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三、蛋白質分子量的測定 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定分子量 蛋白質在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質分子大小、所帶電荷的量以及分子形狀。而SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳與此不同的是在樣品及電泳緩沖液中加入了十二烷基***鈉(sodium dodecylsulfate,SDS)。SDS是一種陰離子去污劑,可使蛋白質變性并解離成亞基。當?shù)鞍踪|樣品中加入SDS(一般加入量為0.1%)后,SDS與蛋白質分子結合,使蛋白質分子帶上大量的負電荷,這些電荷量遠遠超過蛋白質分子原來所帶的電荷量,因而掩蓋了不同蛋白質之間的電荷差異。所有結合SDS的蛋白質-SDS復合物的形狀近似于長的橢園棒,它們的短軸是恒定的,而長軸與蛋白質分子量的大小成正比。這樣,消除了蛋白質之間原有的電荷和形狀的差異,電泳的速度只取決于蛋白質分子量的大小,專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)上門維修。 進行凝膠電泳時,專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)上門維修,常常用一種染料作前沿物質,蛋白質分子在電泳中的移動距離和前沿物質移動的距離之比值稱為相對遷移率,相對遷移率和分子質量的對數(shù)成直線關系。以標準蛋白質分子質量的對數(shù)和其相對遷移率作圖,得到標準曲線,專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)上門維修。將未知蛋白質在同樣條件下電泳,根據(jù)測得的樣品相對遷移率,從標準曲線上便可查出其分子量。專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)上門維修
蛋白質分離純化步驟(二) 2.4.2 纖維素柱層析法 該法是利用蛋白質的酸堿性質作為分離的基礎。離子交換纖維素(cellulose ion-exchanger)是人工合成的纖維素衍生物,它具有松散的親水性網(wǎng)狀結構,有較大的表面積,使蛋白質大分子可以自由通過。因此常用于蛋白質的分離。 (1)羧甲基纖維素(CM-纖維素) 在纖維素顆粒上帶有羧甲基基團。在中性pH條件下,羧甲基上的質子可解離下來(圖2-27a),而溶液中帶正電荷的蛋白質分子可與纖維素顆粒上的羧甲基負電荷結合。可交換的基團帶正電,因此是一種陽離子交換劑。蛋白質與離子交換纖維素之間結合能力的大小取決于彼此間相反電荷基團之間靜電吸引。 (2)二乙氨基乙基纖維素(DEAE-纖維素) 在中性pH條件下,它含有帶正電荷的基團,可與溶液中的帶負電荷的蛋白質結合,可交換的基團帶負電荷,因此是一種陰離子交換劑。當某一蛋白質混合溶液通過裝有DEAE-纖維素的層析柱時,帶正電荷的蛋白質不能結合而隨著洗脫液的流動先被洗脫下來。帶負電荷的蛋白質將被結合到柱上。結合力取決于彼此相反電荷基團間的靜電吸引。然后選用一定pH和離子強度的緩沖液進行洗脫,改變蛋白質分子所帶的靜電荷,依次從層析柱流出達到相互分離的目的。山東智能蛋白純化系統(tǒng)制造廠家
三、蛋白質分子量的測定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質溶液在受到強大的離心力作用時,蛋白質分子趨于下沉,沉降速度與蛋白質分子的大小、密度和分子形狀有關,也與溶劑的密度和粘度有關。蛋白質顆粒在離心場中的沉降速度用每單位時間內(nèi)顆粒下沉的距離來表示。 在離心場中,蛋白質分子所受到的凈離心力(離心力減去浮力)與溶劑的摩擦力平衡時,每單位離心場強度的沉降速度稱為沉降系數(shù)(Sedimentation Coefficient)。國際上采用Svedberg單位作為沉降系數(shù)的單位,用S表示,以紀念超速離心法的創(chuàng)始人,瑞典***的蛋白質化學家T.Svedberg。一個Svedberg單位(或直接稱一個S)為1×10—13s。蛋白質的沉降系數(shù)大約在1×10—13~200×10—13s范圍內(nèi),即1S~200S。
蛋白質純化方法-親和層析親和層析法包括特異性配體親和層析法以及通用性配體親和層析法。比較這兩種親和層析法。特異性配體親和層析法通常將復雜的生命大分子物質作為配體,它的結合力比較大河吸附選擇性比較強。而通用性配體親和層析法通常將簡單的小分子物質作為配體,因此,它具有低廉的成本,吸附容量比較高,通過對吸附和脫附條件的改善能夠使得層析的分辨率提高。原理親和層析的原理類似于酶-底物,***-受體與抗原-抗體等特異性反應的機理。有一定的親和力在每對反應物之間。與在酶與底物的反應中,只有特異的底物才可以結合一定的酶,使復合物產(chǎn)生相同。在親和層析中,只有特異的配體才可以和一定的生命大分子有親和力,并且使復合物產(chǎn)生。親和層析配體呈固相,而酶與底物的反應底物呈液相是它們的不同點。事實上,親和層析是在含有活化基團的基質M上以共價鍵的方式固化具有識別能力的配體L,將固相載體制作成功而固化后的配體束縛特異物質的能力依然保持。所以當在小層析柱裝入固相載體,使得欲分離的樣品在該柱經(jīng)過。此時,樣品中對配體有親和力的物質S就能夠通過結構互補效應、范德瓦爾力與靜電引力等作用在固相載體上吸附著。
蛋白質分離純化步驟(二) 2.2 蛋白質的抽提 通常選擇適當?shù)木彌_液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據(jù)欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等),使膜結構破壞,利于蛋白質與膜分離。在抽提過程中,應注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質的變性。 2.3蛋白質粗制品的獲得 選用適當?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法: 1. 等電點沉淀法 不同蛋白質的等電點不同,可用等電點沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質仍保持其天然性質,并能再度溶解而不變性。 3. 有機溶劑沉淀法 中性有機溶劑如乙醇、**,它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉淀出來,因此可用來沉淀蛋白質。此外,有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層,促使蛋白質分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機溶劑會使蛋白質變性,使用該法時,要注意在低溫下操作.浙江專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)上門維修
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儀器儀表行業(yè)飛速發(fā)展一是因為我國的經(jīng)濟高速穩(wěn)定發(fā)展的運行;按照過去的經(jīng)驗,如果GDP的增長在10%以上時,儀表行業(yè)的增長率則在26%~30%之間。二是因為我國宏觀調控對儀表行業(yè)的影響有一個滯后期,儀表往往在工程的后期才交付使用,因此,因宏觀調控政策而減少的收入對儀表行業(yè)的影響不會太大。在計算機和互聯(lián)網(wǎng)的急速發(fā)展到整個世界的背景下,儀器儀表也開始向網(wǎng)絡化突進,結合新的科技設備,通過廣域網(wǎng)和局域網(wǎng)直接操控儀器儀表,對公司的管理,經(jīng)營一體化,應用模式的分析等各大方面產(chǎn)生影響。其他內(nèi)資企業(yè)企業(yè)通過網(wǎng)絡這個平臺與客戶直接的交流,突破了世界和空間的限制,行家遠程操控對儀器儀表進行維護和分析。高科技的產(chǎn)品也隨之而來。伴隨移動互聯(lián)網(wǎng)的爆發(fā)式增長,如今,它已經(jīng)漸漸取代電子商務成為了整個互聯(lián)網(wǎng)產(chǎn)業(yè)增速**快的領域,而移動終端的入口也隨即成為了傳統(tǒng)行業(yè)的必爭之地。蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵行業(yè)進軍移動互聯(lián)網(wǎng)實現(xiàn)線上發(fā)展勢在必行。我們必須承認,在科學儀器上,我們跟其他地區(qū)相比,還有很大的差距。這個差距,就是我們提升的空間。合相關部門、大學和企業(yè)之力,中國的生產(chǎn)型必將在不遠的將來,在相關領域的基礎研究和重點光學部件研發(fā)上取得突破,產(chǎn)品進入世界中**水平,企業(yè)得到臺階式上升,迎頭趕上,與全球出名企業(yè)并駕齊驅。專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)上門維修
蘇州英賽斯智能科技有限公司總部位于吳江經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)聯(lián)楊路南側、龍橋路西側,是一家機器人與自動化設備、機械電子設備的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及技術咨詢;光學檢測設備、光電產(chǎn)品研發(fā)、制造、銷售;實驗室設備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷售及提供相關的技術咨詢和售后服務;自營和代理各類商品及技術的進出口業(yè)務(限定企業(yè)經(jīng)營或禁止進出口的商品和技術除外)。(依法需經(jīng)批準的項目,經(jīng)相關部門批準后方可開展經(jīng)營活動)的公司。英賽斯擁有一支經(jīng)驗豐富、技術創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團隊,以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵。英賽斯始終以本分踏實的精神和必勝的信念,影響并帶動團隊取得成功。英賽斯始終關注自身,在風云變化的時代,對自身的建設毫不懈怠,高度的專注與執(zhí)著使英賽斯在行業(yè)的從容而自信。
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