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有關轉基因及其產(chǎn)品的安全性的爭論在國內外愈演愈烈，各國**紛紛出臺一系列的政策、法規(guī)，要求對轉基因作物進行標識，有些國家對轉基因的比較低含量做了限定，其閾值大小從1-5％不等。這就要求必須對轉基因及其產(chǎn)品進行檢測。 常規(guī)的檢測方法多采用PCR法，如PCR-凝膠電泳、PCR-ELISA等。這些方法普遍存在著PCR產(chǎn)物污染、特異性不高及速度慢等問題。熒光PCR技術是一種新近發(fā)展起來的檢測技術，它的應用將從根本上解決這些問題。 1.收集了國內外商品化的轉基因作物品種，并通過查閱有關文獻及網(wǎng)站初步確定了各種作物的轉基因構建圖； 2．于反應體系中引入UNG去污染酶，建立了無污染熒光PCR擴增體系； 3．以植物內源基因18SrRNA為靶標，設計了特異性引物和熒光探針，建立了以18SrRNA基因的擴增與否來判斷核酸提取質量好壞的方法； 4．以FAM熒光素為標記，建立了以35S、NOS、NPTⅡ、Pat、Bar、FMV和CryⅢa為篩選目標的轉基因農(nóng)作物熒光PCR定性檢測體系； 5．分別以FAM和TET兩種熒光素標記外源基因和內源基因，建立了轉基因大豆及轉基因玉米的熒光定量PCR檢測體系。天津熒光定量PCR技術服務

轉基因：利用熒光定量PCR技術將轉基因信號擴增放大。

在環(huán)境監(jiān)測方面的應用實時熒光定量PCR技術已經(jīng)被國內外應用在環(huán)境監(jiān)測中，提高了監(jiān)測水平。此項技術可以檢測河流中環(huán)境微生物隨著季節(jié)變化的情況。還可以用來對地表水和飲用水中致病菌進行檢測以便及時預告地表水污染情況以及采取相應有效措施避免大范圍污染

儀器擺放：實時熒光定量 PCR 儀應安放在濕度較低、灰塵較少、遠離水池的平穩(wěn)臺面上，不能有強光直射，室內應通風良好，無腐蝕性氣體

SYBR Green I法：SYBR Green I是一種具有綠色激發(fā)波長的染料，比較大吸收波長約為 497 nm，發(fā)射波長比較大約為 520 nm，可以和所有的 dsDNA 雙螺旋小溝區(qū)域結合。因為在游離狀態(tài)下 SYBR Green I 發(fā)出的熒光較弱，但是當它與雙鏈 DNA 結合后，熒光就會**增強，而且熒光信號的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。此法的優(yōu)點是它可以監(jiān)測任何 dsDNA 序列的擴增，檢測方法較為簡單，成本較低，但也正是由于熒光染料能和任何dsDNA 結合，如非特異性擴增產(chǎn)物和引物二聚體也能與染料結合而產(chǎn)生熒光信號，使實驗產(chǎn)生假陽性結果，因此其特異性不如探針法。因為非特異性產(chǎn)物和引物二聚體的變性溫度要比目標產(chǎn)物的低，所以可以在熔解曲線反應過程中利用軟件分析儀器收集到信號進行鑒別

實時熒光定量PCR的應用

目前，qPCR技術已經(jīng)廣泛應用于生物醫(yī)藥食品等行業(yè)，應用于疾病的早期診斷、遺傳病的早期診斷、***研究、**的診斷與研究、食品病原微生物的檢測、轉基因食品檢測、動物疫病檢測等，除此之外，還包括：

● 基因擴增

● 擴增特異性分析

● 基因定量分析

● 基因檢測

● 基因分型

● SNP分析

● RFLP多態(tài)性分析

● 單/多基因表達研究

● 高通量基因表達譜研究

實時熒光定量PCR技術，顧名思義，就是在PCR的基礎上加入熒光基團，通過熒光信號的變化的實時監(jiān)測PCR的反應過程，***通過對未知模板進行定量分析的方法。 天津熒光定量PCR技術服務

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使用可高壓處理的移液器，由于移液器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本 DNA 的污染，因此要使用可高壓處理的移液器 。嚴格按照試驗的分區(qū)進行操作，按照提取區(qū)、擴增區(qū)、檢測區(qū)單方向流動，物品、樣品和試劑不可逆向流動 。操作多份樣品時，制備反應混合液，先將熒光 PCR 反應液、熒光探針和酶混合好，然后分裝到每個 PCR 管中，這樣即可以減少操作次數(shù)，避免污染，又可以增加反應的精確度 。加樣品、加蛋白酶 K 和加樣品過程中，特別注意防止樣品的交叉污染和酶的降解   。操作時設立陰性及陽性對照，可驗證熒光 PCR反應的準確性和可信性上海lncRNA熒光定量PCR技術服務

上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)辦于2003-01-22，是一家服務型的公司。經(jīng)過多年不斷的歷練探索和創(chuàng)新發(fā)展，公司是一家有限責任公司企業(yè)，以誠信務實的創(chuàng)業(yè)精神、質量高效的管理團隊、精悍的職工隊伍，努力為廣大用戶提供***的產(chǎn)品。以滿足顧客要求為己任；以顧客永遠滿意為標準；以保持行業(yè)**為目標，提供***的[ "科研技術服務", "應用技術服務", "科研成果轉化", "科學產(chǎn)品銷售" ]。上海朝瑞科技將以真誠的服務、創(chuàng)新的理念、***的產(chǎn)品，為彼此贏得全新的未來！

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