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免疫組化細(xì)胞凋亡檢測(cè)細(xì)胞凋亡原理:正常凋亡細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)凋亡細(xì)胞DNA片段進(jìn)行染色,正常的、人為造成凋亡的細(xì)胞很少能夠被染色。以甲基綠復(fù)染,便于從形態(tài)學(xué)上分辨評(píng)估正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。首先確定目標(biāo)凋亡細(xì)胞的組織部位(如眼球組織,由于玻璃體結(jié)構(gòu)內(nèi)沒(méi)有細(xì)胞核,因此看不到凋亡,在整個(gè)組織的**外面有單層視網(wǎng)膜細(xì)胞,因此只能在**邊緣查看凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性產(chǎn)物)免疫組化關(guān)于掉片HE、Masson、番紅O、Nissl,北京四色免疫組化分析服務(wù)、Mallory等染色方法很少有掉片現(xiàn)象;免疫組化和細(xì)胞凋亡檢測(cè)我們采用專門(mén)購(gòu)買的防脫片,由于整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程比較長(zhǎng),在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生掉片是很正常的現(xiàn)象。對(duì)于容易掉片的組織,如:骨組織、腦組織、皮膚組織等掉片有時(shí)候是不可避免的。免疫組化經(jīng)驗(yàn)總結(jié)編輯做過(guò)病理實(shí)驗(yàn)的人都知道,實(shí)驗(yàn)看似容易,但真想把它做好,還是需要花上很長(zhǎng)一段時(shí)間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。我從事病理實(shí)驗(yàn)已有6年多了,在這段時(shí)間里,我做過(guò)許許多多病理相關(guān)實(shí)驗(yàn),剛開(kāi)始啥也不懂,一味按照網(wǎng)上操作流程來(lái)做,但做的結(jié)果往往并不是十分理想,**終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果,北京四色免疫組化分析服務(wù),北京四色免疫組化分析服務(wù)。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的瀏覽和學(xué)習(xí),從一些在論壇內(nèi)學(xué)習(xí)、請(qǐng)教,并結(jié)合實(shí)踐操作,我經(jīng)歷了初級(jí)——查找資料和摸索方法。
續(xù))·**過(guò)程中,動(dòng)作要輕柔,盡量避免溶血·血液凝固后,及時(shí)離心收集血清,否則細(xì)胞溶解釋放的雜蛋白(例如蛋白水解酶)將污染抗體并將抗體水解,降低效價(jià);·加疊氮化鈉,分裝,低溫保存,也可加一定的保護(hù)劑如BSA、甘油等。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)標(biāo)本的制備·標(biāo)本制備恰當(dāng),是免疫組化成功的首要條件·免疫組化對(duì)組織和細(xì)胞標(biāo)本的要求–保持所檢標(biāo)本原有的結(jié)構(gòu)、形態(tài);–在原位很大程度地保持待測(cè)抗原(或抗體)的免疫活性,既不淬滅、流失或彌散,也不被隱蔽。·免疫組化的組織和細(xì)胞標(biāo)本,制作流程與常規(guī)處理方法基本相同,但對(duì)組織、細(xì)胞的處理又有其特殊要求及注意事項(xiàng)。–各種抗原由于其含量及特性的差異對(duì)標(biāo)本處理方式常有不同要求,因此要選擇適用于本實(shí)驗(yàn)的比較好方法。免疫組化中常用的組織和細(xì)胞標(biāo)本·組織標(biāo)本–石蠟切片–冰凍切片·細(xì)胞標(biāo)本–組織印片–細(xì)胞培養(yǎng)片(細(xì)胞爬片)–細(xì)胞涂片免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)石蠟切片·石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用、**基本的方法–比較大優(yōu)點(diǎn)是組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對(duì)照觀察;–石蠟塊還能長(zhǎng)期存檔,供回顧研究?!な炃衅谱鬟^(guò)程對(duì)組織內(nèi)抗原顯現(xiàn)有一定的影響,但可通過(guò)某些措施予以改善。
實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類,前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用、**基本的方法,對(duì)于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對(duì)照觀察;還能長(zhǎng)期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過(guò)程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法??贵w免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體,單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后,從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清,是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
文章來(lái)源地址: http://www.cdcfah.com/cp/221613.html
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