所說的PCR應(yīng)該就是**常規(guī)的PCR，以DNA為模板，通過上下游引物，實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增。

2、RT-PCR一般情況下是指反轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription），盡管有些資料上說實(shí)時(shí)熒光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也簡稱RT-PCR，江蘇DNA甲基化熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)，江蘇DNA甲基化熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)，但是這是不對的，江蘇DNA甲基化熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)，不推薦。

基本操作過程是將所提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，然后將所獲得的cDNA作為模板，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，是一種檢測基因表達(dá)的常用方法。

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR也就是Real-Time PCR，其比較大的作用是檢測樣品中的初始DNA濃度。

至于三者的關(guān)系，RT-PCR和實(shí)時(shí)定量PCR應(yīng)該都屬于PCR，在RNA實(shí)驗(yàn)中，這二者都會(huì)應(yīng)用到

在PCR擴(kuò)增時(shí)加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸：5’端標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)，3’端標(biāo)記一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號。

在熒光擴(kuò)增曲線上人為設(shè)定的一個(gè)值，它可以設(shè)定在熒光信號**擴(kuò)增階段任意位置上，但一般熒光閾值的設(shè)置是PCR反應(yīng)**-15個(gè)循環(huán)熒光信號標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。

PCR檢測方法在臨床醫(yī)學(xué)及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中**有價(jià)值的應(yīng)用領(lǐng)域就是對***性疾病的診斷。理論上，只要樣本有一個(gè)病原體存在，PCR方法就可以檢測到。該方法對病原體的檢測解決了免疫學(xué)檢測的“窗口期”問題，常用于疾病的早期診斷，可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)。

大量的熒光定量PCR研究資料表明，病原體數(shù)量與***性疾病病情的輕重程度、傳染性及***效果均有相關(guān)性。因此，通過熒光定量PCR方法得到的檢測結(jié)果，一定程度上可以準(zhǔn)確反映疾病***的情況。

文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/183890.html