蛋白質(zhì)純化方法-親和層析親和層析法包括特異性配體親和層析法以及通用性配體親和層析法。比較這兩種親和層析法。特異性配體親和層析法通常將復(fù)雜的生命大分子物質(zhì)作為配體，它的結(jié)合力比較大河吸附選擇性比較強(qiáng)。而通用性配體親和層析法通常將簡(jiǎn)單的小分子物質(zhì)作為配體，因此，它具有低廉的成本，吸附容量比較高，通過對(duì)吸附和脫附條件的改善能夠使得層析的分辨率提高。原理親和層析的原理類似于酶-底物，***-受體與抗原-抗體等特異性反應(yīng)的機(jī)理，山東化學(xué)分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)。有一定的親和力在每對(duì)反應(yīng)物之間。與在酶與底物的反應(yīng)中，只有特異的底物才可以結(jié)合一定的酶，使復(fù)合物產(chǎn)生相同。在親和層析中，只有特異的配體才可以和一定的生命大分子有親和力，并且使復(fù)合物產(chǎn)生。親和層析配體呈固相，而酶與底物的反應(yīng)底物呈液相是它們的不同點(diǎn)。事實(shí)上，親和層析是在含有活化基團(tuán)的基質(zhì)M上以共價(jià)鍵的方式固化具有識(shí)別能力的配體L，將固相載體制作成功而固化后的配體束縛特異物質(zhì)的能力依然保持。所以當(dāng)在小層析柱裝入固相載體，使得欲分離的樣品在該柱經(jīng)過，山東化學(xué)分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)。此時(shí)，山東化學(xué)分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)，樣品中對(duì)配體有親和力的物質(zhì)S就能夠通過結(jié)構(gòu)互補(bǔ)效應(yīng)、范德瓦爾力與靜電引力等作用在固相載體上吸附著。 山東化學(xué)分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)

三、蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定 3.3 沉降法 沉降法又稱超速離心法。蛋白質(zhì)溶液在受到強(qiáng)大的離心力作用時(shí)，蛋白質(zhì)分子趨于下沉，沉降速度與蛋白質(zhì)分子的大小、密度和分子形狀有關(guān)，也與溶劑的密度和粘度有關(guān)。蛋白質(zhì)顆粒在離心場(chǎng)中的沉降速度用每單位時(shí)間內(nèi)顆粒下沉的距離來表示。 在離心場(chǎng)中，蛋白質(zhì)分子所受到的凈離心力（離心力減去浮力）與溶劑的摩擦力平衡時(shí)，每單位離心場(chǎng)強(qiáng)度的沉降速度稱為沉降系數(shù)（Sedimentation Coefficient）。國(guó)際上采用Svedberg單位作為沉降系數(shù)的單位，用S表示，以紀(jì)念超速離心法的創(chuàng)始人，瑞典***的蛋白質(zhì)化學(xué)家T.Svedberg。一個(gè)Svedberg單位（或直接稱一個(gè)S）為1×10—13s。蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)大約在1×10—13～200×10—13s范圍內(nèi)，即1S～200S。山東蛋白純化系統(tǒng)上門維修

實(shí)驗(yàn)室及中試放大規(guī)模蛋白純化系統(tǒng) Unique Autopure系列蛋白純化系統(tǒng) 主要應(yīng)用領(lǐng)域 ： – 蛋白純化系統(tǒng)主要應(yīng)用于單抗、重組蛋白、疫苗、生化 藥、、天然產(chǎn)物和多糖等生物制藥領(lǐng)域。用于生物制品的下游工藝的分離純化。 Unique AutoPure 系列蛋白純化系統(tǒng) ： 產(chǎn)品特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)： – 模塊化設(shè)計(jì)，提供多個(gè)配置，滿足特殊工藝流程需求 - 低脈動(dòng)高精度雙柱塞輸液泵 ，保證優(yōu)異的分離重現(xiàn)性 ; – 全系統(tǒng)與液體接觸的地方均由生物兼容性材料組成、符合FDA、USP VI等相關(guān)法規(guī)要求 ; – DAD全譜直讀檢測(cè)器，避免了傳統(tǒng)的機(jī)械切換式檢測(cè)器所帶來的不穩(wěn)定性及高故障率 ; – 固定波長(zhǎng)檢測(cè)器燈為長(zhǎng)壽命LED燈，壽命大于8000小時(shí)，降低維護(hù)成本 ; – **技術(shù)紫外檢測(cè)器流通池，低死體積、低峰拓展，提高了色譜分離度 ; – 高靈敏度在線pH、電導(dǎo)率、紫外檢測(cè)器，低死體積、低峰拓展，提高了色譜分離度 ; – 集中了buffer選擇閥，自動(dòng)進(jìn)樣閥、柱位閥等自動(dòng)化組件，提高了純化的自動(dòng)化程度 ; – 具有柱前、柱后、壓差報(bào)警，氣泡傳感器檢測(cè)等功能，極大的保護(hù)了系統(tǒng)及層析柱的安全性 ; – 層析工作站軟件是一款功能強(qiáng)大、性能先進(jìn)、高穩(wěn)定性的色譜數(shù)據(jù)管理系

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4.3. 親和層析 親和層析（affinity-chromatography）分離技術(shù)是根據(jù)許多蛋白質(zhì)對(duì)特定的化學(xué)基團(tuán)具有專一性結(jié)合的原理。這些能被生物大分子如蛋白質(zhì)所識(shí)別并與之結(jié)合的基團(tuán)稱為配基或配體（ligand）。親和層析是一種極有效的分離純化蛋白質(zhì)的方法。例如酶對(duì)它的底物具有特殊的親和力；抗原和抗體互為配基。以伴刀豆球蛋白A（concanavalin A）的分離純化為例，由于該蛋白對(duì)葡萄糖有專一性親和吸附，因此可把葡萄糖通過適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)反應(yīng)共價(jià)地連接到像瓊脂糖凝膠一類的載體表面上。為了防止載體表面的空間位阻影響待分離的蛋白質(zhì)大分子與其配基的結(jié)合，在配基和載體之間往往插入一段所謂的連接臂（或稱為間隔臂，spacerarm），使配體與載體之間保持足夠的距離。 將這種多糖顆粒裝入一定規(guī)格的玻璃管中就制成了一根親和層析柱。當(dāng)含有伴刀豆球蛋白的提取液加到層析柱的上部，并沿柱從上往下過時(shí)，待純化的蛋白質(zhì)與其特異性配基結(jié)合而被吸附到柱上，其他蛋白因不能與葡萄糖配基結(jié)合將通過柱子而流出（圖2-28a）。然后采用一定的洗脫條件，如濃的葡萄糖溶液進(jìn)行洗脫，即可把該蛋白質(zhì)洗脫下來，達(dá)到與其它蛋白質(zhì)分離的目的。

三、蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定分子量 蛋白質(zhì)在普通聚丙烯酰胺凝膠中的電泳速度取決于蛋白質(zhì)分子大小、所帶電荷的量以及分子形狀。而SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳與此不同的是在樣品及電泳緩沖液中加入了十二烷基***鈉（sodium dodecylsulfate,SDS）。SDS是一種陰離子去污劑，可使蛋白質(zhì)變性并解離成亞基。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)樣品中加入SDS（一般加入量為0.1％）后，SDS與蛋白質(zhì)分子結(jié)合，使蛋白質(zhì)分子帶上大量的負(fù)電荷，這些電荷量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過蛋白質(zhì)分子原來所帶的電荷量，因而掩蓋了不同蛋白質(zhì)之間的電荷差異。所有結(jié)合SDS的蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物的形狀近似于長(zhǎng)的橢園棒，它們的短軸是恒定的，而長(zhǎng)軸與蛋白質(zhì)分子量的大小成正比。這樣，消除了蛋白質(zhì)之間原有的電荷和形狀的差異，電泳的速度只取決于蛋白質(zhì)分子量的大小。 進(jìn)行凝膠電泳時(shí)，常常用一種染料作前沿物質(zhì)，蛋白質(zhì)分子在電泳中的移動(dòng)距離和前沿物質(zhì)移動(dòng)的距離之比值稱為相對(duì)遷移率，相對(duì)遷移率和分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)成直線關(guān)系。以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)和其相對(duì)遷移率作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。將未知蛋白質(zhì)在同樣條件下電泳，根據(jù)測(cè)得的樣品相對(duì)遷移率，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上便可查出其分子量。山東蛋白純化系統(tǒng)上門維修

山東化學(xué)分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)

蛋白質(zhì)分離純化步驟（二） 2.4 樣品的進(jìn)一步分離純化 用等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì)，須進(jìn)一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時(shí)還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析（gel-filtration chromatography）又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠（Sephadex）裝入一個(gè)柱子中，制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，不同類型凝膠的網(wǎng)孔大小不同。當(dāng)把蛋白質(zhì)混合樣品加到凝膠柱中時(shí)，比凝膠網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可進(jìn)入網(wǎng)孔內(nèi)，而大于網(wǎng)孔的分子則不能進(jìn)入被排阻在凝膠顆粒之外。當(dāng)用洗脫液洗脫時(shí)，被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來，而比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可連續(xù)不斷地進(jìn)入網(wǎng)孔內(nèi)。這樣的小分子不但流經(jīng)的路程長(zhǎng)，而且受到來自凝膠內(nèi)部的阻力也很大，所以蛋白質(zhì)越小，從柱子上洗脫下來所需時(shí)間越長(zhǎng)。由于不同蛋白質(zhì)的分子大小不同，進(jìn)入網(wǎng)孔的程度不同，因此流出的速度不同，洗脫所用體積及時(shí)間不同，從而達(dá)到分離的目的。山東化學(xué)分析蛋白純化系統(tǒng)廠家報(bào)價(jià)

蘇州英賽斯智能科技有限公司是一家機(jī)器人與自動(dòng)化設(shè)備、機(jī)械電子設(shè)備的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售及技術(shù)咨詢；光學(xué)檢測(cè)設(shè)備、光電產(chǎn)品研發(fā)、制造、銷售；實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷售及提供相關(guān)的技術(shù)咨詢和售后服務(wù)；自營(yíng)和代理各類商品及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)（限定企業(yè)經(jīng)營(yíng)或禁止進(jìn)出口的商品和技術(shù)除外）。（依法需經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營(yíng)活動(dòng)）的公司，是一家集研發(fā)、設(shè)計(jì)、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司。英賽斯擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì)，以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供蛋白純化色譜系統(tǒng)，凝膠凈化色譜系統(tǒng)，制備液相色譜，柱塞泵。英賽斯不斷開拓創(chuàng)新，追求出色，以技術(shù)為先導(dǎo)，以產(chǎn)品為平臺(tái)，以應(yīng)用為重點(diǎn)，以服務(wù)為保證，不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值，提供更優(yōu)服務(wù)。英賽斯創(chuàng)始人李大為，始終關(guān)注客戶，創(chuàng)新科技，竭誠(chéng)為客戶提供良好的服務(wù)。

文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/2348141.html