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實驗室及中試放大規(guī)模蛋白純化系統(tǒng) Unique Autopure系列蛋白純化系統(tǒng) 主要應用領域 : – 蛋白純化系統(tǒng)主要應用于單抗、重組蛋白、疫苗、生化 藥,化學分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報價、,化學分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報價、天然產物和多糖等生物制藥領域。用于生物制品的下游工藝的分離純化。 Unique AutoPure 系列蛋白純化系統(tǒng) : 產品特點及優(yōu)勢: – 模塊化設計,提供多個配置,滿足特殊工藝流程需求 - 低脈動高精度雙柱塞輸液泵 ,保證優(yōu)異的分離重現(xiàn)性 ; – 全系統(tǒng)與液體接觸的地方均由生物兼容性材料組成、符合FDA、USP VI等相關法規(guī)要求 ; – DAD全譜直讀檢測器,避免了傳統(tǒng)的機械切換式檢測器所帶來的不穩(wěn)定性及高故障率 ; – 固定波長檢測器燈為長壽命LED燈,壽命大于8000小時,降低維護成本 ; – **技術紫外檢測器流通池,低死體積、低峰拓展,提高了色譜分離度 ; – 高靈敏度在線pH、電導率,化學分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報價、紫外檢測器,低死體積、低峰拓展,提高了色譜分離度 ; – 集中了buffer選擇閥,自動進樣閥、柱位閥等自動化組件,提高了純化的自動化程度 ; – 具有柱前、柱后、壓差報警,氣泡傳感器檢測等功能,極大的保護了系統(tǒng)及層析柱的安全性 ; – 層析工作站軟件是一款功能強大、性能先進、高穩(wěn)定性的色譜數據管理系化學分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報價
三、蛋白質分子量的測定 蛋白質分子量測定的方法很多,目前常用的方法有以下幾種。 3.1 凝膠過濾法 凝膠過濾法測定蛋白質分子量的原理如“分離純化方法”中所 述。一定型號的凝膠顆粒上具有一定大小的孔隙,只允許較小的分子進入膠粒,而大于孔隙的分子則不能進入膠粒而被排阻在膠粒外面。用洗脫液洗脫時,被排阻的分子量大的蛋白質先被洗脫下來,隨后能夠進入顆粒的蛋白質也按分子量大小而先后被洗脫下來,分子量越小的越后被洗脫下來。由于不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質分子量范圍,在此范圍內,分子量的對數和洗脫體積之間成線性關系。因此,用幾種已知分子量的蛋白質為標準進行層析分析,以每種蛋白質的洗脫體積對它們的分子量的對數作圖,繪制出標準洗脫曲線。未知蛋白質在同樣的條件下進行層析分析,根據其所用的洗脫體積,從標準洗脫曲線上可求出此未知蛋白質對應的分子量來。蛋白純化系統(tǒng)上門安裝
三、蛋白質分子量的測定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質溶液在受到強大的離心力作用時,蛋白質分子趨于下沉,沉降速度與蛋白質分子的大小、密度和分子形狀有關,也與溶劑的密度和粘度有關。蛋白質顆粒在離心場中的沉降速度用每單位時間內顆粒下沉的距離來表示。 在離心場中,蛋白質分子所受到的凈離心力(離心力減去浮力)與溶劑的摩擦力平衡時,每單位離心場強度的沉降速度稱為沉降系數(Sedimentation Coefficient)。國際上采用Svedberg單位作為沉降系數的單位,用S表示,以紀念超速離心法的創(chuàng)始人,瑞典***的蛋白質化學家T.Svedberg。一個Svedberg單位(或直接稱一個S)為1×10—13s。蛋白質的沉降系數大約在1×10—13~200×10—13s范圍內,即1S~200S。
蛋白質分離純化步驟(二) 2.4 樣品的進一步分離純化 用等電點沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質,須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有:凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析(gel-filtration chromatography)又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠(Sephadex)裝入一個柱子中,制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網狀結構,不同類型凝膠的網孔大小不同。當把蛋白質混合樣品加到凝膠柱中時,比凝膠網孔小的蛋白質可進入網孔內,而大于網孔的分子則不能進入被排阻在凝膠顆粒之外。當用洗脫液洗脫時,被排阻的分子量大的蛋白質直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來,而比網孔小的蛋白質可連續(xù)不斷地進入網孔內。這樣的小分子不但流經的路程長,而且受到來自凝膠內部的阻力也很大,所以蛋白質越小,從柱子上洗脫下來所需時間越長。由于不同蛋白質的分子大小不同,進入網孔的程度不同,因此流出的速度不同,洗脫所用體積及時間不同,從而達到分離的目的。
蛋白質分離純化步驟(二) 分離純化蛋白質的一般程序 2.1 材料的預處理及細胞破碎 分離提純某一種蛋白質時,首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態(tài),不喪失活性。所以要采用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有: 1. 機械破碎法 這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎。常用設備有,高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。 2. 滲透破碎法 這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。 3. 反復凍融法 生物組織經凍結后,細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便,但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜采用此法。 4. 超聲波法 使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破壞微生物細胞等。山東直銷蛋白純化系統(tǒng)上門安裝
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蛋白質分離純化步驟 蛋白質分離純化的一般原則: 大多數蛋白質在組織細胞中都是和核酸等生物分子結合在一起,而且每種類型的細胞都含有成千上萬種不同的蛋白質。許多蛋白質在結構、性質上有許多相似之處,所以蛋白質的分離提純是一項復雜的工作。到目前為止,還沒有一**成的方法能把任何一種蛋白質從復雜的混合物中提取出來。但是對于任何一種蛋白質都有可能選擇一種較合適的分離純化程序以獲得高純度的制品。且分離的關鍵步驟、基本手段還是共同的。 蛋白質提純的目的是增加產品的純度和產量,同時又要保持和提高產品的生物活性。因此,要分離純化某一種蛋白質,首先應選擇一種含目的蛋白質較豐富的材料。其次,應設法避免蛋白質變性,以制備有活性的蛋白質。對于大多數蛋白質來說,純化操作都是在0~4℃的低溫下進行的。同時也應避免過酸、過堿的條件以及劇烈的攪拌和振蕩。另外,還要設法除去變性的蛋白質和其它雜蛋白,從而達到增加純度和提高產量的目的。化學分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報價
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