蛋白質分離純化步驟（二） 2.4 樣品的進一步分離純化 用等電點沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析（gel-filtration chromatography）又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠（Sephadex）裝入一個柱子中，制成凝膠柱，四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)***的選擇。這種凝膠顆粒具有網狀結構，不同類型凝膠的網孔大小不同。當把蛋白質混合樣品加到凝膠柱中時，四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)***的選擇，比凝膠網孔小的蛋白質可進入網孔內，而大于網孔的分子則不能進入被排阻在凝膠顆粒之外。當用洗脫液洗脫時，被排阻的分子量大的蛋白質直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來，四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)***的選擇，而比網孔小的蛋白質可連續(xù)不斷地進入網孔內。這樣的小分子不但流經的路程長，而且受到來自凝膠內部的阻力也很大，所以蛋白質越小，從柱子上洗脫下來所需時間越長。由于不同蛋白質的分子大小不同，進入網孔的程度不同，因此流出的速度不同，洗脫所用體積及時間不同，從而達到分離的目的。四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

三、蛋白質分子量的測定 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定分子量 蛋白質在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質分子大小、所帶電荷的量以及分子形狀。而SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳與此不同的是在樣品及電泳緩沖液中加入了十二烷基***鈉（sodium dodecylsulfate,SDS）。SDS是一種陰離子去污劑，可使蛋白質變性并解離成亞基。當?shù)鞍踪|樣品中加入SDS（一般加入量為0.1％）后，SDS與蛋白質分子結合，使蛋白質分子帶上大量的負電荷，這些電荷量遠遠超過蛋白質分子原來所帶的電荷量，因而掩蓋了不同蛋白質之間的電荷差異。所有結合SDS的蛋白質-SDS復合物的形狀近似于長的橢園棒，它們的短軸是恒定的，而長軸與蛋白質分子量的大小成正比。這樣，消除了蛋白質之間原有的電荷和形狀的差異，電泳的速度只取決于蛋白質分子量的大小。 進行凝膠電泳時，常常用一種染料作前沿物質，蛋白質分子在電泳中的移動距離和前沿物質移動的距離之比值稱為相對遷移率，相對遷移率和分子質量的對數(shù)成直線關系。以標準蛋白質分子質量的對數(shù)和其相對遷移率作圖，得到標準曲線。將未知蛋白質在同樣條件下電泳，根據(jù)測得的樣品相對遷移率，從標準曲線上便可查出其分子量。四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

三、蛋白質分子量的測定 蛋白質分子量測定的方法很多，目前常用的方法有以下幾種。 3.1 凝膠過濾法 凝膠過濾法測定蛋白質分子量的原理如“分離純化方法”中所 述。一定型號的凝膠顆粒上具有一定大小的孔隙，只允許較小的分子進入膠粒，而大于孔隙的分子則不能進入膠粒而被排阻在膠粒外面。用洗脫液洗脫時，被排阻的分子量大的蛋白質先被洗脫下來，隨后能夠進入顆粒的蛋白質也按分子量大小而先后被洗脫下來，分子量越小的越后被洗脫下來。由于不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質分子量范圍，在此范圍內，分子量的對數(shù)和洗脫體積之間成線性關系。因此，用幾種已知分子量的蛋白質為標準進行層析分析，以每種蛋白質的洗脫體積對它們的分子量的對數(shù)作圖，繪制出標準洗脫曲線。未知蛋白質在同樣的條件下進行層析分析，根據(jù)其所用的洗脫體積，從標準洗脫曲線上可求出此未知蛋白質對應的分子量來。

三、蛋白質分子量的測定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質溶液在受到強大的離心力作用時，蛋白質分子趨于下沉，沉降速度與蛋白質分子的大小、密度和分子形狀有關，也與溶劑的密度和粘度有關。蛋白質顆粒在離心場中的沉降速度用每單位時間內顆粒下沉的距離來表示。 在離心場中，蛋白質分子所受到的凈離心力（離心力減去浮力）與溶劑的摩擦力平衡時，每單位離心場強度的沉降速度稱為沉降系數(shù)（Sedimentation Coefficient）。國際上采用Svedberg單位作為沉降系數(shù)的單位，用S表示，以紀念超速離心法的創(chuàng)始人，瑞典***的蛋白質化學家T.Svedberg。一個Svedberg單位（或直接稱一個S）為1×10—13s。蛋白質的沉降系數(shù)大約在1×10—13～200×10—13s范圍內，即1S～200S。

蛋白質分離純化步驟（二） 2.4.2 纖維素柱層析法 該法是利用蛋白質的酸堿性質作為分離的基礎。離子交換纖維素（cellulose ion-exchanger）是人工合成的纖維素衍生物，它具有松散的親水性網狀結構，有較大的表面積，使蛋白質大分子可以自由通過。因此常用于蛋白質的分離。 （1）羧甲基纖維素（CM-纖維素） 在纖維素顆粒上帶有羧甲基基團。在中性pH條件下，羧甲基上的質子可解離下來（圖2-27a），而溶液中帶正電荷的蛋白質分子可與纖維素顆粒上的羧甲基負電荷結合?？山粨Q的基團帶正電，因此是一種陽離子交換劑。蛋白質與離子交換纖維素之間結合能力的大小取決于彼此間相反電荷基團之間靜電吸引。 (2）二乙氨基乙基纖維素（DEAE-纖維素） 在中性pH條件下，它含有帶正電荷的基團，可與溶液中的帶負電荷的蛋白質結合，可交換的基團帶負電荷，因此是一種陰離子交換劑。當某一蛋白質混合溶液通過裝有DEAE-纖維素的層析柱時，帶正電荷的蛋白質不能結合而隨著洗脫液的流動先被洗脫下來。帶負電荷的蛋白質將被結合到柱上。結合力取決于彼此相反電荷基團間的靜電吸引。然后選用一定pH和離子強度的緩沖液進行洗脫，改變蛋白質分子所帶的靜電荷，依次從層析柱流出達到相互分離的目的。四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

儀器儀表是用以檢出、測量、觀察、計算各種物理量、物質成分、物性參數(shù)等的器具或設備。真空檢漏儀、壓力表、測長儀、顯微鏡、乘法器等均屬于儀器儀表。近年來，得益于機械、冶金、石化行業(yè)等儀器儀表服務領域經營狀況的好轉，我國儀器儀表制造業(yè)發(fā)展一路向好。目前，蛋白純化色譜系統(tǒng)，凝膠凈化色譜系統(tǒng)，制備液相色譜，柱塞泵等產品的產量居世界前列，實驗分析儀器等中產品的市場占比不斷上升，行業(yè)技術上總體已達到的中等國際水平，少數(shù)產品接近或達到當前較高國際水平。機器人與自動化設備、機械電子設備的研發(fā)、生產、銷售及技術咨詢；光學檢測設備、光電產品研發(fā)、制造、銷售；實驗室設備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷售及提供相關的技術咨詢和售后服務；自營和代理各類商品及技術的進出口業(yè)務（限定企業(yè)經營或禁止進出口的商品和技術除外）。（依法需經批準的項目，經相關部門批準后方可開展經營活動）產品普遍運用于工業(yè)、農業(yè)、交通、科技、環(huán)保、**、文教衛(wèi)生、大家生活等各個領域，在旺盛市場需求的帶動下和我國宏觀調控政策的引導下，我國儀器儀表行業(yè)的發(fā)展有了長足的進步空間?！盎ヂ?lián)網＋”、大數(shù)據(jù)、020、萬物互聯(lián)網、P2P、分享經濟等熱門詞匯的出現(xiàn)，各個行業(yè)制定相應的措施來順應時代的經濟發(fā)展，以爭取更大的發(fā)展市場。而互聯(lián)網的出現(xiàn)也為儀器儀表行業(yè)參與國際競爭提供了機會，有利于加工企業(yè)實現(xiàn)技術創(chuàng)新升級。四川化學分析蛋白純化系統(tǒng)***的選擇

蘇州英賽斯智能科技有限公司是一家機器人與自動化設備、機械電子設備的研發(fā)、生產、銷售及技術咨詢；光學檢測設備、光電產品研發(fā)、制造、銷售；實驗室設備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷售及提供相關的技術咨詢和售后服務；自營和代理各類商品及技術的進出口業(yè)務（限定企業(yè)經營或禁止進出口的商品和技術除外）。（依法需經批準的項目，經相關部門批準后方可開展經營活動）的公司，是一家集研發(fā)、設計、生產和銷售為一體的專業(yè)化公司。英賽斯擁有一支經驗豐富、技術創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團隊，以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供蛋白純化色譜系統(tǒng)，凝膠凈化色譜系統(tǒng)，制備液相色譜，柱塞泵。英賽斯不斷開拓創(chuàng)新，追求出色，以技術為先導，以產品為平臺，以應用為重點，以服務為保證，不斷為客戶創(chuàng)造更高價值，提供更優(yōu)服務。英賽斯創(chuàng)始人李大為，始終關注客戶，創(chuàng)新科技，竭誠為客戶提供良好的服務。

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