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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:上海新手RNA提取試劑盒***的選擇,RNA提取試劑盒
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詳細(xì)說明
向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min,棄廢液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min,棄廢液。
12000rpm離心2min,棄掉收集管,上海新手RNA提取試劑盒***的選擇,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
將吸附柱放入新管中,向膜**滴加50-100ul RNase free ddH2O,室溫放置5min,12000rpm室溫離心2min即得到RNA
所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品,操作過程要小心,帶口罩,上海新手RNA提取試劑盒***的選擇,上海新手RNA提取試劑盒***的選擇、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。
通用RNA提取試劑盒是經(jīng)過改進(jìn)開發(fā)的新一代產(chǎn)品,提高了裂解液的裂解能力和提取的靈敏度,同時(shí)通過可在特定適宜的條件下特異、可逆地結(jié)合RNA,而各種蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)均可被去除掉對(duì)硅基質(zhì)膜的改進(jìn)增強(qiáng)了對(duì)RNA的吸附能力,得到的RNA 純度更好,質(zhì)量更高。該試劑盒可從各種細(xì)胞或組織中快速提取總RNA,每個(gè)吸附柱每次可處理50–100 mg 組織或5×106 細(xì)胞,可同時(shí)處理大量不同樣品。一個(gè)小時(shí)內(nèi)即可完成反應(yīng),提取的總RNA 沒有DNA 和蛋白的污染,可用于Northern blot、Dot blot、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析和分子克隆。江蘇新手RNA提取試劑盒500T/5865元會(huì)等很長(zhǎng)一段時(shí)間)。普通的提取實(shí)驗(yàn)用國(guó)產(chǎn)的試劑盒就足以。
樣品勻漿后,加入氯仿前,可在-80°C 凍存放置一個(gè)月。
RNA 沉淀可以保存在 75%乙醇中,2-8°C 放置一周或-20°C 放置一年。
該試劑盒***于專業(yè)人員的科學(xué)研究使用,不得用于臨床診斷或***,更不得用于食品或藥品中。
實(shí)驗(yàn)步驟、細(xì)胞裂解或組織勻漿:
a貼壁細(xì)胞:吸盡培液,按照比例加入 Trizol 消化細(xì)胞,即每 10 平方厘米細(xì)胞中加入 1 ml Trizol,六孔板每孔加 1 ml Trizol,12 孔板每孔加 0.5 ml Trizol。晃動(dòng) 3-5 下,再用移液器反復(fù)吹打幾下,確保細(xì)胞全部裂解,然后將溶液轉(zhuǎn)移至離心管中?!咀ⅰ考尤?Trizol 量不足時(shí),會(huì)導(dǎo)致 DNA 污染。
樣品處理
組織:將組織在液氮中磨碎。每 50–100 mg 組織加1 ml 溶液 RL,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過裂解液RZ 體積的十分之一。
單層培養(yǎng)細(xì)胞:直接在培養(yǎng)板中加入裂解液RZ 裂解細(xì)胞,每10 cm2 面積加1 ml溶液 RL。用取樣器抽打幾次。
注意:溶液 RL 的加入量根據(jù)培養(yǎng)瓶面積決定,不是由細(xì)胞數(shù)決定。如果加量不足,可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染。
細(xì)胞懸液:離心取細(xì)胞,棄上清。每5–10×106 動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞加入1 ml 溶液 RL。加溶液 RL 前不要洗滌細(xì)胞,以免降解mRNA。
將勻漿樣品在15–30℃放置5 min,使得核酸蛋白復(fù)合物完全分離。 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇),2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min,棄廢液。
RNA試劑盒 用于各種植物、動(dòng)物、微生物的RNA提取,在每個(gè)試劑盒里都有一份說明使用說明書。實(shí)驗(yàn)者只需要按照說明書上的步驟操作即可。使用時(shí)無需配制其它試劑,非常方便,適合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、純度高,可用于分子生物學(xué)后實(shí)驗(yàn)。但較好的試劑盒價(jià)格比較貴,在實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要來定奪試劑盒的使用
(以離心柱型為例):一般包括:成分?jǐn)?shù)量?jī)?chǔ)藏溫度有效期裂解液100ml2-8℃一年漂洗液30mlRT一年洗柱液100mlRT一年RNasefreeddH2O30mlRT一年RNasefree吸附柱100個(gè)RT一年RNasefree收集管(2ml)100個(gè)RT一年此外,還配有一份試劑盒使用說明書,根據(jù)不同的生產(chǎn)商,可能還配有不同的試劑,如:DNA酶、溶菌酶等。 價(jià)格不高,基本上各地均有現(xiàn)貨,如天根(國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種)等。北京四步完成RNA提取試劑盒****
芯片和試劑,對(duì)操作人員技術(shù)要求低,全程只需20分鐘,患者等待周期短,成本低。上海新手RNA提取試劑盒***的選擇
Trizol法提取RNA實(shí)驗(yàn)步驟及原理
1.在提取組織RNA時(shí),每50~100mg組織用1mL Trizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解;提取細(xì)胞RNA時(shí),先用PBS洗滌/離心沉淀細(xì)胞,每5-10 ╳106個(gè)細(xì)胞加1mL Trizol后, 反復(fù)用吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞.
2、將組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中, 在室溫15~30℃下放置5分鐘;在EP管中,按照每1mL TRIZOL加0.2mL氯仿的量加入氯仿(即為1/5體積), 蓋上EP管蓋子, 在手中用力震蕩15秒(10次), 在室溫下(15℃~30℃)放置2~3分鐘后, 14000rpm(4℃)離心15分鐘.
【注:離心后分為3層,RNA在上層水相, DNA在中間層, 蛋白質(zhì)在下層有機(jī)相】
3、取上層水相置于新EP管中(~500uL, 用200uL的黃色*頭小心吸取, 約吸取3次, 杜絕取到中間層/下層), 按照每1mL Trizol加0.5mL異丙醇的量加入異丙醇(即為1/2體積), 4℃下靜置20分鐘, 沉淀RNA;14000rpm(4℃)離心15分鐘.
4、按照每1mL TRIZOL加1mL75%乙醇進(jìn)行洗滌(即為1倍體積, 注:用DEPC水配置75%乙醇), 混合(#用移液器輕輕吹打即可,不用將沉淀打碎), 14000rpm(4℃)離心20分鐘, 棄上清(#比較好用真空泵吸去上清);讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥(#或在超凈臺(tái)中小風(fēng)吹干,比較好置于干凈的環(huán)境中,防止灰塵雜質(zhì)進(jìn)入);用45uL Rnase-free water 溶解RNA沉淀. 上海新手RNA提取試劑盒***的選擇
上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)建于2003-01-22,注冊(cè)資金 700-1000萬元,辦公設(shè)施齊全,辦公環(huán)境優(yōu)越,已***實(shí)行網(wǎng)絡(luò)化辦公,**提高了速度和效率。在上海朝瑞科技近多年發(fā)展歷史,公司旗下現(xiàn)有品牌zrbiorise,SPRICELL,scienceladde等。公司以用心服務(wù)為**價(jià)值,希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力,將1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底。上海朝瑞生物科技有限公司主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ],堅(jiān)持“質(zhì)量***、質(zhì)量服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/238179.html
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