TaqMan探針法：TaqMan 探針法是具有高度特異性的定量 PCR 技術(shù)。它的工作原理是在 PCR 反應(yīng)體系中存在一對 PCR 引物和一條探針，探針的5′ 端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)，3′ 端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)，探針只與模板特異結(jié)合，其結(jié)合位點(diǎn)在兩條引物之間。當(dāng)探針完整的時(shí)候，報(bào)告基團(tuán)的熒光能量被淬滅基團(tuán)吸收，所以儀器搜集不到信號，上海siRNA熒光定量PCR課題承包，隨著反應(yīng)的進(jìn)展，Taq酶遇到探針，上海siRNA熒光定量PCR課題承包，利用 3′→5′ 外切核酸酶的活性把探針切斷，上海siRNA熒光定量PCR課題承包，導(dǎo)致報(bào)告基團(tuán)的熒光能量不能被淬滅基團(tuán)吸收，產(chǎn)生了熒光信號，因此信號的強(qiáng)度就**了模板 DNA 的拷貝數(shù)

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RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。

  RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

  溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用***反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定

  先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/217496.html