-10ml外周血。
2、 將血液與等量1640培養(yǎng)液混勻后,沿管壁漸漸加入到含有4ml淋巴細(xì)胞分離液的離心管中(混合血:淋巴細(xì)胞分離液=6:4),3000轉(zhuǎn)離心10分鐘。
3、 吸取白細(xì)胞層,移入另一支離心管中,加入不含血清的1640培養(yǎng)液6ml,輕輕混勻,進(jìn)行***次洗滌。1500轉(zhuǎn)離心15分鐘。
4、 棄上清液,再加6ml1640全培養(yǎng)液進(jìn)行第二次洗滌,離心1500轉(zhuǎn)15分鐘。
5、 棄上清液,加入2ml1640全培養(yǎng)基(全培養(yǎng)基加入前,置37度水浴10分鐘),然后加入環(huán)胞霉素A(4%)和1.2mlEBV液/份,充分混勻后移入到25平方厘米的培養(yǎng)瓶,置37度,5%CO2培養(yǎng)箱中。
6、 每2-3天加入3ml新鮮配制的培養(yǎng)基(1.6% 1M HEPES 緩沖液;15%胎牛血清(FBS);1%青霉素和鏈霉素;PRMI 1640補(bǔ)足到**)。7天左右鏡下觀察,可見淋巴細(xì)胞明顯增大,出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/164571.html
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