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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:江蘇**基因熒光定量PCR課題承包,熒光定量PCR
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比較Ct值的相對定量法:此方法是將待測靶基因片段和內(nèi)參照基因片段同時擴增,可以在兩個反應(yīng)管中或者一個反應(yīng)管中進行擴增反應(yīng),并且就兩者的ct值之差進行測量,江蘇**基因熒光定量PCR課題承包,江蘇**基因熒光定量PCR課題承包,江蘇**基因熒光定量PCR課題承包。在采用此方法過程中需要用數(shù)學(xué)公式進行相對量的計算,首先要假設(shè)每個循環(huán)產(chǎn)物增加一倍時PCR反應(yīng)**期得到Ct值對起始模板的量一個循環(huán)的估算和起始模板數(shù)兩倍相當。這種方法的前提是靶基因和內(nèi)源控制物的擴增效率基本一致,所以在應(yīng)用過程中效率的偏移會對實際拷貝數(shù)估計產(chǎn)生一定影響,因此,為了保證目的基因和內(nèi)參基因的擴增效率相等應(yīng)當加強對反應(yīng)體系的優(yōu)化,這也是該方法應(yīng)用的難點之一江蘇**基因熒光定量PCR課題承包
有關(guān)轉(zhuǎn)基因及其產(chǎn)品的安全性的爭論在國內(nèi)外愈演愈烈,各國**紛紛出臺一系列的政策、法規(guī),要求對轉(zhuǎn)基因作物進行標識,有些國家對轉(zhuǎn)基因的比較低含量做了限定,其閾值大小從1-5%不等。這就要求必須對轉(zhuǎn)基因及其產(chǎn)品進行檢測。 常規(guī)的檢測方法多采用PCR法,如PCR-凝膠電泳、PCR-ELISA等。這些方法普遍存在著PCR產(chǎn)物污染、特異性不高及速度慢等問題。熒光PCR技術(shù)是一種新近發(fā)展起來的檢測技術(shù),它的應(yīng)用將從根本上解決這些問題。 1.收集了國內(nèi)外商品化的轉(zhuǎn)基因作物品種,并通過查閱有關(guān)文獻及網(wǎng)站初步確定了各種作物的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建圖; 2.于反應(yīng)體系中引入UNG去污染酶,建立了無污染熒光PCR擴增體系; 3.以植物內(nèi)源基因18SrRNA為靶標,設(shè)計了特異性引物和熒光探針,建立了以18SrRNA基因的擴增與否來判斷核酸提取質(zhì)量好壞的方法; 4.以FAM熒光素為標記,建立了以35S、NOS、NPTⅡ、Pat、Bar、FMV和CryⅢa為篩選目標的轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物熒光PCR定性檢測體系; 5.分別以FAM和TET兩種熒光素標記外源基因和內(nèi)源基因,建立了轉(zhuǎn)基因大豆及轉(zhuǎn)基因玉米的熒光定量PCR檢測體系。江蘇siRNA熒光定量PCR實驗技術(shù)服務(wù)
TaqMan探針法:TaqMan 探針法是具有高度特異性的定量 PCR 技術(shù)。它的工作原理是在 PCR 反應(yīng)體系中存在一對 PCR 引物和一條探針,探針的5′ 端標記有報告基團,3′ 端標記有熒光淬滅基團,探針只與模板特異結(jié)合,其結(jié)合位點在兩條引物之間。當探針完整的時候,報告基團的熒光能量被淬滅基團吸收,所以儀器搜集不到信號,隨著反應(yīng)的進展,Taq酶遇到探針,利用 3′→5′ 外切核酸酶的活性把探針切斷,導(dǎo)致報告基團的熒光能量不能被淬滅基團吸收,產(chǎn)生了熒光信號,因此信號的強度就**了模板 DNA 的拷貝數(shù)
28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類型),上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個更小稍微擴散的帶,它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA)組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質(zhì),可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過程中如果出現(xiàn)DNA污染,將會在28S核糖體RNA帶的上面出現(xiàn),即更高分子量的彌散遷移物質(zhì)或者帶,RNA的降解表現(xiàn)為核糖體RNA帶的彌散。用數(shù)碼照相機拍下電泳結(jié)果。 ①反應(yīng)體系 序號 反應(yīng)物 劑量 1 逆轉(zhuǎn)錄buffer 2μl 2 上游引物 0.2μl 3 下游引物 0.2μl 4 dNTP 0.1μl 5 逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV 0.5μl 6 DEPC水 5μl 7 RNA模版 2μl 8 總體積 10μl 輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
一個評估 PCR 效率的關(guān)鍵參數(shù)是 R2,它是說明如何使用一個數(shù)值預(yù)測另一個數(shù)值的相關(guān)程度的統(tǒng)計學(xué)術(shù)語。如果 R2 為 1,那么 Y 值 (Ct) 可以用來準確預(yù)測 X 值(圖7A)。如果 R2 為 0,那么就不能通過 Y 值預(yù)測 X 值(圖 7B)。R2 值 >0.99 表示兩個數(shù)值之間相關(guān)的置信度良好。
精確度
標準差(偏差的平方根)是**常用的精確度計量方法。如果許多數(shù)據(jù)點都靠**均值,則標準差就小;如果許多數(shù)據(jù)點都遠離平均值,則標準差就大。
實際上,足夠多重復(fù)次數(shù)產(chǎn)生的數(shù)據(jù)**形成大致的正態(tài)分布。這經(jīng)??赏ㄟ^經(jīng)典的中心極限定理來證明,該定理稱大量**同分布隨機變量的和在無限多時趨向于正態(tài)分布。如圖 8A 所示,約 68% 的值在平均值的 1 個標準差之內(nèi),約 95% 的值在平均值的 2 個標準差之內(nèi),約 99.7% 的值在平均值的 3 個標準差之內(nèi)。 江蘇**基因熒光定量PCR課題承包
江蘇**基因熒光定量PCR課題承包
每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線,其中橫坐標**起始拷貝數(shù)的對數(shù),縱坐標**Ct值。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。同時,對于熒光PCR實驗來說,CT值也是判讀樣品陰陽性的重要指標。
大量的熒光定量PCR研究資料表明,病原體數(shù)量與***性疾病病情的輕重程度、傳染性及***效果均有相關(guān)性。因此,通過熒光定量PCR方法得到的檢測結(jié)果,一定程度上可以準確反映疾病***的情況。 江蘇**基因熒光定量PCR課題承包
上海朝瑞生物科技有限公司成立于2003-01-22,是一家服務(wù)型的公司。公司業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]等,價格合理,品質(zhì)有保證。公司從事化工多年,有著創(chuàng)新的設(shè)計、強大的技術(shù),還有一批**的專業(yè)化的隊伍,確保為客戶提供質(zhì)量的產(chǎn)品及服務(wù)。公司自成立以來發(fā)展迅速,業(yè)務(wù)不斷發(fā)展壯大,年營業(yè)額度達到2000-3000萬元,未來我們將不斷進行創(chuàng)新和改進,讓企業(yè)發(fā)展再上新高。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/251875.html
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