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詳細說明
蛋白質(zhì)純化方法-親和層析親和層析法包括特異性配體親和層析法以及通用性配體親和層析法。比較這兩種親和層析法。特異性配體親和層析法通常將復雜的生命大分子物質(zhì)作為配體,它的結合力比較大河吸附選擇性比較強。而通用性配體親和層析法通常將簡單的小分子物質(zhì)作為配體,因此,它具有低廉的成本,吸附容量比較高,通過對吸附和脫附條件的改善能夠使得層析的分辨率提高。原理親和層析的原理類似于酶-底物,直銷蛋白純化系統(tǒng)廠家報價,***-受體與抗原-抗體等特異性反應的機理。有一定的親和力在每對反應物之間。與在酶與底物的反應中,只有特異的底物才可以結合一定的酶,使復合物產(chǎn)生相同。在親和層析中,只有特異的配體才可以和一定的生命大分子有親和力,并且使復合物產(chǎn)生。親和層析配體呈固相,而酶與底物的反應底物呈液相是它們的不同點。事實上,親和層析是在含有活化基團的基質(zhì)M上以共價鍵的方式固化具有識別能力的配體L,將固相載體制作成功而固化后的配體束縛特異物質(zhì)的能力依然保持。所以當在小層析柱裝入固相載體,直銷蛋白純化系統(tǒng)廠家報價,使得欲分離的樣品在該柱經(jīng)過,直銷蛋白純化系統(tǒng)廠家報價。此時,樣品中對配體有親和力的物質(zhì)S就能夠通過結構互補效應、范德瓦爾力與靜電引力等作用在固相載體上吸附著。 直銷蛋白純化系統(tǒng)廠家報價
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 分離純化蛋白質(zhì)的一般程序 2.1 材料的預處理及細胞破碎 分離提純某一種蛋白質(zhì)時,首先要把蛋白質(zhì)從組織或細胞中釋放出來并保持原來的天然狀態(tài),不喪失活性。所以要采用適當?shù)姆椒▽⒔M織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有: 1. 機械破碎法 這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎。常用設備有,高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。 2. 滲透破碎法 這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。 3. 反復凍融法 生物組織經(jīng)凍結后,細胞內(nèi)液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便,但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質(zhì)不宜采用此法。 4. 超聲波法 使用超聲波震蕩器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破壞微生物細胞等。智能蛋白純化系統(tǒng)上門維修
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.2 蛋白質(zhì)的抽提 通常選擇適當?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等),使膜結構破壞,利于蛋白質(zhì)與膜分離。在抽提過程中,應注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質(zhì)的變性。 2.3蛋白質(zhì)粗制品的獲得 選用適當?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法: 1. 等電點沉淀法 不同蛋白質(zhì)的等電點不同,可用等電點沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質(zhì)鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì),并能再度溶解而不變性。 3. 有機溶劑沉淀法 中性有機溶劑如乙醇、**,它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉淀出來,因此可用來沉淀蛋白質(zhì)。此外,有機溶劑會破壞蛋白質(zhì)表面的水化層,促使蛋白質(zhì)分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機溶劑會使蛋白質(zhì)變性,使用該法時,要注意在低溫下操作.
三、蛋白質(zhì)分子量的測定 蛋白質(zhì)分子量測定的方法很多,目前常用的方法有以下幾種。 3.1 凝膠過濾法 凝膠過濾法測定蛋白質(zhì)分子量的原理如“分離純化方法”中所 述。一定型號的凝膠顆粒上具有一定大小的孔隙,只允許較小的分子進入膠粒,而大于孔隙的分子則不能進入膠粒而被排阻在膠粒外面。用洗脫液洗脫時,被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)先被洗脫下來,隨后能夠進入顆粒的蛋白質(zhì)也按分子量大小而先后被洗脫下來,分子量越小的越后被洗脫下來。由于不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質(zhì)分子量范圍,在此范圍內(nèi),分子量的對數(shù)和洗脫體積之間成線性關系。因此,用幾種已知分子量的蛋白質(zhì)為標準進行層析分析,以每種蛋白質(zhì)的洗脫體積對它們的分子量的對數(shù)作圖,繪制出標準洗脫曲線。未知蛋白質(zhì)在同樣的條件下進行層析分析,根據(jù)其所用的洗脫體積,從標準洗脫曲線上可求出此未知蛋白質(zhì)對應的分子量來。
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.4 樣品的進一步分離純化 用等電點沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì),須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有:凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。 1. 凝膠過濾層析 凝膠過濾層析(gel-filtration chromatography)又稱為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠(Sephadex)裝入一個柱子中,制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網(wǎng)狀結構,不同類型凝膠的網(wǎng)孔大小不同。當把蛋白質(zhì)混合樣品加到凝膠柱中時,比凝膠網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可進入網(wǎng)孔內(nèi),而大于網(wǎng)孔的分子則不能進入被排阻在凝膠顆粒之外。當用洗脫液洗脫時,被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠之間的縫隙先被洗脫下來,而比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可連續(xù)不斷地進入網(wǎng)孔內(nèi)。這樣的小分子不但流經(jīng)的路程長,而且受到來自凝膠內(nèi)部的阻力也很大,所以蛋白質(zhì)越小,從柱子上洗脫下來所需時間越長。由于不同蛋白質(zhì)的分子大小不同,進入網(wǎng)孔的程度不同,因此流出的速度不同,洗脫所用體積及時間不同,從而達到分離的目的。四川蛋白純化系統(tǒng)***的選擇
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儀器儀表行業(yè)飛速發(fā)展一是因為我國的經(jīng)濟高速穩(wěn)定發(fā)展的運行;按照過去的經(jīng)驗,如果GDP的增長在10%以上時,儀表行業(yè)的增長率則在26%~30%之間。二是因為我國宏觀調(diào)控對儀表行業(yè)的影響有一個滯后期,儀表往往在工程的后期才交付使用,因此,因宏觀調(diào)控政策而減少的收入對儀表行業(yè)的影響不會太大。進一步提升我國儀器儀表技術和水平,其他內(nèi)資企業(yè)企業(yè)要順應產(chǎn)業(yè)發(fā)展潮流,在穩(wěn)固常規(guī)品種的同時,進一步發(fā)展智能儀器儀表,提升產(chǎn)業(yè)數(shù)字化、智能化、集成化水平。工業(yè)領域轉(zhuǎn)型升級、提升發(fā)展質(zhì)量等有利于儀器儀表行業(yè)的發(fā)展;**安全、社會安全、產(chǎn)業(yè)和信息安全等需要自主、蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵裝備,成為全社會共識;中國生產(chǎn)型正面臨百年未有之大變局,行業(yè)行家認為,中美貿(mào)易戰(zhàn)不會有終點,中美關系時好時壞將成為常態(tài),儀器儀表行業(yè)無法排除大局勢的影響,且不要把問題聚焦在關稅上。中國經(jīng)濟的高速發(fā)展得益于WTO框架下的全球化分工;現(xiàn)在中國制造的競爭力在于工業(yè)門類齊全、供應鏈完整、供應鏈的高度專業(yè)和細分。直銷蛋白純化系統(tǒng)廠家報價
蘇州英賽斯智能科技有限公司致力于儀器儀表,以科技創(chuàng)新實現(xiàn)***管理的追求。英賽斯深耕行業(yè)多年,始終以客戶的需求為向?qū)В瑸榭蛻籼峁?**的蛋白純化色譜系統(tǒng),凝膠凈化色譜系統(tǒng),制備液相色譜,柱塞泵。英賽斯始終以本分踏實的精神和必勝的信念,影響并帶動團隊取得成功。英賽斯始終關注儀器儀表市場,以敏銳的市場洞察力,實現(xiàn)與客戶的成長共贏。
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