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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:上海五色免疫組化技術(shù)服務(wù),免疫組化
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提高抗原檢測率。常用的修復方法從強到弱一般分為三種,高壓修復、微波修復、胰酶修復。修復液也分為若干種(具體的可以查閱相關(guān)資料,大量的:中性的、高pH的等)。我們實驗室一般用微波修復中火6min*4次,效果不錯。注意微波修復后自然冷卻30min左右(只要你覺得修復液的溫度達室溫即可)。5)細胞通透目的是使抗體能夠充分地進入胞內(nèi)進行結(jié)合反應。一般用TritonX-100、蛋白酶k等通透液。如TritonX-100可以溶解細胞膜,上海五色免疫組化技術(shù)服務(wù)、細胞核膜、細胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進入胞漿和胞核內(nèi),故在細胞免疫組化時尤為推薦使用,這樣抗體就能順利進入胞內(nèi)與相應抗原結(jié)合。在免疫組織化學(>10um厚切片)和免疫細胞化學中一般用TritonX-100作為細胞通透劑,在膜上打孔。同時也是一種去污劑,一般在PBS中加入后終濃度是,而前者終濃度是。石蠟切片4um左右可以不通透,因為細胞已經(jīng)被切開了。6)滅活內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在傳統(tǒng)的ABC法和SP法中,免疫組化反應結(jié)果容易收到內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的干擾,必須用過氧化氫和卵白素等進行滅活,上海五色免疫組化技術(shù)服務(wù)。滅活內(nèi)源性POD一般3%過氧化氫滅活時間短點,可以10min左右,上海五色免疫組化技術(shù)服務(wù),而,一般10~30min。上海五色免疫組化技術(shù)服務(wù)
近年來,隨著免疫組織化學技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn),使許多疑難**得到了明確診斷。在常規(guī)**病理診斷中,5%-10%的病例單靠H.E.染色難以作出明確的形態(tài)學診斷。尤其是免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可,其在低分化或未分化**的鑒別診斷時,準確率可達50%-75%。免疫組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面:⑴惡性**的診斷與鑒別診斷;⑵確定轉(zhuǎn)移性惡性**的原發(fā)部位;⑶對某類**進行進一步的病理分型;⑷軟組織**的zhiliao一般需根據(jù)正確的組織學分類,因其種類多、組織形態(tài)相像,有時難以區(qū)分其組織來源,應用多種標志進行免疫組化研究對軟組織**的診斷是不可缺少的;⑸發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶,有助于臨床zhiliao方案的確定,包括手術(shù)范圍的確定。⑹為臨床提供zhiliao方案的選擇。江蘇多色熒光免疫組化技術(shù)服務(wù)
乳化劑的鑒定·判斷乳化是否充分,可將一滴乳化好的液體滴在水面上(冷水中),如能長時間保持圓珠形而不散開,表示乳化達到要求。(3)免疫方法——免疫途徑·常有靜脈、腹腔、肌肉、皮下、皮內(nèi)、淋巴結(jié)、腳掌等注射。·一般采用多點注射方法–常在足、掌、腋窩淋巴結(jié)周圍、背部兩側(cè)、頜下、耳后等處的皮內(nèi)或皮下。–皮內(nèi)易引起細胞免疫反應,有利于提高抗體的效價。(3)免疫方法——免疫途徑(續(xù))·幾點說明:–大動物一般不用腹腔注射–顆??乖褪褂米魟r不能靜脈注射–抗原寶貴可采用淋巴結(jié)內(nèi)微量注射法,只需10~100?g抗原即可獲得較好的免疫效果。–皮內(nèi)注射較困難,特別是天冷時更難注入。(3)免疫方法——次數(shù)及間隔時間·次數(shù)一般為2~3次(初次免疫和加強免疫)–***注射后,10~15天再加強注射;–劑量同***或為***的一半,用不全佐劑或不用佐劑。·間隔時間,一般而言,動物越大,間隔越長–豚鼠、大鼠為7~8天,兔子為10~15天,羊為14~28天;–第三次注射的間隔時間更長些,效果更好。舉例1:家兔的免疫·初次免疫–用50~200?gAg加入FCA,在背部皮下注射6~8點,每點~,也可肌肉內(nèi)或皮內(nèi)注射;·兩周后,加強免疫–將50~200?gAg于PBS或FIA中。
2. 免疫酶細胞化學技術(shù)是目前免疫組織化學研究中**常用的技術(shù).基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞或組織內(nèi)的相應抗原進行定位或定性研究.3. 免疫膠體金技術(shù)就是用膠體金標記一抗,二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究.
6、看來主要禍根是抗體稀釋液的pH值出問題了,于是我又用PBS替代抗體稀釋液和新試劑盒內(nèi)的試劑對組織切片做了免疫組化,結(jié)果還是沒有做出來:背景很深。這真把我搞慘了。難道還有什么原因嗎?通過仔細分析:一抗一定是結(jié)合上去了(老SP試劑盒結(jié)果很好),問題是二抗沒有結(jié)合上去也不對(因為***背景很深,這說明二抗可能也結(jié)合上去了),DAB孵育時間現(xiàn)在只用1、5min也是背景深而特異性染色淺,那我又懷疑封閉血清了。7、我做了兩張切片:一張用老試劑盒內(nèi)還剩下一點的血清而另一張用新試劑盒內(nèi)的封閉血清,其余試劑(二抗、SP)均用新試劑盒提供的,結(jié)果是前一張效果很好,而后一張能夠看到特異性染色,但背景太深,拍照效果不佳??磥矸忾]血清也是罪會禍首之一。結(jié)果分析顯示:抗體稀釋液的PH值偏低和封閉血清的失效導致了我的免疫組化結(jié)果的不佳,望大家在以后的組化實驗中也要注意這兩個不太引人注意的關(guān)鍵問題。慘痛的教訓,值得引以為鑒。案例二DAB染色后切片著色呈陰性結(jié)果背景:其實免疫組化在DAB染色后一般有四種情況:陽性染色效果很好、陰性染色、非特異性染色很深、陰陽臉(染色不均勻)。而陰性染色是許多初學者經(jīng)常遇到的頭疼問題。江蘇多色熒光免疫組化技術(shù)服務(wù)
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pH)漂洗5min×3/次,不時震蕩(洗去多余游離的熒光素標記的抗體)?!ぞ彌_甘油封片–分析純無熒光的甘油9份+pH,。·鏡檢:在熒光顯微鏡下觀察。·優(yōu)點:方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少?!と秉c:敏感性偏低;而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。若檢測多種抗原需制備多種相應的熒光標記抗體。?直接免疫熒光法的注意事項·對熒光標記的抗體的稀釋:要保證抗體的蛋白有一定的濃度;·一般稀釋度不應超過1:20,抗體濃度過低,會導致產(chǎn)生的熒光過弱,影響結(jié)果的觀察。?直接免疫熒光法的注意事項(續(xù))·染色溫度和時間需要根據(jù)各種不同的標本及抗原而變化;–染色時間:從10min到數(shù)小時,一般30min;–染色溫度:多采用室溫(25?C),高于37?C可加強染色效果,但對不耐熱的抗原(如流行性乙型腦炎***)可采用0-2?C的低溫,延長染色時間。–低溫染色過夜較37?C30min效果好的多。?直接免疫熒光法的注意事項(續(xù))·試驗時需設(shè)置下列對照:–自發(fā)熒光對照(空白對照):標本加,。–陽性對照:用已知的陽性標本加熒光標記的特異性抗體。–特異性對照(***試驗):標本加未標記的特異性抗體,再加熒光標記的特異性抗體。上海五色免疫組化技術(shù)服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司致力于化工,以科技創(chuàng)新實現(xiàn)***管理的追求。上海朝瑞科技擁有一支經(jīng)驗豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團隊,以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學產(chǎn)品銷售" ]。公司堅持以技術(shù)創(chuàng)新為發(fā)展引擎,以客戶滿意為動力,目前擁有5~10人專業(yè)人員,年營業(yè)額達到2000-3000萬元。上海朝瑞科技始終關(guān)注化工市場,以敏銳的市場洞察力以準確定位,實現(xiàn)與客戶的成長共贏。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/233459.html
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