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三、蛋白質(zhì)分子量的測定 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定分子量 蛋白質(zhì)在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質(zhì)分子大小、所帶電荷的量以及分子形狀。而SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳與此不同的是在樣品及電泳緩沖液中加入了十二烷基***鈉(sodium dodecylsulfate,山東智能蛋白純化系統(tǒng)上門安裝,SDS)。SDS是一種陰離子去污劑,可使蛋白質(zhì)變性并解離成亞基。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)樣品中加入SDS(一般加入量為0.1%)后,SDS與蛋白質(zhì)分子結(jié)合,使蛋白質(zhì)分子帶上大量的負電荷,這些電荷量遠遠超過蛋白質(zhì)分子原來所帶的電荷量,因而掩蓋了不同蛋白質(zhì)之間的電荷差異。所有結(jié)合SDS的蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物的形狀近似于長的橢園棒,它們的短軸是恒定的,而長軸與蛋白質(zhì)分子量的大小成正比。這樣,消除了蛋白質(zhì)之間原有的電荷和形狀的差異,電泳的速度只取決于蛋白質(zhì)分子量的大小。 進行凝膠電泳時,常常用一種染料作前沿物質(zhì),蛋白質(zhì)分子在電泳中的移動距離和前沿物質(zhì)移動的距離之比值稱為相對遷移率,山東智能蛋白純化系統(tǒng)上門安裝,相對遷移率和分子質(zhì)量的對數(shù)成直線關(guān)系,山東智能蛋白純化系統(tǒng)上門安裝。以標(biāo)準蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的對數(shù)和其相對遷移率作圖,得到標(biāo)準曲線。將未知蛋白質(zhì)在同樣條件下電泳,根據(jù)測得的樣品相對遷移率,從標(biāo)準曲線上便可查出其分子量。山東智能蛋白純化系統(tǒng)上門安裝
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.2 蛋白質(zhì)的抽提 通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等),使膜結(jié)構(gòu)破壞,利于蛋白質(zhì)與膜分離。在抽提過程中,應(yīng)注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質(zhì)的變性。 2.3蛋白質(zhì)粗制品的獲得 選用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法: 1. 等電點沉淀法 不同蛋白質(zhì)的等電點不同,可用等電點沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質(zhì)鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì),并能再度溶解而不變性。 3. 有機溶劑沉淀法 中性有機溶劑如乙醇、**,它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉淀出來,因此可用來沉淀蛋白質(zhì)。此外,有機溶劑會破壞蛋白質(zhì)表面的水化層,促使蛋白質(zhì)分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機溶劑會使蛋白質(zhì)變性,使用該法時,要注意在低溫下操作.北京專業(yè)蛋白純化系統(tǒng)制造廠家
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 分離純化蛋白質(zhì)的一般程序 2.1 材料的預(yù)處理及細胞破碎 分離提純某一種蛋白質(zhì)時,首先要把蛋白質(zhì)從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態(tài),不喪失活性。所以要采用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒔M織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有: 1. 機械破碎法 這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎。常用設(shè)備有,高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。 2. 滲透破碎法 這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。 3. 反復(fù)凍融法 生物組織經(jīng)凍結(jié)后,細胞內(nèi)液結(jié)冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便,但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質(zhì)不宜采用此法。 4. 超聲波法 使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破壞微生物細胞等。
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.4.2 纖維素柱層析法 該法是利用蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)作為分離的基礎(chǔ)。離子交換纖維素(cellulose ion-exchanger)是人工合成的纖維素衍生物,它具有松散的親水性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),有較大的表面積,使蛋白質(zhì)大分子可以自由通過。因此常用于蛋白質(zhì)的分離。 (1)羧甲基纖維素(CM-纖維素) 在纖維素顆粒上帶有羧甲基基團。在中性pH條件下,羧甲基上的質(zhì)子可解離下來(圖2-27a),而溶液中帶正電荷的蛋白質(zhì)分子可與纖維素顆粒上的羧甲基負電荷結(jié)合??山粨Q的基團帶正電,因此是一種陽離子交換劑。蛋白質(zhì)與離子交換纖維素之間結(jié)合能力的大小取決于彼此間相反電荷基團之間靜電吸引。 (2)二乙氨基乙基纖維素(DEAE-纖維素) 在中性pH條件下,它含有帶正電荷的基團,可與溶液中的帶負電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合,可交換的基團帶負電荷,因此是一種陰離子交換劑。當(dāng)某一蛋白質(zhì)混合溶液通過裝有DEAE-纖維素的層析柱時,帶正電荷的蛋白質(zhì)不能結(jié)合而隨著洗脫液的流動先被洗脫下來。帶負電荷的蛋白質(zhì)將被結(jié)合到柱上。結(jié)合力取決于彼此相反電荷基團間的靜電吸引。然后選用一定pH和離子強度的緩沖液進行洗脫,改變蛋白質(zhì)分子所帶的靜電荷,依次從層析柱流出達到相互分離的目的。
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.4 樣品的進一步分離純化 用等電點沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì),須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有:凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析(gel-filtration chromatography)又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠(Sephadex)裝入一個柱子中,制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),不同類型凝膠的網(wǎng)孔大小不同。當(dāng)把蛋白質(zhì)混合樣品加到凝膠柱中時,比凝膠網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可進入網(wǎng)孔內(nèi),而大于網(wǎng)孔的分子則不能進入被排阻在凝膠顆粒之外。當(dāng)用洗脫液洗脫時,被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來,而比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可連續(xù)不斷地進入網(wǎng)孔內(nèi)。這樣的小分子不但流經(jīng)的路程長,而且受到來自凝膠內(nèi)部的阻力也很大,所以蛋白質(zhì)越小,從柱子上洗脫下來所需時間越長。由于不同蛋白質(zhì)的分子大小不同,進入網(wǎng)孔的程度不同,因此流出的速度不同,洗脫所用體積及時間不同,從而達到分離的目的。樣品前處理化學(xué)分析蛋白純化系統(tǒng)制造廠家
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隨著儀器儀表和計算機的完美結(jié)合,為了更好的滿足人們對精神世界的需求,體驗多維世界給人們帶來的**,儀器儀表的虛擬化開始發(fā)展。身臨其境接受客觀實物,給美又增添了一絲創(chuàng)意。在計算機和互聯(lián)網(wǎng)的急速發(fā)展到整個世界的背景下,儀器儀表也開始向網(wǎng)絡(luò)化突進,結(jié)合新的科技設(shè)備,通過廣域網(wǎng)和局域網(wǎng)直接操控儀器儀表,對公司的管理,經(jīng)營一體化,應(yīng)用模式的分析等各大方面產(chǎn)生影響。其他內(nèi)資企業(yè)企業(yè)通過網(wǎng)絡(luò)這個平臺與客戶直接的交流,突破了世界和空間的限制,行家遠程操控對儀器儀表進行維護和分析。高科技的產(chǎn)品也隨之而來。伴隨移動互聯(lián)網(wǎng)的爆發(fā)式增長,如今,它已經(jīng)漸漸取代電子商務(wù)成為了整個互聯(lián)網(wǎng)產(chǎn)業(yè)增速**快的領(lǐng)域,而移動終端的入口也隨即成為了傳統(tǒng)行業(yè)的必爭之地。蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵行業(yè)進軍移動互聯(lián)網(wǎng)實現(xiàn)線上發(fā)展勢在必行。為迎接生產(chǎn)型百年未有之大變局,行家認為,要重新定義中國在世界經(jīng)濟版圖中的地位,要順應(yīng)形勢實現(xiàn)制造升級。以華立集團在境外開發(fā)“中國工業(yè)園”的成功案例來闡述,跨國經(jīng)營要成為企業(yè)主動的戰(zhàn)略選擇,在不確定性中更好地活下去,以全球化視野看問題,很多困惑在全球化過程中會迎刃而解。山東智能蛋白純化系統(tǒng)上門安裝
蘇州英賽斯智能科技有限公司致力于儀器儀表,是一家生產(chǎn)型公司。公司自成立以來,以質(zhì)量為發(fā)展,讓匠心彌散在每個細節(jié),公司旗下蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵深受客戶的喜愛。公司從事儀器儀表多年,有著創(chuàng)新的設(shè)計、強大的技術(shù),還有一批**的專業(yè)化的隊伍,確保為客戶提供良好的產(chǎn)品及服務(wù)。英賽斯立足于全國市場,依托強大的研發(fā)實力,融合前沿的技術(shù)理念,飛快響應(yīng)客戶的變化需求。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/1762568.html
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