9、堿性磷酸酶堿性磷酸酶（AKP），又稱堿性磷酸單酯酶，是酶組織化學(xué)中**常用的酶之一。分布***，常見(jiàn)于活躍運(yùn)輸?shù)哪ど?。該酶在堿性環(huán)境下能催化各種醇和酚的磷酸酯水解，**適pH為，可被Mg2+、Mn2+和某些氨基酸所***；**物、碘液、砷酸鹽等可***其活性。顯示AKP的方法很多，主要有鈣鈷法和同時(shí)偶聯(lián)法，北京多色熒光免疫組化分析服務(wù)。前者所需試劑便宜，容易購(gòu)買(mǎi)，操作簡(jiǎn)單，但會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。后者方法較靈敏，而且在正常組織內(nèi)不存在萘酚，因此不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，但所需試劑較難購(gòu)買(mǎi)。10、生物素（biotin）生物素是B族維生素之一。生物素在羧化、脫羧和轉(zhuǎn)羧化反應(yīng)中起輔酶作用。生物素是含硫水溶性維生素。廣布于動(dòng)物及植物組織，已從肝提取物和蛋黃中分離，是多種羧化酶輔基的成分。生物素標(biāo)記反應(yīng)簡(jiǎn)單、溫和且很少***抗體活性，生物素標(biāo)記的抗體可存放多年而不失活。能與生物素結(jié)合的二級(jí)試劑素，北京多色熒光免疫組化分析服務(wù)，北京多色熒光免疫組化分析服務(wù)，所需的各種標(biāo)記物均可購(gòu)置。此外，親和素和鏈霉親和素的結(jié)合背景水平非常低，結(jié)合緊密且快速，抗體很容易與經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的活化生物素結(jié)合。生物素又可以與結(jié)合有酶、熒光染料的親和素或鏈霉親和素連接，后者已有商品試劑供應(yīng)。這樣只需將純化抗體與生物素結(jié)合，就可用各種不同的標(biāo)記物來(lái)檢測(cè)。 北京多色熒光免疫組化分析服務(wù)

    我一般初次做一種新抗體，喜歡先用說(shuō)明書(shū)建議的低濃度和高濃度做一次，然后決定是向高還是低方向摸索。一般先決定二抗的濃度（工作液就好辦了，直接滴加），重點(diǎn)摸索一抗的**適濃度。注意：免疫反應(yīng)中存在前帶和后帶效應(yīng)，這提示不是濃度越高，陽(yáng)性率就越高，反之亦然。⑷重要原因排除之后，也不要忽視抗體的質(zhì)量：原裝抗體一般比較穩(wěn)定，效果較好；而進(jìn)口分裝次之；工作液可能要注意質(zhì)量問(wèn)題。3、同時(shí)，DAB的孵育時(shí)間可能要適當(dāng)延長(zhǎng)，在鏡下觀察，有時(shí)可延長(zhǎng)至30min。但一般3-10min比較好，此時(shí)背景也較淺。否則，說(shuō)明抗體濃度不合適。4、***，血清封閉時(shí)間也可相應(yīng)縮短。一般10-30min，但這個(gè)時(shí)間可以調(diào)整，封閉主要是降低切片的總體背景著色。5、此外，細(xì)胞通透也不可忽視。許多戰(zhàn)友認(rèn)為石蠟切片一般不需細(xì)胞通透，因?yàn)榍衅瑫r(shí)可能已經(jīng)把細(xì)胞切開(kāi)了，但對(duì)于胞**白，建議還是通透一下，促進(jìn)抗體等試劑充分進(jìn)入?yún)⑴c反應(yīng)。6、以上原因，都是針對(duì)實(shí)際中常見(jiàn)原因來(lái)進(jìn)行分析的，前提是排除操作者的操作錯(cuò)誤而引起陰性結(jié)果，這就需要新手還是要設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照以排除方法的問(wèn)題。還有抗體稀釋液的pH值過(guò)低等其它原因的干擾?？傊氚衙庖呓M化做好，可能每一個(gè)環(huán)節(jié)都很重要。北京多色熒光免疫組化分析服務(wù)

免疫組織化學(xué)是一項(xiàng)在醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)與臨床科研中被廣泛應(yīng)用的一項(xiàng)技術(shù)，免疫組化染色服務(wù)也是生物公司的一項(xiàng)常規(guī)服務(wù)之一。該技術(shù)融合了抗原和抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)技術(shù)與組織學(xué)技術(shù)，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色，來(lái)對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行定位和定量研究。肽類、***、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、受體、表面抗原等，它們的組織細(xì)胞內(nèi)具有抗原性的物質(zhì)，所以均可以用免疫組織化學(xué)方法顯示。免疫組化常用的顯色劑包括熒光素、酶、生物素和鐵蛋白等。11、金屬離子和金屬蛋白復(fù)合物

金屬離子和金屬蛋白復(fù)合物如鐵蛋白、金和汞可以作為免疫組化反應(yīng)中的標(biāo)記物。如鐵蛋白等，主要應(yīng)用于免疫電鏡。免疫金銀法的基本原理是用特異性抗體與抗原反應(yīng)，隨后用金標(biāo)記的間接抗體或SPA蛋白，再與特異性抗體結(jié)合，用乳酸銀處理，使銀顆粒沉積在金顆粒上，還原銀反應(yīng)而顯示出黑褐色。適用于石蠟切片、冰凍切片，培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞涂片和樹(shù)脂包埋的電鏡切片。這種方法敏感性高，可檢測(cè)組織中微量抗原，定位準(zhǔn)確、無(wú)擴(kuò)散現(xiàn)象且背景清洗，對(duì)比度好、方法簡(jiǎn)便。

    問(wèn)題及其解答：產(chǎn)生組織切片非特異性染色的原因有哪些？如何解決？1、抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過(guò)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來(lái)控制。這是**重要的一條。2、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。3、內(nèi)源性過(guò)氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細(xì)胞多的組織），需要通過(guò)延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來(lái)降低背景染色；4、非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過(guò)延長(zhǎng)二抗來(lái)源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來(lái)加強(qiáng)封閉效果；5、DAB孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或濃度過(guò)高；6、PBS沖洗不充分，殘留抗體結(jié)果增強(qiáng)著色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤為重要；7、標(biāo)本染色過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)干片，這容易增強(qiáng)非特異性著色。我的實(shí)際解決方案：以上的分析可能對(duì)于初學(xué)者還是不容易的，下面我就把我的排除實(shí)驗(yàn)的具體過(guò)程與大家進(jìn)行分享、交流和討論。1、首先排除抗體孵育條件。一般來(lái)說(shuō)，著色效果的好壞與抗體的孵育條件是密不可分的，由于用SP法已經(jīng)做出來(lái)過(guò)一次且效果不錯(cuò)，因此對(duì)于同樣組織的同一抗原進(jìn)行分析，這種因素可以先排除。2、其次，DAB孵育時(shí)間是否太長(zhǎng)？做出來(lái)那一次我是孵育8min，后來(lái)也是8-10min。

TSA技術(shù)(Tyramide Signal Amplification?，酪胺信號(hào)放大技術(shù))是做多重免疫熒光染色的一種多快好省的方法，它使同一張片子上所有的靶標(biāo)都可以選用特異性高的兔單克隆抗體，搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而且信號(hào)放大的倍數(shù)**增強(qiáng)。如果想要運(yùn)用這個(gè)技術(shù)，需要先做四個(gè)方面的準(zhǔn)備工作：嚴(yán)格驗(yàn)證的高特異性抗體：所有CST的IHC-P驗(yàn)證過(guò)的抗體都滿足mIHC(多重?zé)晒饷庖呓M化)高特異性的要求;HRP偶聯(lián)的針對(duì)一抗種屬亞型特異的二抗;酪胺熒光素(Perkin Elmer,Thermo Fisher Scientific等供應(yīng)商);多光譜成像系統(tǒng)(PerkinElmer等)。北京多色熒光免疫組化分析服務(wù)

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    由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。3）定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義的。7、從蛋白水平檢測(cè)角度，免疫組化技術(shù)與Westernblotting、ELISA的異同1）Westernblotting蛋白質(zhì)免疫印跡，也是利用抗體抗原反應(yīng)原理，結(jié)合化學(xué)發(fā)光等技術(shù)來(lái)檢查組織或細(xì)胞樣品內(nèi)蛋白含量的檢測(cè)方法。與免疫組化技術(shù)相比，定量可能更加準(zhǔn)確；當(dāng)然Westernblotting也可定性和定位（通過(guò)提取膜蛋白或**白、胞漿蛋白分別檢測(cè)其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位），但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于免疫組化技術(shù)。2）ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，也是利用抗體-抗原-抗原結(jié)合反應(yīng)原理來(lái)檢查體液或組織勻漿中蛋白含量的檢測(cè)。與免疫組化技術(shù)相比，定量**準(zhǔn)確。北京多色熒光免疫組化分析服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司始建于2003-01-22，坐落于上海市松江區(qū)廣富林路697號(hào)昂立大廈2113室，現(xiàn)有員工5~10人余人。zrbiorise,SPRICELL,scienceladde是上海朝瑞生物科技有限公司的主營(yíng)品牌，是專業(yè)的1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)公司，擁有自己**的技術(shù)體系。我公司擁有強(qiáng)大的技術(shù)實(shí)力，多年來(lái)一直專注于1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的發(fā)展和創(chuàng)新，打造高指標(biāo)產(chǎn)品和服務(wù)。自公司成立以來(lái)，一直秉承“以質(zhì)量求生存，以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營(yíng)理念，始終堅(jiān)持以客戶的需求和滿意為**，為客戶提供質(zhì)量的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]，從而使公司不斷發(fā)展壯大。

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