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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:江蘇lncRNA熒光定量PCR分析服務(wù),熒光定量PCR
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詳細(xì)說(shuō)明
轉(zhuǎn)基因:利用熒光定量PCR技術(shù)將轉(zhuǎn)基因信號(hào)擴(kuò)增放大。
在環(huán)境監(jiān)測(cè)方面的應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)已經(jīng)被國(guó)內(nèi)外應(yīng)用在環(huán)境監(jiān)測(cè)中,提高了監(jiān)測(cè)水平。此項(xiàng)技術(shù)可以檢測(cè)河流中環(huán)境微生物隨著季節(jié)變化的情況。還可以用來(lái)對(duì)地表水和飲用水中致病菌進(jìn)行檢測(cè)以便及時(shí)預(yù)告地表水污染情況以及采取相應(yīng)有效措施避免大范圍污染
儀器擺放:實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀應(yīng)安放在濕度較低,江蘇lncRNA熒光定量PCR分析服務(wù),江蘇lncRNA熒光定量PCR分析服務(wù)、灰塵較少,江蘇lncRNA熒光定量PCR分析服務(wù)、遠(yuǎn)離水池的平穩(wěn)臺(tái)面上,不能有強(qiáng)光直射,室內(nèi)應(yīng)通風(fēng)良好,無(wú)腐蝕性氣體 江蘇lncRNA熒光定量PCR分析服務(wù)
SNP基因分型技術(shù)原理是PCR擴(kuò)增含有SNP的基因組片段,主要特點(diǎn)是準(zhǔn)確性高、靈活性強(qiáng)、通量大,主要方法是TaqMan探針法。TaqMan探針法 針對(duì)染色體上的不同SNP位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)PCR引物和TaqMan探針,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增。探針的5’-端和3’-端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。當(dāng)溶液中存在PCR產(chǎn)物時(shí),該探針與模板退火,即產(chǎn)生了適合于核酸外切酶活性的底物,從而將探針5’-端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),破壞兩熒光分子間的PRET,發(fā)出熒光。通常用于少量SNP位點(diǎn)分析。江蘇lncRNA熒光定量PCR分析服務(wù)
熒光定量PCR 技術(shù),是通過(guò)在PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)驗(yàn)采用兩種定量方式,即***定量和相對(duì)定量。熒光定量PCR 可用于mRNA 表達(dá)量水平檢測(cè)、MicroRNA 表達(dá)量水平檢測(cè)和基因拷貝數(shù)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)的方法可分為SYBR Green I 法和TaqMan 探針法。
客戶提供提供樣本
細(xì)胞:細(xì)胞數(shù)>10^6;
組織:總量>100 mg;
DNA 或RNA 樣品:總量>2 μg。
可選樣本引物:可由客戶提供,沒有引物的情況下,可由生工生物設(shè)計(jì)合成
提供信息
靶基因信息:包括基因序列或GenBank Accession Number 等;背景資料:包括生物物種信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 來(lái)源、基因豐度等。**終交付交付報(bào)告
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:包括實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器、照片及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
一個(gè)評(píng)估 PCR 效率的關(guān)鍵參數(shù)是 R2,它是說(shuō)明如何使用一個(gè)數(shù)值預(yù)測(cè)另一個(gè)數(shù)值的相關(guān)程度的統(tǒng)計(jì)學(xué)術(shù)語(yǔ)。如果 R2 為 1,那么 Y 值 (Ct) 可以用來(lái)準(zhǔn)確預(yù)測(cè) X 值(圖7A)。如果 R2 為 0,那么就不能通過(guò) Y 值預(yù)測(cè) X 值(圖 7B)。R2 值 >0.99 表示兩個(gè)數(shù)值之間相關(guān)的置信度良好。
精確度
標(biāo)準(zhǔn)差(偏差的平方根)是**常用的精確度計(jì)量方法。如果許多數(shù)據(jù)點(diǎn)都靠**均值,則標(biāo)準(zhǔn)差就??;如果許多數(shù)據(jù)點(diǎn)都遠(yuǎn)離平均值,則標(biāo)準(zhǔn)差就大。
實(shí)際上,足夠多重復(fù)次數(shù)產(chǎn)生的數(shù)據(jù)**形成大致的正態(tài)分布。這經(jīng)??赏ㄟ^(guò)經(jīng)典的中心極限定理來(lái)證明,該定理稱大量**同分布隨機(jī)變量的和在無(wú)限多時(shí)趨向于正態(tài)分布。如圖 8A 所示,約 68% 的值在平均值的 1 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi),約 95% 的值在平均值的 2 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi),約 99.7% 的值在平均值的 3 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi)。 江蘇lncRNA熒光定量PCR分析服務(wù)
江蘇lncRNA熒光定量PCR分析服務(wù)
實(shí)時(shí)熒光定量 PCR,又稱為定量 PCR 或 qPCR,可以為測(cè)定樣品中的靶標(biāo)序列或基因數(shù)量提供簡(jiǎn)單、簡(jiǎn)潔的方法。該方法高度簡(jiǎn)化,有時(shí)會(huì)忽略實(shí)現(xiàn)方法方面的關(guān)鍵因素,因此導(dǎo)致出現(xiàn)問題。本文將重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)設(shè)置和評(píng)估實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應(yīng)時(shí)必須考慮的這些因素。
江蘇lncRNA熒光定量PCR分析服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司成立于2003-01-22,是一家服務(wù)型的公司。公司業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]等,價(jià)格合理,品質(zhì)有保證。公司秉持誠(chéng)信為本的經(jīng)營(yíng)理念,在化工深耕多年,以技術(shù)為先導(dǎo),以自主產(chǎn)品為**,發(fā)揮人才優(yōu)勢(shì),打造化工質(zhì)量品牌。截止當(dāng)前,我公司年?duì)I業(yè)額度達(dá)到2000-3000萬(wàn)元,爭(zhēng)取在一公分的領(lǐng)域里做出一公里的深度。
文章來(lái)源地址: http://www.cdcfah.com/cp/258312.html
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