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蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.4.2 纖維素柱層析法 該法是利用蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)作為分離的基礎(chǔ)。離子交換纖維素(cellulose ion-exchanger)是人工合成的纖維素衍生物,浙江蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià),它具有松散的親水性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),有較大的表面積,使蛋白質(zhì)大分子可以自由通過(guò)。因此常用于蛋白質(zhì)的分離,浙江蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)。 (1)羧甲基纖維素(CM-纖維素) 在纖維素顆粒上帶有羧甲基基團(tuán)。在中性pH條件下,羧甲基上的質(zhì)子可解離下來(lái)(圖2-27a),而溶液中帶正電荷的蛋白質(zhì)分子可與纖維素顆粒上的羧甲基負(fù)電荷結(jié)合??山粨Q的基團(tuán)帶正電,因此是一種陽(yáng)離子交換劑。蛋白質(zhì)與離子交換纖維素之間結(jié)合能力的大小取決于彼此間相反電荷基團(tuán)之間靜電吸引,浙江蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)。 (2)二乙氨基乙基纖維素(DEAE-纖維素) 在中性pH條件下,它含有帶正電荷的基團(tuán),可與溶液中的帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合,可交換的基團(tuán)帶負(fù)電荷,因此是一種陰離子交換劑。當(dāng)某一蛋白質(zhì)混合溶液通過(guò)裝有DEAE-纖維素的層析柱時(shí),帶正電荷的蛋白質(zhì)不能結(jié)合而隨著洗脫液的流動(dòng)先被洗脫下來(lái)。帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)將被結(jié)合到柱上。結(jié)合力取決于彼此相反電荷基團(tuán)間的靜電吸引。然后選用一定pH和離子強(qiáng)度的緩沖液進(jìn)行洗脫,改變蛋白質(zhì)分子所帶的靜電荷,依次從層析柱流出達(dá)到相互分離的目的。浙江蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)
蛋白質(zhì)分離純化步驟 蛋白質(zhì)分離純化的一般原則: 大多數(shù)蛋白質(zhì)在組織細(xì)胞中都是和核酸等生物分子結(jié)合在一起,而且每種類型的細(xì)胞都含有成千上萬(wàn)種不同的蛋白質(zhì)。許多蛋白質(zhì)在結(jié)構(gòu)、性質(zhì)上有許多相似之處,所以蛋白質(zhì)的分離提純是一項(xiàng)復(fù)雜的工作。到目前為止,還沒(méi)有一**成的方法能把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合物中提取出來(lái)。但是對(duì)于任何一種蛋白質(zhì)都有可能選擇一種較合適的分離純化程序以獲得高純度的制品。且分離的關(guān)鍵步驟、基本手段還是共同的。 蛋白質(zhì)提純的目的是增加產(chǎn)品的純度和產(chǎn)量,同時(shí)又要保持和提高產(chǎn)品的生物活性。因此,要分離純化某一種蛋白質(zhì),首先應(yīng)選擇一種含目的蛋白質(zhì)較豐富的材料。其次,應(yīng)設(shè)法避免蛋白質(zhì)變性,以制備有活性的蛋白質(zhì)。對(duì)于大多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō),純化操作都是在0~4℃的低溫下進(jìn)行的。同時(shí)也應(yīng)避免過(guò)酸、過(guò)堿的條件以及劇烈的攪拌和振蕩。另外,還要設(shè)法除去變性的蛋白質(zhì)和其它雜蛋白,從而達(dá)到增加純度和提高產(chǎn)量的目的。山東智能蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.4.3. 親和層析 親和層析(affinity-chromatography)分離技術(shù)是根據(jù)許多蛋白質(zhì)對(duì)特定的化學(xué)基團(tuán)具有專一性結(jié)合的原理。這些能被生物大分子如蛋白質(zhì)所識(shí)別并與之結(jié)合的基團(tuán)稱為配基或配體(ligand)。親和層析是一種極有效的分離純化蛋白質(zhì)的方法。例如酶對(duì)它的底物具有特殊的親和力;抗原和抗體互為配基。以伴刀豆球蛋白A(concanavalin A)的分離純化為例,由于該蛋白對(duì)葡萄糖有專一性親和吸附,因此可把葡萄糖通過(guò)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)反應(yīng)共價(jià)地連接到像瓊脂糖凝膠一類的載體表面上。為了防止載體表面的空間位阻影響待分離的蛋白質(zhì)大分子與其配基的結(jié)合,在配基和載體之間往往插入一段所謂的連接臂(或稱為間隔臂,spacerarm),使配體與載體之間保持足夠的距離。 將這種多糖顆粒裝入一定規(guī)格的玻璃管中就制成了一根親和層析柱。當(dāng)含有伴刀豆球蛋白的提取液加到層析柱的上部,并沿柱從上往下過(guò)時(shí),待純化的蛋白質(zhì)與其特異性配基結(jié)合而被吸附到柱上,其他蛋白因不能與葡萄糖配基結(jié)合將通過(guò)柱子而流出(圖2-28a)。然后采用一定的洗脫條件,如濃的葡萄糖溶液進(jìn)行洗脫,即可把該蛋白質(zhì)洗脫下來(lái),達(dá)到與其它蛋白質(zhì)分離的目的。
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.2 蛋白質(zhì)的抽提 通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來(lái)。抽提所用緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等),使膜結(jié)構(gòu)破壞,利于蛋白質(zhì)與膜分離。在抽提過(guò)程中,應(yīng)注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質(zhì)的變性。 2.3蛋白質(zhì)粗制品的獲得 選用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開(kāi)來(lái)。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進(jìn)行的分離。常用的有下列幾種方法: 1. 等電點(diǎn)沉淀法 不同蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同,可用等電點(diǎn)沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質(zhì)鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過(guò)調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來(lái)的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì),并能再度溶解而不變性。 3. 有機(jī)溶劑沉淀法 中性有機(jī)溶劑如乙醇、**,它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度降低,進(jìn)而從溶液中沉淀出來(lái),因此可用來(lái)沉淀蛋白質(zhì)。此外,有機(jī)溶劑會(huì)破壞蛋白質(zhì)表面的水化層,促使蛋白質(zhì)分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機(jī)溶劑會(huì)使蛋白質(zhì)變性,使用該法時(shí),要注意在低溫下操作.
三、蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質(zhì)溶液在受到強(qiáng)大的離心力作用時(shí),蛋白質(zhì)分子趨于下沉,沉降速度與蛋白質(zhì)分子的大小、密度和分子形狀有關(guān),也與溶劑的密度和粘度有關(guān)。蛋白質(zhì)顆粒在離心場(chǎng)中的沉降速度用每單位時(shí)間內(nèi)顆粒下沉的距離來(lái)表示。 在離心場(chǎng)中,蛋白質(zhì)分子所受到的凈離心力(離心力減去浮力)與溶劑的摩擦力平衡時(shí),每單位離心場(chǎng)強(qiáng)度的沉降速度稱為沉降系數(shù)(Sedimentation Coefficient)。國(guó)際上采用Svedberg單位作為沉降系數(shù)的單位,用S表示,以紀(jì)念超速離心法的創(chuàng)始人,瑞典***的蛋白質(zhì)化學(xué)家T.Svedberg。一個(gè)Svedberg單位(或直接稱一個(gè)S)為1×10—13s。蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)大約在1×10—13~200×10—13s范圍內(nèi),即1S~200S。浙江蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)
浙江蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)
儀器儀表行業(yè)已經(jīng)連續(xù)多年保持了經(jīng)濟(jì)高位運(yùn)行的態(tài)勢(shì)。即使當(dāng)全球受金融風(fēng)暴的影響,各個(gè)行業(yè)經(jīng)濟(jì)東圃有所放緩,但從全景發(fā)展情況看來(lái),儀表行業(yè)的增長(zhǎng)速度并沒(méi)有放緩。在計(jì)算機(jī)和互聯(lián)網(wǎng)的急速發(fā)展到整個(gè)世界的背景下,儀器儀表也開(kāi)始向網(wǎng)絡(luò)化突進(jìn),結(jié)合新的科技設(shè)備,通過(guò)廣域網(wǎng)和局域網(wǎng)直接操控儀器儀表,對(duì)公司的管理,經(jīng)營(yíng)一體化,應(yīng)用模式的分析等各大方面產(chǎn)生影響。其他內(nèi)資企業(yè)企業(yè)通過(guò)網(wǎng)絡(luò)這個(gè)平臺(tái)與客戶直接的交流,突破了世界和空間的限制,行家遠(yuǎn)程操控對(duì)儀器儀表進(jìn)行維護(hù)和分析。高科技的產(chǎn)品也隨之而來(lái)。工業(yè)領(lǐng)域轉(zhuǎn)型升級(jí)、提升發(fā)展質(zhì)量等有利于儀器儀表行業(yè)的發(fā)展;**安全、社會(huì)安全、產(chǎn)業(yè)和信息安全等需要自主、蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵裝備,成為全社會(huì)共識(shí);為迎接生產(chǎn)型百年未有之大變局,行家認(rèn)為,要重新定義中國(guó)在世界經(jīng)濟(jì)版圖中的地位,要順應(yīng)形勢(shì)實(shí)現(xiàn)制造升級(jí)。以華立集團(tuán)在境外開(kāi)發(fā)“中國(guó)工業(yè)園”的成功案例來(lái)闡述,跨國(guó)經(jīng)營(yíng)要成為企業(yè)主動(dòng)的戰(zhàn)略選擇,在不確定性中更好地活下去,以全球化視野看問(wèn)題,很多困惑在全球化過(guò)程中會(huì)迎刃而解。浙江蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)
蘇州英賽斯智能科技有限公司是一家機(jī)器人與自動(dòng)化設(shè)備、機(jī)械電子設(shè)備的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及技術(shù)咨詢;光學(xué)檢測(cè)設(shè)備、光電產(chǎn)品研發(fā)、制造、銷售;實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷售及提供相關(guān)的技術(shù)咨詢和售后服務(wù);自營(yíng)和代理各類商品及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)(限定企業(yè)經(jīng)營(yíng)或禁止進(jìn)出口的商品和技術(shù)除外)。(依法需經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)后方可開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng))的公司,是一家集研發(fā)、設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司。英賽斯擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì),以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵。英賽斯不斷開(kāi)拓創(chuàng)新,追求出色,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺(tái),以應(yīng)用為重點(diǎn),以服務(wù)為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值,提供更優(yōu)服務(wù)。英賽斯始終關(guān)注儀器儀表市場(chǎng),以敏銳的市場(chǎng)洞察力,實(shí)現(xiàn)與客戶的成長(zhǎng)共贏。
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