熒光定量PCR(Flurogenic Quantitative Polymerase ChainReaction，F(xiàn)Q-PCR；real-time quantitative PCR, RT-qPCR or qPCR)， 是1996 年由美國(guó)Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù)，上海lncRNA熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù)，它是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，標(biāo)記**PCR產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)，上海lncRNA熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù)，利用與之相適應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，上海lncRNA熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù)，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度 [1]  。

熒光域值(threshold)的設(shè)定：PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào)，熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍

每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)**起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)，縱坐標(biāo)**Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。同時(shí)，對(duì)于熒光PCR實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，CT值也是判讀樣品陰陽(yáng)性的重要指標(biāo)。

大量的熒光定量PCR研究資料表明，病原體數(shù)量與***性疾病病情的輕重程度、傳染性及***效果均有相關(guān)性。因此，通過(guò)熒光定量PCR方法得到的檢測(cè)結(jié)果，一定程度上可以準(zhǔn)確反映疾病***的情況。

熒光定量PCR 技術(shù)，是通過(guò)在PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)驗(yàn)采用兩種定量方式，即***定量和相對(duì)定量。熒光定量PCR 可用于mRNA 表達(dá)量水平檢測(cè)、MicroRNA 表達(dá)量水平檢測(cè)和基因拷貝數(shù)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)的方法可分為SYBR Green I 法和TaqMan 探針?lè)ā?

客戶提供提供樣本

細(xì)胞：細(xì)胞數(shù)>10^6；

組織：總量>100 mg；

DNA 或RNA 樣品：總量>2 μg。

可選樣本引物：可由客戶提供，沒(méi)有引物的情況下，可由生工生物設(shè)計(jì)合成

提供信息

靶基因信息：包括基因序列或GenBank Accession Number 等；背景資料：包括生物物種信息（Human、Mouse、Rat 等）、DNA/RNA 來(lái)源、基因豐度等。**終交付交付報(bào)告

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：包括實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器、照片及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。

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