三、蛋白質分子量的測定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質溶液在受到強大的離心力作用時，蛋白質分子趨于下沉，沉降速度與蛋白質分子的大小、密度和分子形狀有關，也與溶劑的密度和粘度有關。蛋白質顆粒在離心場中的沉降速度用每單位時間內顆粒下沉的距離來表示，樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)，樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)。 在離心場中，蛋白質分子所受到的凈離心力（離心力減去浮力）與溶劑的摩擦力平衡時，每單位離心場強度的沉降速度稱為沉降系數(shù)（Sedimentation Coefficient），樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)。國際上采用Svedberg單位作為沉降系數(shù)的單位，用S表示，以紀念超速離心法的創(chuàng)始人，瑞典***的蛋白質化學家T.Svedberg。一個Svedberg單位（或直接稱一個S）為1×10—13s。蛋白質的沉降系數(shù)大約在1×10—13～200×10—13s范圍內，即1S～200S。樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)

三、蛋白質分子量的測定 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定分子量 蛋白質在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質分子大小、所帶電荷的量以及分子形狀。而SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳與此不同的是在樣品及電泳緩沖液中加入了十二烷基***鈉（sodium dodecylsulfate,SDS）。SDS是一種陰離子去污劑，可使蛋白質變性并解離成亞基。當?shù)鞍踪|樣品中加入SDS（一般加入量為0.1％）后，SDS與蛋白質分子結合，使蛋白質分子帶上大量的負電荷，這些電荷量遠遠超過蛋白質分子原來所帶的電荷量，因而掩蓋了不同蛋白質之間的電荷差異。所有結合SDS的蛋白質-SDS復合物的形狀近似于長的橢園棒，它們的短軸是恒定的，而長軸與蛋白質分子量的大小成正比。這樣，消除了蛋白質之間原有的電荷和形狀的差異，電泳的速度只取決于蛋白質分子量的大小。 進行凝膠電泳時，常常用一種染料作前沿物質，蛋白質分子在電泳中的移動距離和前沿物質移動的距離之比值稱為相對遷移率，相對遷移率和分子質量的對數(shù)成直線關系。以標準蛋白質分子質量的對數(shù)和其相對遷移率作圖，得到標準曲線。將未知蛋白質在同樣條件下電泳，根據(jù)測得的樣品相對遷移率，從標準曲線上便可查出其分子量。浙江智能蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

蛋白質分離純化步驟 蛋白質分離純化的一般原則： 大多數(shù)蛋白質在組織細胞中都是和核酸等生物分子結合在一起，而且每種類型的細胞都含有成千上萬種不同的蛋白質。許多蛋白質在結構、性質上有許多相似之處，所以蛋白質的分離提純是一項復雜的工作。到目前為止，還沒有一**成的方法能把任何一種蛋白質從復雜的混合物中提取出來。但是對于任何一種蛋白質都有可能選擇一種較合適的分離純化程序以獲得高純度的制品。且分離的關鍵步驟、基本手段還是共同的。 蛋白質提純的目的是增加產品的純度和產量，同時又要保持和提高產品的生物活性。因此，要分離純化某一種蛋白質，首先應選擇一種含目的蛋白質較豐富的材料。其次，應設法避免蛋白質變性，以制備有活性的蛋白質。對于大多數(shù)蛋白質來說，純化操作都是在0～4℃的低溫下進行的。同時也應避免過酸、過堿的條件以及劇烈的攪拌和振蕩。另外，還要設法除去變性的蛋白質和其它雜蛋白，從而達到增加純度和提高產量的目的。

    蛋白質純化方法-親和層析親和層析法包括特異性配體親和層析法以及通用性配體親和層析法。比較這兩種親和層析法。特異性配體親和層析法通常將復雜的生命大分子物質作為配體，它的結合力比較大河吸附選擇性比較強。而通用性配體親和層析法通常將簡單的小分子物質作為配體，因此，它具有低廉的成本，吸附容量比較高，通過對吸附和脫附條件的改善能夠使得層析的分辨率提高。原理親和層析的原理類似于酶-底物，***-受體與抗原-抗體等特異性反應的機理。有一定的親和力在每對反應物之間。與在酶與底物的反應中，只有特異的底物才可以結合一定的酶，使復合物產生相同。在親和層析中，只有特異的配體才可以和一定的生命大分子有親和力，并且使復合物產生。親和層析配體呈固相，而酶與底物的反應底物呈液相是它們的不同點。事實上，親和層析是在含有活化基團的基質M上以共價鍵的方式固化具有識別能力的配體L，將固相載體制作成功而固化后的配體束縛特異物質的能力依然保持。所以當在小層析柱裝入固相載體，使得欲分離的樣品在該柱經過。此時，樣品中對配體有親和力的物質S就能夠通過結構互補效應、范德瓦爾力與靜電引力等作用在固相載體上吸附著。

蛋白質分離純化步驟（二） 2.2 蛋白質的抽提 通常選擇適當?shù)木彌_液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據(jù)欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等），使膜結構破壞，利于蛋白質與膜分離。在抽提過程中，應注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質的變性。 2.3蛋白質粗制品的獲得 選用適當?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法： 1. 等電點沉淀法 不同蛋白質的等電點不同，可用等電點沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質仍保持其天然性質，并能再度溶解而不變性。 3. 有機溶劑沉淀法 中性有機溶劑如乙醇、**，它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低，進而從溶液中沉淀出來，因此可用來沉淀蛋白質。此外，有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層，促使蛋白質分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機溶劑會使蛋白質變性，使用該法時，要注意在低溫下操作.浙江智能蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)

三、蛋白質分子量的測定 蛋白質分子量測定的方法很多，目前常用的方法有以下幾種。 3.1 凝膠過濾法 凝膠過濾法測定蛋白質分子量的原理如“分離純化方法”中所 述。一定型號的凝膠顆粒上具有一定大小的孔隙，只允許較小的分子進入膠粒，而大于孔隙的分子則不能進入膠粒而被排阻在膠粒外面。用洗脫液洗脫時，被排阻的分子量大的蛋白質先被洗脫下來，隨后能夠進入顆粒的蛋白質也按分子量大小而先后被洗脫下來，分子量越小的越后被洗脫下來。由于不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質分子量范圍，在此范圍內，分子量的對數(shù)和洗脫體積之間成線性關系。因此，用幾種已知分子量的蛋白質為標準進行層析分析，以每種蛋白質的洗脫體積對它們的分子量的對數(shù)作圖，繪制出標準洗脫曲線。未知蛋白質在同樣的條件下進行層析分析，根據(jù)其所用的洗脫體積，從標準洗脫曲線上可求出此未知蛋白質對應的分子量來。樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)

蘇州英賽斯智能科技有限公司致力于儀器儀表，是一家生產型的公司。公司業(yè)務分為蛋白純化色譜系統(tǒng)，凝膠凈化色譜系統(tǒng)，制備液相色譜，柱塞泵等，目前不斷進行創(chuàng)新和服務改進，為客戶提供良好的產品和服務。公司注重以質量為中心，以服務為理念，秉持誠信為本的理念，打造儀器儀表良好品牌。英賽斯秉承“客戶為尊、服務為榮、創(chuàng)意為先、技術為實”的經營理念，全力打造公司的重點競爭力。

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