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三、蛋白質(zhì)分子量的測定 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定分子量 蛋白質(zhì)在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質(zhì)分子大小、所帶電荷的量以及分子形狀。而SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳與此不同的是在樣品及電泳緩沖液中加入了十二烷基***鈉(sodium dodecylsulfate,四川樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇,SDS)。SDS是一種陰離子去污劑,可使蛋白質(zhì)變性并解離成亞基。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)樣品中加入SDS(一般加入量為0.1%)后,SDS與蛋白質(zhì)分子結(jié)合,使蛋白質(zhì)分子帶上大量的負(fù)電荷,這些電荷量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過蛋白質(zhì)分子原來所帶的電荷量,因而掩蓋了不同蛋白質(zhì)之間的電荷差異。所有結(jié)合SDS的蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物的形狀近似于長的橢園棒,它們的短軸是恒定的,而長軸與蛋白質(zhì)分子量的大小成正比。這樣,四川樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇,消除了蛋白質(zhì)之間原有的電荷和形狀的差異,電泳的速度只取決于蛋白質(zhì)分子量的大小。 進(jìn)行凝膠電泳時(shí),四川樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇,常常用一種染料作前沿物質(zhì),蛋白質(zhì)分子在電泳中的移動(dòng)距離和前沿物質(zhì)移動(dòng)的距離之比值稱為相對(duì)遷移率,相對(duì)遷移率和分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)成直線關(guān)系。以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)和其相對(duì)遷移率作圖,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。將未知蛋白質(zhì)在同樣條件下電泳,根據(jù)測得的樣品相對(duì)遷移率,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上便可查出其分子量。四川樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 分離純化蛋白質(zhì)的一般程序 2.1 材料的預(yù)處理及細(xì)胞破碎 分離提純某一種蛋白質(zhì)時(shí),首先要把蛋白質(zhì)從組織或細(xì)胞中釋放出來并保持原來的天然狀態(tài),不喪失活性。所以要采用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒔M織和細(xì)胞破碎。常用的破碎組織細(xì)胞的方法有: 1. 機(jī)械破碎法 這種方法是利用機(jī)械力的剪切作用,使細(xì)胞破碎。常用設(shè)備有,高速組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽等。 2. 滲透破碎法 這種方法是在低滲條件使細(xì)胞溶脹而破碎。 3. 反復(fù)凍融法 生物組織經(jīng)凍結(jié)后,細(xì)胞內(nèi)液結(jié)冰膨脹而使細(xì)胞脹破。這種方法簡單方便,但要注意那些對(duì)溫度變化敏感的蛋白質(zhì)不宜采用此法。 4. 超聲波法 使用超聲波震蕩器使細(xì)胞膜上所受張力不均而使細(xì)胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破壞微生物細(xì)胞等。四川樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.4 樣品的進(jìn)一步分離純化 用等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì),須進(jìn)一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有:凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時(shí)還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析(gel-filtration chromatography)又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠(Sephadex)裝入一個(gè)柱子中,制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),不同類型凝膠的網(wǎng)孔大小不同。當(dāng)把蛋白質(zhì)混合樣品加到凝膠柱中時(shí),比凝膠網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可進(jìn)入網(wǎng)孔內(nèi),而大于網(wǎng)孔的分子則不能進(jìn)入被排阻在凝膠顆粒之外。當(dāng)用洗脫液洗脫時(shí),被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來,而比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可連續(xù)不斷地進(jìn)入網(wǎng)孔內(nèi)。這樣的小分子不但流經(jīng)的路程長,而且受到來自凝膠內(nèi)部的阻力也很大,所以蛋白質(zhì)越小,從柱子上洗脫下來所需時(shí)間越長。由于不同蛋白質(zhì)的分子大小不同,進(jìn)入網(wǎng)孔的程度不同,因此流出的速度不同,洗脫所用體積及時(shí)間不同,從而達(dá)到分離的目的。
蛋白質(zhì)分離純化步驟 蛋白質(zhì)分離純化的一般原則: 大多數(shù)蛋白質(zhì)在組織細(xì)胞中都是和核酸等生物分子結(jié)合在一起,而且每種類型的細(xì)胞都含有成千上萬種不同的蛋白質(zhì)。許多蛋白質(zhì)在結(jié)構(gòu)、性質(zhì)上有許多相似之處,所以蛋白質(zhì)的分離提純是一項(xiàng)復(fù)雜的工作。到目前為止,還沒有一**成的方法能把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合物中提取出來。但是對(duì)于任何一種蛋白質(zhì)都有可能選擇一種較合適的分離純化程序以獲得高純度的制品。且分離的關(guān)鍵步驟、基本手段還是共同的。 蛋白質(zhì)提純的目的是增加產(chǎn)品的純度和產(chǎn)量,同時(shí)又要保持和提高產(chǎn)品的生物活性。因此,要分離純化某一種蛋白質(zhì),首先應(yīng)選擇一種含目的蛋白質(zhì)較豐富的材料。其次,應(yīng)設(shè)法避免蛋白質(zhì)變性,以制備有活性的蛋白質(zhì)。對(duì)于大多數(shù)蛋白質(zhì)來說,純化操作都是在0~4℃的低溫下進(jìn)行的。同時(shí)也應(yīng)避免過酸、過堿的條件以及劇烈的攪拌和振蕩。另外,還要設(shè)法除去變性的蛋白質(zhì)和其它雜蛋白,從而達(dá)到增加純度和提高產(chǎn)量的目的。
實(shí)驗(yàn)室及中試放大規(guī)模蛋白純化系統(tǒng) Unique Autopure系列蛋白純化系統(tǒng) 主要應(yīng)用領(lǐng)域 : – 蛋白純化系統(tǒng)主要應(yīng)用于單抗、重組蛋白、疫苗、生化 藥、、天然產(chǎn)物和多糖等生物制藥領(lǐng)域。用于生物制品的下游工藝的分離純化。 Unique AutoPure 系列蛋白純化系統(tǒng) : 產(chǎn)品特點(diǎn)及優(yōu)勢: – 模塊化設(shè)計(jì),提供多個(gè)配置,滿足特殊工藝流程需求 - 低脈動(dòng)高精度雙柱塞輸液泵 ,保證優(yōu)異的分離重現(xiàn)性 ; – 全系統(tǒng)與液體接觸的地方均由生物兼容性材料組成、符合FDA、USP VI等相關(guān)法規(guī)要求 ; – DAD全譜直讀檢測器,避免了傳統(tǒng)的機(jī)械切換式檢測器所帶來的不穩(wěn)定性及高故障率 ; – 固定波長檢測器燈為長壽命LED燈,壽命大于8000小時(shí),降低維護(hù)成本 ; – **技術(shù)紫外檢測器流通池,低死體積、低峰拓展,提高了色譜分離度 ; – 高靈敏度在線pH、電導(dǎo)率、紫外檢測器,低死體積、低峰拓展,提高了色譜分離度 ; – 集中了buffer選擇閥,自動(dòng)進(jìn)樣閥、柱位閥等自動(dòng)化組件,提高了純化的自動(dòng)化程度 ; – 具有柱前、柱后、壓差報(bào)警,氣泡傳感器檢測等功能,極大的保護(hù)了系統(tǒng)及層析柱的安全性 ; – 層析工作站軟件是一款功能強(qiáng)大、性能先進(jìn)、高穩(wěn)定性的色譜數(shù)據(jù)管理系浙江蛋白純化系統(tǒng)
四川樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇
儀器儀表行業(yè)本身是一個(gè)加入,產(chǎn)出周期較長的行業(yè),所以作為業(yè)內(nèi)廠家,一方面要尋找中、短期市場熱點(diǎn),另一方面也要在產(chǎn)品、技術(shù)研發(fā)方面有長遠(yuǎn)的規(guī)劃;隨著互聯(lián)網(wǎng)的逐步發(fā)展,為蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵等產(chǎn)品的傳播提供了一個(gè)飛速的平臺(tái)。讓儀器儀表行業(yè)從傳統(tǒng)的銷售模式到以互聯(lián)網(wǎng)電子商務(wù)為主的營銷方式的轉(zhuǎn)變,促進(jìn)了儀器儀表行業(yè)與互聯(lián)網(wǎng)的結(jié)合,推動(dòng)產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新發(fā)展。目前我國機(jī)器人與自動(dòng)化設(shè)備、機(jī)械電子設(shè)備的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及技術(shù)咨詢;光學(xué)檢測設(shè)備、光電產(chǎn)品研發(fā)、制造、銷售;實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷售及提供相關(guān)的技術(shù)咨詢和售后服務(wù);自營和代理各類商品及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)(限定企業(yè)經(jīng)營或禁止進(jìn)出口的商品和技術(shù)除外)。(依法需經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動(dòng))產(chǎn)品,主要集中在中低檔市場,而市場則主要被國外品牌所占據(jù)。在某些領(lǐng)域,國產(chǎn)產(chǎn)品甚至是空白,這就需要未來我國儀器儀表向市場進(jìn)軍,擴(kuò)大產(chǎn)品占比。從加工廣義角度來說,儀器儀表也可具有自動(dòng)操控、報(bào)警、信號(hào)傳遞和數(shù)據(jù)處理等功能,例如用于工業(yè)生產(chǎn)過程自動(dòng)操控中的氣動(dòng)調(diào)節(jié)儀表,和電動(dòng)調(diào)節(jié)儀表,以及集散型儀表操控系統(tǒng)也皆屬于儀器儀表。四川樣品前處理蛋白純化系統(tǒng)***的選擇
蘇州英賽斯智能科技有限公司致力于儀器儀表,以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)***管理的追求。英賽斯深耕行業(yè)多年,始終以客戶的需求為向?qū)?,為客戶提?**的蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵。英賽斯始終以本分踏實(shí)的精神和必勝的信念,影響并帶動(dòng)團(tuán)隊(duì)取得成功。英賽斯始終關(guān)注自身,在風(fēng)云變化的時(shí)代,對(duì)自身的建設(shè)毫不懈怠,高度的專注與執(zhí)著使英賽斯在行業(yè)的從容而自信。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/2195721.html
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