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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng),蛋白純化系統(tǒng)
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三、蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定分子量 蛋白質(zhì)在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質(zhì)分子大小、所帶電荷的量以及分子形狀。而SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳與此不同的是在樣品及電泳緩沖液中加入了十二烷基***鈉(sodium dodecylsulfate,SDS)。SDS是一種陰離子去污劑,可使蛋白質(zhì)變性并解離成亞基。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)樣品中加入SDS(一般加入量為0.1%)后,SDS與蛋白質(zhì)分子結(jié)合,使蛋白質(zhì)分子帶上大量的負(fù)電荷,這些電荷量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)蛋白質(zhì)分子原來(lái)所帶的電荷量,因而掩蓋了不同蛋白質(zhì)之間的電荷差異。所有結(jié)合SDS的蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物的形狀近似于長(zhǎng)的橢園棒,樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng),它們的短軸是恒定的,而長(zhǎng)軸與蛋白質(zhì)分子量的大小成正比。這樣,樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng),消除了蛋白質(zhì)之間原有的電荷和形狀的差異,電泳的速度只取決于蛋白質(zhì)分子量的大小。 進(jìn)行凝膠電泳時(shí),樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng),常常用一種染料作前沿物質(zhì),蛋白質(zhì)分子在電泳中的移動(dòng)距離和前沿物質(zhì)移動(dòng)的距離之比值稱(chēng)為相對(duì)遷移率,相對(duì)遷移率和分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)成直線(xiàn)關(guān)系。以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)和其相對(duì)遷移率作圖,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。將未知蛋白質(zhì)在同樣條件下電泳,根據(jù)測(cè)得的樣品相對(duì)遷移率,從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上便可查出其分子量。樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng)
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.2 蛋白質(zhì)的抽提 通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來(lái)。抽提所用緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等),使膜結(jié)構(gòu)破壞,利于蛋白質(zhì)與膜分離。在抽提過(guò)程中,應(yīng)注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質(zhì)的變性。 2.3蛋白質(zhì)粗制品的獲得 選用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開(kāi)來(lái)。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進(jìn)行的分離。常用的有下列幾種方法: 1. 等電點(diǎn)沉淀法 不同蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同,可用等電點(diǎn)沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質(zhì)鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過(guò)調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來(lái)的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì),并能再度溶解而不變性。 3. 有機(jī)溶劑沉淀法 中性有機(jī)溶劑如乙醇、**,它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度降低,進(jìn)而從溶液中沉淀出來(lái),因此可用來(lái)沉淀蛋白質(zhì)。此外,有機(jī)溶劑會(huì)破壞蛋白質(zhì)表面的水化層,促使蛋白質(zhì)分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機(jī)溶劑會(huì)使蛋白質(zhì)變性,使用該法時(shí),要注意在低溫下操作.樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng)
三、蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定 3.3 沉降法 沉降法又稱(chēng)超速離心法。蛋白質(zhì)溶液在受到強(qiáng)大的離心力作用時(shí),蛋白質(zhì)分子趨于下沉,沉降速度與蛋白質(zhì)分子的大小、密度和分子形狀有關(guān),也與溶劑的密度和粘度有關(guān)。蛋白質(zhì)顆粒在離心場(chǎng)中的沉降速度用每單位時(shí)間內(nèi)顆粒下沉的距離來(lái)表示。 在離心場(chǎng)中,蛋白質(zhì)分子所受到的凈離心力(離心力減去浮力)與溶劑的摩擦力平衡時(shí),每單位離心場(chǎng)強(qiáng)度的沉降速度稱(chēng)為沉降系數(shù)(Sedimentation Coefficient)。國(guó)際上采用Svedberg單位作為沉降系數(shù)的單位,用S表示,以紀(jì)念超速離心法的創(chuàng)始人,瑞典***的蛋白質(zhì)化學(xué)家T.Svedberg。一個(gè)Svedberg單位(或直接稱(chēng)一個(gè)S)為1×10—13s。蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)大約在1×10—13~200×10—13s范圍內(nèi),即1S~200S。
三、蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定 蛋白質(zhì)分子量測(cè)定的方法很多,目前常用的方法有以下幾種。 3.1 凝膠過(guò)濾法 凝膠過(guò)濾法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的原理如“分離純化方法”中所 述。一定型號(hào)的凝膠顆粒上具有一定大小的孔隙,只允許較小的分子進(jìn)入膠粒,而大于孔隙的分子則不能進(jìn)入膠粒而被排阻在膠粒外面。用洗脫液洗脫時(shí),被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)先被洗脫下來(lái),隨后能夠進(jìn)入顆粒的蛋白質(zhì)也按分子量大小而先后被洗脫下來(lái),分子量越小的越后被洗脫下來(lái)。由于不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質(zhì)分子量范圍,在此范圍內(nèi),分子量的對(duì)數(shù)和洗脫體積之間成線(xiàn)性關(guān)系。因此,用幾種已知分子量的蛋白質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行層析分析,以每種蛋白質(zhì)的洗脫體積對(duì)它們的分子量的對(duì)數(shù)作圖,繪制出標(biāo)準(zhǔn)洗脫曲線(xiàn)。未知蛋白質(zhì)在同樣的條件下進(jìn)行層析分析,根據(jù)其所用的洗脫體積,從標(biāo)準(zhǔn)洗脫曲線(xiàn)上可求出此未知蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的分子量來(lái)。
蛋白質(zhì)分離純化步驟 蛋白質(zhì)分離純化的一般原則: 大多數(shù)蛋白質(zhì)在組織細(xì)胞中都是和核酸等生物分子結(jié)合在一起,而且每種類(lèi)型的細(xì)胞都含有成千上萬(wàn)種不同的蛋白質(zhì)。許多蛋白質(zhì)在結(jié)構(gòu)、性質(zhì)上有許多相似之處,所以蛋白質(zhì)的分離提純是一項(xiàng)復(fù)雜的工作。到目前為止,還沒(méi)有一**成的方法能把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合物中提取出來(lái)。但是對(duì)于任何一種蛋白質(zhì)都有可能選擇一種較合適的分離純化程序以獲得高純度的制品。且分離的關(guān)鍵步驟、基本手段還是共同的。 蛋白質(zhì)提純的目的是增加產(chǎn)品的純度和產(chǎn)量,同時(shí)又要保持和提高產(chǎn)品的生物活性。因此,要分離純化某一種蛋白質(zhì),首先應(yīng)選擇一種含目的蛋白質(zhì)較豐富的材料。其次,應(yīng)設(shè)法避免蛋白質(zhì)變性,以制備有活性的蛋白質(zhì)。對(duì)于大多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō),純化操作都是在0~4℃的低溫下進(jìn)行的。同時(shí)也應(yīng)避免過(guò)酸、過(guò)堿的條件以及劇烈的攪拌和振蕩。另外,還要設(shè)法除去變性的蛋白質(zhì)和其它雜蛋白,從而達(dá)到增加純度和提高產(chǎn)量的目的。樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng)
樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng)
隨著儀器儀表和計(jì)算機(jī)的完美結(jié)合,為了更好的滿(mǎn)足人們對(duì)精神世界的需求,體驗(yàn)多維世界給人們帶來(lái)的**,儀器儀表的虛擬化開(kāi)始發(fā)展。身臨其境接受客觀實(shí)物,給美又增添了一絲創(chuàng)意。我國(guó)現(xiàn)有其他內(nèi)資企業(yè)企業(yè)數(shù)千多家,已經(jīng)形成門(mén)類(lèi)品種比較齊全,具有一定技術(shù)基礎(chǔ)和生產(chǎn)規(guī)模的產(chǎn)業(yè)體系。但同時(shí)業(yè)內(nèi)行家也指出,雖然我國(guó)測(cè)試儀器產(chǎn)業(yè)有了一定的發(fā)展,但遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足國(guó)民經(jīng)濟(jì)各行各業(yè)日益增長(zhǎng)的迫切需求。蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵產(chǎn)業(yè)是國(guó)民經(jīng)濟(jì)的基礎(chǔ)性、戰(zhàn)略性產(chǎn)業(yè),是信息化和工業(yè)化深度融合的源頭,對(duì)促進(jìn)工業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí)、發(fā)展戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)、推動(dòng)現(xiàn)代**建設(shè)、保證和提高大家生活水平具有重要作用。隨著中國(guó)的不斷進(jìn)步,世界上只有一個(gè)救世主——市場(chǎng),能救企業(yè)的只有你自己——自強(qiáng),提高生產(chǎn)型重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力才是中國(guó)制造業(yè)的獨(dú)一出路。以顯微科學(xué)儀器行業(yè)的發(fā)展與變化為例,以親身的實(shí)踐為例,毛磊認(rèn)為,隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展,我國(guó)的環(huán)境和實(shí)力都發(fā)生了巨大變化,有了完全不同的基礎(chǔ),這為國(guó)產(chǎn)科學(xué)儀器走向**增強(qiáng)了信心。樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng)
蘇州英賽斯智能科技有限公司主要經(jīng)營(yíng)范圍是儀器儀表,擁有一支專(zhuān)業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和良好的市場(chǎng)口碑。公司業(yè)務(wù)分為蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵等,目前不斷進(jìn)行創(chuàng)新和服務(wù)改進(jìn),為客戶(hù)提供良好的產(chǎn)品和服務(wù)。公司秉持誠(chéng)信為本的經(jīng)營(yíng)理念,在儀器儀表深耕多年,以技術(shù)為先導(dǎo),以自主產(chǎn)品為重點(diǎn),發(fā)揮人才優(yōu)勢(shì),打造儀器儀表良好品牌。在社會(huì)各界的鼎力支持下,持續(xù)創(chuàng)新,不斷鑄造***服務(wù)體驗(yàn),為客戶(hù)成功提供堅(jiān)實(shí)有力的支持。
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