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實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性高和精確性高的優(yōu)點(diǎn),此項(xiàng)技術(shù)已被應(yīng)用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品檢測(cè)和環(huán)境監(jiān)測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域 。在分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究應(yīng)用 定量核酸濃度:傳統(tǒng)方法是用瓊脂糖凝膠電泳或者分光光度計(jì)測(cè)定核酸濃度,其結(jié)果不準(zhǔn)確而且易污染,實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以解決這些問(wèn)題,它的準(zhǔn)確性、靈敏度高且無(wú)污染,對(duì)一些傳染性疾病進(jìn)行定量分析、病原微生物和***含量檢測(cè),江蘇轉(zhuǎn)基因熒光定量PCR課題承包,此項(xiàng)技術(shù)都是優(yōu)先
研究基因表達(dá):應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)可以對(duì)基因時(shí)間、空間表達(dá)水平差異進(jìn)行比較。例如,江蘇轉(zhuǎn)基因熒光定量PCR課題承包,江蘇轉(zhuǎn)基因熒光定量PCR課題承包,對(duì)特定基因用物理、化學(xué)、***等不同方法處理后的差異進(jìn)行比較,為人們的科學(xué)研究提供依據(jù)
PCR檢測(cè)方法在臨床醫(yī)學(xué)及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中**有價(jià)值的應(yīng)用領(lǐng)域就是對(duì)***性疾病的診斷。理論上,只要樣本有一個(gè)病原體存在,PCR方法就可以檢測(cè)到。該方法對(duì)病原體的檢測(cè)解決了免疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期”問(wèn)題,常用于疾病的早期診斷,可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)。
大量的熒光定量PCR研究資料表明,病原體數(shù)量與***性疾病病情的輕重程度、傳染性及***效果均有相關(guān)性。因此,通過(guò)熒光定量PCR方法得到的檢測(cè)結(jié)果,一定程度上可以準(zhǔn)確反映疾病***的情況。
PCR 反應(yīng)的效率也會(huì)影響 Ct 值。在低效率條件下進(jìn)行連續(xù)稀釋擴(kuò)增,與高效率條件下相比,可能會(huì)產(chǎn)生斜率不同的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。在圖 5 中,兩個(gè)樣品(X 和 Y)分別在低效率和高效率條件下擴(kuò)增,在靶濃度相同的條件下得到了不同的 Ct 值。在此示例中,盡管高效率條件(圖 5 中的藍(lán)色曲線(xiàn))在高濃度時(shí)產(chǎn)生的 Ct 值更晚,但它在靶濃度低時(shí)卻更為靈敏。PCR 效率取決于實(shí)驗(yàn)、預(yù)混液性能和樣品質(zhì)量。通常情況下,反應(yīng)效率在 90-110% 之間都是可以接受的。另一方面,假定所有其他因素如儀器、試劑和實(shí)驗(yàn)完全相同, 該效率也有助于得出***個(gè)樣品的模板量更少的結(jié)論。然而,如果產(chǎn)生兩個(gè) Ct值使用的是不同的儀器、試劑、引物和探針或反應(yīng)體積,該結(jié)論就不成立。因此,只有在使用上文定義的相同反應(yīng)條件來(lái)比較實(shí)驗(yàn)時(shí),Ct ***值的比較才有意義。
文章來(lái)源地址: http://www.cdcfah.com/cp/220708.html
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